O1或O139霍乱疫苗对异群霍乱缺乏交叉保护

O1和O139霍乱弧菌是引起急性腹泻的病原微生物,用这两群菌的灭活全菌体与重组霍乱毒素B亚单位构建的亚单位／菌体型疫苗免疫队CA小鼠,对本群菌的攻击可提供良好免疫保护,而对异群霍乱菌则缺乏交叉保护作用。     

蛇毒纤溶酶的一般药理作用

目的研究蛇毒纤溶酶的药理作用.方法分别以低、中、高三个剂量组(5.0、10.0、20.0u/kg体重)研究蛇毒纤溶酶对麻醉犬颈动脉收缩压、舒张压、平均压、心率、心电图各参数、呼吸频率与幅度、凝血时间及复钙时间的影响.结果蛇毒纤溶酶(5.0、10.0、20.0u/kg)对麻醉犬血压、心率、心电、呼吸频率及呼吸幅度均无明显影响;低剂量(5.0u/kg)组蛇毒纤溶酶对犬凝血时间及复钙时间无明显影响,但中高剂量组(10.0、20.0u/kg)蛇毒纤溶酶可明显延长凝血时间及复钙时间,中剂量组对复钙时间的影响恢复较快;蛇毒纤溶酶对小鼠一般行为,机能协调功能及阈下戊巴比妥钠催眠作用无明显影响;对神经系统无明显影响.结论蛇毒纤溶酶能明显延长血液凝固时间及复钙时间,对循环系统、呼吸系统和神经系统无明显副作用.是一种安全有效的抗凝血药物.     

重组霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多抗原表位融合蛋白对恒河猴的免疫保护作用研究

使用重组霍乱毒素B亚基（CTB）与恶性疟原虫抗原表位融合蛋白（AWTE）免疫恒河猴,研究其免疫应答并观察对食蟹疟原虫攻击的保护作用。结果表明：在0,14,28天分别通过鼻腔和肌肉注射免疫恒河猴,第3次免疫后2周,抗CTB抗体平均滴度可达1∶512（鼻腔免疫）和1∶10000（肌肉免疫）;肌肉免疫后抗疟原虫抗体滴度也显著高于鼻腔免疫组。用125×10⁸个食蟹疟子孢子攻击,对照组5只恒河猴在攻击后10～14d全部感染,其中1只在攻击后21d死亡,另4只重度感染,感染持续30d以上。鼻腔免疫组的5只动物均在攻击20d后出现原虫,其中3只轻度感染,感染持续4d后即恢复,其余2只感染持续36d以上。肌肉注射组3只未受感染,其余2只在攻击后19d后轻度感染,感染4d后即完全恢复。以上结果表明,使用霍乱毒素B亚基为载体蛋白构建的重组疟疾疫苗具有良好的免疫原性,对食蟹疟攻击具有良好的交叉免疫保护作用。     

乙肝病毒感染导致Mrell下调及基因组断裂

[目的]乙肝病毒的持续感染与肝细胞癌的发生密切相关.本文探讨了乙肝病毒感染后导致宿主蛋白Mrell的变化,并研究这种蛋白的变化可能导致肝癌发生的机制.[方法]本文通过Westernblot检测了乙肝病毒感染HL7702细胞及肝癌组织标本的Mrell蛋白的变化,并且通过RNA干涉的方法干扰了Mrell的表达,用连接介导PCR检测基因组的变化.[结果]本研究发现乙肝病毒感染细胞导致Mrell表达下调,肝癌组织也可以发现Mrell表达下调;下调Mrell表达可以导致细胞基因组的断裂增多.[结论]HBV感染导致Mrell表达下调导致基因组不稳定,这可能与HBV感染导致细胞恶性转化相关.     

SCT-OGP的融合表达与活性的初步研究

根据天然鲑鱼降钙素(Salmoncalcitonin,SCT)和骨生长肽(OsteogenicGrowthPeptide,OGP)的序列,人工合成了6个DNA片段,进行退火、连接和转化后,获得含有SCT与OGP融合基因的pPIC9-SCT-OGP表达载体,经测序后将此重组质粒电击转化毕赤酵母GS115,通过培养、筛选以及SDS-PAGE鉴定,在毕赤酵母中获得了SCT-OGP融合蛋白的可溶性表达,经分子筛纯化后在5kD左右可见单一条带。将此条带进行了N端氨基酸组分分析,证实此目的蛋白为SCT-OGP融合蛋白。MTT法显示SCT-OGP融合蛋白在体外可以促进成骨细胞和成纤维细胞增殖,以小鼠为模型的试验显示SCT-OGP融合蛋白在体内可以提高碱性磷酸酶活性和降低血钙,表明该融合蛋白具有抑制破骨细胞的活性和刺激成骨细胞增殖的活性,从而提示该融合蛋白具有治疗骨质疏松症的药用潜力。     

人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选

目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1。用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰TBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台。     

核酸质粒免疫后的基因定位

核酸疫苗免疫的一个安全性问题是核酸分子免疫接种后的去向。为探讨不同免疫途径及形式的核酸免疫后的基因表达部位,我们用克隆于ｐＣＭＶ载体的大肠杆菌β－半乳糖苷酸作为模型系统,不同途径免疫注射后,通过染色后的颜色来观察报道基因的表达水平以及分布,从结果来看,肌肉、腹腔、鼻腔注射裸ＤＮＡ或脂质体－ＤＮＡ２４ｈ后,蛋白可以在不同的组织中表达,表达水平与注射途径以及免疫方式有关。连续观察,在核酸注射等５ｄ后,