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61.
将编码人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pEX31A中,在大肠杆菌中表达出MS2/MCP-1融合蛋0白,该表达产物约占菌体总蛋白的15%左右,Westernblot检测表明,表达产物可与MCP-1抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明N端融合一段细菌蛋白对MCP-1有无趋化活性可能没有影响。 相似文献
62.
t-PA cDNA在CHO细胞中的高效稳定表达 总被引:1,自引:0,他引:1
我们曾报道t-PA mRNA非翻译区序列对其表达有明显的抑制作用,在此基础上,通过对5′-UTR及3′-UTR的改造,使t-PA在COS-7细胞中的表达水平提高30倍左右。将t-PA表达质粒用电击法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr),经过混合加压及筛选,在CHO细胞中高效表达了t-PA,表达水平达到5000~6000 IU/10~6细胞/24hr。重组t-PA具有与天然t-PA相同的分子量及酶活性。经过8个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的,其主要指标均符合工程细胞株的要求。 相似文献
63.
本文以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因作为目的基因,把包括PCNA基因5′端非翻译区(5′NTR)的24bp和编码38个氨基酸114 bp的顺序插入pTZ19R,构建与LacZ’5′端的融合基因。用寡核苷酸定点突变法在PCNA 5′NTR形成SD顺序,再用PCR法在SD顺序左右两侧分别随机突变6个和7个碱基,使它们与结构基因5′端顺序自发地形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化JM109(DE3),以T7 RNA聚合酶-T7启动子调控转录。对288个重组子的β-gal活性测定表明,不同重组的表达量可相差55倍,其中9个表达量不同的重组子的RNA dot blot证实它们在转录水平无明显表达差异。由此提示,该研究策略和方法能有效地改变目的基因的TIR二级结构和捕获具有高翻译起始效率的表达克隆。 相似文献
64.
天麻中抗真菌蛋白质的诱导和积累 总被引:13,自引:3,他引:10
前曾报告从天麻(Gatrodia elata Bl)中分离出一种对木霉丝生长有强抑制作用的蛋白质,命名为天麻抗真菌蛋白,简称GAFP,也称为Gastrodianin。对不同天麻材料来源的GAFP分析表明:GAFP的相对分量为14kD,等电点可能不同,变动范围8.1-9.3。体外抑菌试验证明GAFP对腐生性真菌如木霉如木霉和密环菌等有强抑制活性,半抑制浓度IC0.5为0.08mg/mL;对寄生免疫荧 相似文献
65.
旋毛虫肌幼虫ES抗原的基因克隆及高效表达 总被引:7,自引:0,他引:7
作者对编码旋毛虫肌幼虫ES抗原的部分结构基因进行了克隆、鉴定和表达。用RNA PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫总RNA中反转录并扩增出0.7kh的靶DNA,酶切分析后将其克隆到融合表达载体pEx3lC中。SDS—PAGE电泳表明,含重组子的大肠杆菌能够表达出一分子量为37kDa的融合蛋白(P37),后者占菌体总蛋白的22%以上,并以包含体形式存在于菌体中。经对纯化后表达蛋白的ELlSA检测,证明它能被猪旋毛虫病阳性血清和抗旋毛虫单克隆抗体识别。研究结果揭示,重组蛋白P37对于研制旋毛虫病诊断抗原和免疫抗原具有潜在的应用价值。 相似文献
66.
利用基因工程技术,将质粒pYX382用xbaI和EcoRl切下插入的TGFa—PE40融合
基因片段-连接到可表达载体pCB604的XbaⅠ/EcoR Ⅰ位点中,构建成新的重组质粒p2x—TP1。P2x—TP1转化E.coli BL2l感受志菌后,在ⅠPTG诱导下Ⅰpp启动子转录表达TGFα—PE40融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式沉积在细胞内。融合蛋白表达量的高低与诱导时的细胞密度,诱导的温度以及培养基有关。在一定范围内与诱导剂的剂量以及诱导时间的长短无关。P2x—TPl重组质粒在工程菌中的表达TGFα-PE40融合蛋白量约为50mg/L。 相似文献
67.
黄瓜几丁质酶的诱导,提取纯化及其基本性质(简报) 总被引:3,自引:0,他引:3
3周龄黄瓜幼苗经乙烯利处理后,诱导了几丁质酶活力。叶片提取液经20%和60%饱和度的两步硫酸铵沉淀,通过再生几丁质亲和层析后,纯化制备的SDS-PAGE显示单一谱带。酶学特性呈现pH2.7和pH7.1两个最适反应pH和50℃的最适反应温度。纯化的酶对几种病原菌的生长有一定的抑制作用。 相似文献
68.
真菌诱导物对滇紫草细胞色素形成的影响(简报) 总被引:2,自引:0,他引:2
在滇紫草细胞培养中加入真菌诱导物后紫草色素的合成增强,培养液的电导率和pH值在24h内分别下降和上升,且三者均以指数生长初期加入时作用最为明显。 相似文献
69.
小苍兰试管球茎的低温诱导 总被引:1,自引:0,他引:1
LowTemperatureInductionofFreesiaCormsinVitroHUANGMin-Ling,ChENShi-Lin(OrnamentalHorticulturalLaboratory,GujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013)1植物名称小苍兰(Freesiahybrida)品种“Aurora”2材料类别茎尖。3塔共条件将萌芽的球茎剥去外皮,用70%洒精消毒5min,再用0.l%HgCI。加入数滴吐温一80溶液消毒10min,无菌水冲洗3次,切取0.5~0.8cm的茎尖。以MS为基本培养基,(互)例芽诱导及增殖培养基为MS+BA3~4mg/L(单位下同)+NAA0.2~0.4,光强1000!X,温度24士ZC。(2)诱导试… 相似文献
70.
比较研究几种兼性和专一性CAM植物材料的PEPC同工酶表明:经自然干旱诱导,兼性CAM植物露花(Mesembryanthemumcordifolium)、长药景天(Sudumspectabile)有新的PEPC同工酶的出现,诱导前后各同工酶的天然分子量变化不大;而土三七(Sedumaizoon)则没有新的PEPC同工酶出现,但诱导后其同工酶的天然分子量有所增大。以上几种兼性CAM植物的PEPC同工酶酶谱无明显昼夜变化。专一性CAM植物的PEPC酶谱和天然分子量均较一致,亦无昼夜差异。 相似文献