蜕皮激素和有效霉素对粘虫几丁质合成酶B基因表达的影响

【目的】克隆粘虫Mythimnaseparata几丁质合成酶B基因的全长cDNA序列,研究该基因的时空表达特性,分析蜕皮激素(20-hydroxy ecdysone, 20 E)和有效霉素(Validamycin)对该基因表达水平的影响。【方法】本试验通过高通量测序法获得粘虫几丁质合成酶B基因的cDNA全长序列,利用RT-qPCR技术分析粘虫几丁质合成酶B基因在不同发育阶段和不同组织的特异性表达及蜕皮激素和有效霉素对其表达的影响。【结果】基因cDNA全长4 617 bp,包含一个完整开放阅读框,编码1个1 538个氨基酸组成的多肽,分子量为175.629 ku,理论等电点为5.96,包含17个跨膜螺旋,4个几丁质合成酶的标签序列CATMWHET,DGD,EDR和QRRRW及1个催化结构域。该基因命名为MsCHSB,GenBank登录号为KY348776。氨基酸序列比对表明,该基因与其他昆虫的几丁质合成酶B基因同源性高于52%,其中与蓓带夜蛾Mamestra configurata和棉铃虫Helicoverpa armigera的几丁质合成酶B基因同源性最高,分别为92%和83%。RT-qPCR技术表明粘虫在不同发育阶段和组织中均有mRNA的特异性表达,其中3龄第1天和中肠中MsCHSB基因相对表达量最高。注射10μg/μL浓度的蜕皮激素6 h和12 h后,表现为对该基因的诱导效应,与对照组差异显著;有效霉素处理后该基因相对表达量均被显著抑制,其中注射20μg/μL浓度的有效霉素48h后,抑制作用最为明显。【结论】本试验得到了一条新的粘虫几丁质合成酶B基因cDNA序列全长。蜕皮激素对MsCHSB基因的表达有一定的诱导作用,有效霉素对MsCHSB基因的表达有一定的抑制作用,该结果为进一步研究昆虫几丁质合成酶B打下了基础。     

Ohmefentanyl stereoisomers induce changes of CREB phosphorylation in hippocampus of mice in conditioned place preference paradigm

The present study was designed to determine the changes of phosphorylation of cAMP-response element binding protein(CREB)in hippocampus induced by ohmefentanyl stereoisomers(F9202 and F9204) in conditioned place preference(CPP)paradigm.The results showed that mice receiving F9202 and F9204 displayed obvious CPP.They could all significantly stimulate CREB phosphorylation and maintained for a long time without affecting total CREB protein levels.The effect of F9204 was similar to morphine which effect was more potent and longer than F9202.We also examined the effects of ketamine,a noncompetitive N-mthyl-D-asartate receptor(NR)antagonist,on morphine-,F9202-and F9204-induced CPP and phosphorylation of CREB in hippocampus.Ketamine could suppress not only the place preference but also the phosphorylation of CREB produced by morphine,F9202 and F9204.These findings suggest that alterations in the phosphorylation of CREB be relevant to opiates signaling and the development of opiates dependence.NR antagonists may interfere with opiates dependence and may have potential therapeutic implications.     

突触长时程增强形成机制的研究进展

高等动物脑内突触传递的可塑性是近30年来神经科学研究的热点,突触传递长时程增强（long-term potentiation,LTP)是神经元可塑性的反映,其形成主要与突触后机制有关。过去关于LTP机制的研究主要集中于N－甲基－D门冬氨酸（NMDA）受体的特征及该受体被激活后的细胞内级联反应,现认为脑内存在只具有NMDA受体而不具有α－氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体的“静寂突触（silent synapse)”,这一概念的提出,使人们认识到AMPA受体在LTP表达的突触后机制中的重要作用。     

铁介导的羟自由基对生物分子的损伤机理

活性氧在生物分子如ＤＮＡ,蛋白质及脂质等氧化性损伤中起着非常重要的作用,弱反应生的超氧阴离子自由基和过氧化氢转主为高反应活性的中间体如羟自由基时,过渡金属特别是铁的参与。本文综述了铁介导下羟自由基对生物化学及有关病理学机理具有一定的理论和应用意义。     

羟基脂肪酸聚酯制备与热性质研究

不同的碳源条件下,真养产碱杆菌可在胞内积累聚羟丁酸(PHB)或含羟基戊酸单体(HV)比例不等的聚羟丁戊酸共聚物(PHBv)。利用次氯酸钠,氯仿混合液体系提取上述羟基脂肪酸聚酯(PHA),提取率为85％,纯度达97．O％。以差示扫描热分析法对PHB和PHBV材料进行热性质研究,发现材料中的HV组分逐渐增加．材料的熔点Tm,熔化焓Hm逐渐下降。热分解峰值逐渐向低温区偏移。但含HV为6lmol％的PHBV材料有关热性质出现回升现象。     

铜锌超氧物歧化酶与过氧化氢反应中羟自由基的形成

应用脱氧核糖降解法研究了离体条件下Cu,Zn-SOD与H2O2反应产生·OH,并对其机理进行了探讨。H2O2可使Cu,Zn-SOD失活,在失活过程中有·OH产生,甲酸钠和苯甲酸钠均能不同程度地保护Cu,Zn-SOD和降低H2O2与Cu,Zn-SOD反应中·OH的产额;热失活SOD也可和H2O2反应生成·OH,且效能高于活性Cu,Zn-SOD;用螫合剂脱去Cu,Zn-SOD的金属辅基后,脱辅基的SOD蛋白不能和H2O2反应产生·OH;Cu2＋和H2O2反应产生·OH的效率很高,而Zn2＋产生·OH的效率很低。实验结果提示Cu,Zn－SOD与H2O2反应产生的·OH可能是SOD活性中心的Cu2＋与H2O2发生Fenton反应的结果．     

妥布霉素产生菌激光育种的研究

本文首次报道铜蒸气激光选育妥布霉素产生菌—黑暗链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｅｎｅｂｒａｒｉｕｓ）的研究结果。在相同实验条件下,铜蒸气激光辐照黑暗链霉菌比其随后又以氯化锂复合处理的选育效果好。在铜蒸气激光辐照后,曾获得实验高产株,发酵单位比对照未辐照组提高７２％。     

高产雷帕霉素的游动放线菌菌种的选育

以游动放线菌(Actinoplanes)BCLP-016为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对其孢子进行处理,并将三个不同时间处理的孢子悬液混合。稀释涂布后,根据菌株菌落形态挑取部分单菌落进行初筛,经发酵复筛后,筛选得到了一株雷帕霉素高产菌株ARTP-039,其雷帕霉素的产量可达到369.39mg/L,较出发菌株BCLP-016的产量256.86 mg/L,提高了43.81%。以筛选出的ARTP-039高产菌为出发菌株,进行传统的紫外诱变,选取高、中、低三个致死率相对应的时间对其孢子悬液进行处理,并基于核糖体工程的理论选取了链霉素、庆大霉素、利福平、氯霉素和红霉素五种抗性物质,进行抗性初筛。发酵复筛后,最终筛选得到了一株雷帕霉素高产菌株St8+Gen6+Rif9+Chl3+Er4-015,该菌株同时具有五种抗性。该菌株的摇瓶实验结果表明,发酵7d后,其雷帕霉素的产量可达到589.79mg/L,较出发菌株BCLP-016的产量,提高了129.61%,且其遗传稳定性良好。     

保元煎剂对疲劳大鼠自由基、乳酸、ATP的影响

目的:研究保元煎剂对疲劳大鼠力竭游泳时间以及ATP、羟自由基、乳酸含量的影响。方法:选用60只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、西洋参组、保元煎剂低、中、高剂量组。采用力竭游泳加睡眠剥夺建立复合疲劳大鼠模型,均予灌胃给药或蒸馏水(保元煎剂低、中、高剂量依次为1.04、2.08、4.15 g·kg-1·d-1;西洋参组给药量为0.27 g·kg-1·d-1),记录大鼠末次力竭游泳时间,检测疲劳大鼠血清ATP、羟自由基、乳酸含量。结果:与模型组比较,保元煎剂各组大鼠末次力竭游泳时间延长,ATP含量升高,羟自由基及乳酸含量下降,均有统计学意义,P0.05;与西洋参组比较,保元煎剂高剂量组末次力竭游泳时间延长、乳酸含量降低,保元煎剂高、中、低剂量组ATP升高,保元煎剂高、中剂量组自由基水平下降,均具有统计学意义,P0.05。结论:保元煎剂可提高疲劳大鼠力竭游泳时间,升高疲劳大鼠ATP含量,降低羟自由基、乳酸含量。     

结肠癌组织中p-p70S6K的表达及临床意义

目的:检测p-p70S6K在结肠癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:选取40例结肠癌组织蜡块以及40例同一患者的正常结肠组织蜡块进行免疫组化实验,其中又随机选取3组新鲜结肠癌组织和正常结肠组织,通过免疫印迹(Western blot)技术检测p-p70S6K在各组织中的表达情况。结果:在免疫组化实验中,癌组织阳性28例,阴性12例,阳性率为70%,正常结肠组织阳性14例,阴性26例,阳性率为35%,采用Pearson卡方检验,得出x2=9.825,P=0.0020.05,说明癌组织与正常结肠组织中p-p70S6K的表达差异有统计学意义;在免疫印迹实验中,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,重复试验三次,均显示目标蛋白(p-p70S6K)分子量约70 KD,癌组织中p-p70S6K表达较正常结肠组织明显增加,两组表达水平的比较采用t检验,得出P=0.0250.05,说明差异具有统计学意义。结论:p-p70S6K在结肠癌组织中异常表达,提示该分子在结肠癌的发生、发展过程中具有重要的调控作用,进一步的研究可为结肠癌的靶向治疗提供分子生物学基础。