α—乙酰乳酸脱羧酶的研究进展及其应用前景

在啤酒酿造中,双乙酸（diacetyl）是影响啤酒风味成熟、熟化期长短的主要因素,当其含量超过阈值（0．15x10ed）时,产生令人难以接受的馊饭味．双乙酸主要是啤酒酵母代谢的产物,由a一乙酸乳酸（a－nnetoactate）经非酶氧化脱按产生,酵母的双乙酸还原酶将其还原成乙偶姻（ec     

自克隆技术在工业啤酒酵母改良中的研究概况

自克隆技术由于具有生物安全的优点,已成为对工业微生物、尤其是食品微生物进行遗传修饰的首选技术,简要介绍了自克隆技术在工业啤酒酵母菌种改良中的研究概况。     

酒酒球菌苹果酸-乳酸酶基因的测序及分析

苹果酸乳酸酶是乳酸菌进行苹果酸乳酸发酵(MLF)的关键酶。以携带酒酒球菌(Oenococcusoeni)优良菌系OenococcusoeniSD2a的苹果酸乳酸酶基因mleA的重组质粒pLmleA作为测序质粒,进行测序分析。测序结果表明,克隆到的mleA基因序列与已报道的序列同源性为99%。mleA基因序列中有2个碱基与报道不同,其中1614碱基的改变导致错意突变,编码的氨基酸由报道的Asp变为Glu,这一改变使得原有的BamHI位点不再存在。     

酒类酒球菌mleP基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

苹果酸通透酶具有协助苹果酸 乳酸发酵 (MLF)的重要功能。以酒类酒球菌 (Oenococcusoeni)优良菌系Oenococcus Lee SD 2a的总DNA为模板 ,用PCR方法克隆到苹果酸通透酶基因mleP ,构建了重组质粒pBMmleP。序列分析表明克隆到的基因序列与已报道的序列同源性为 99%。为使目的基因在酿酒酵母中表达 ,以大肠杆菌 酿酒酵母穿梭质粒YEp35 2为载体 ,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件 ,构建了重组表达质粒YEpmleP ,并转化酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)YS5 8。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。获得的转化子在添加了L 苹果酸 (5g L)的培养基中培养 4d ;取培养液上清用HPLC检测 ,结果显示重组转化子YSP的培养液中L 苹果酸剩余含量均低于空载体转化子YS35 2 ,因此所得酵母重组转化子对苹果酸的转运能力有所提高     

甾醇C-24甲基转移酶和甾醇C-8异构酶在酿酒酵母麦角甾醇生物合成中的调控作用

摘要：【目的】研究ERG6基因编码的甾醇C-24甲基转移酶和ERG2基因编码的甾醇C-8异构酶在酿酒酵母麦角甾醇生物合成代谢中的调控作用。【方法】通过PCR扩增克隆到酿酒酵母甾醇C-8异构酶的编码序列及其终止子序列,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,以磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pPERG2;同时,在本实验室已构建的ERG6表达质粒pPERG6的基础上,构建了ERG2和ERG6共表达的重组质粒pPERG6-2。将表达质粒转化酿酒酵母单倍体菌株YS58,依据营养缺陷互补筛选到重组菌株YS58(pPERG2)和YS58(pPERG6-2)。通过紫外分光光度法和气相色谱法分析重组菌株甾醇组分和含量。【结果】在ERG6高表达的重组酵母菌中,甾醇中间体和终产物麦角甾醇的含量均比对照菌高;而在ERG2高表达的酵母菌株中,无论甾醇中间体,还是麦角甾醇的含量均明显降低。ERG6和ERG2共表达重组菌株YS58(pPERG6-2)的麦角甾醇含量是对照菌株YS58(YEp352)的1.41倍,是ERG2单独高表达菌株YS58(pPERG2)的1.92倍,是ERG6单独高表达菌株YS58(pPERG6)的1.12倍。【结论】本研究首次证明甾醇C-24甲基转移酶催化的反应是酿酒酵母麦角甾醇合成代谢途径中的一个重要的限速步骤,该酶活性提高不但补偿了ERG2高表达对甾醇合成的负效应,而且使麦角甾醇含量进一步提高,为构建麦角甾醇高产酵母工程菌株提供了实验依据。     

酵母菌细胞完整性信号途径及其上游调控因子的研究

酵母菌是一类单细胞低等真核生物 ,其细胞壁是维持正常生命活动所必需的亚细胞结构 ,在决定细胞形态、维持细胞结构完整性、细胞的存活及胞内生理功能等方面起着重要的作用。细胞壁组成成分的合成、降解及结构的组装均受到严格的调控 ,既与细胞周期有关 ,又受外界环境条件的影响。它直接与外界环境相接触 ,感应环境条件的改变 ,从而使细胞内发生一系列适应环境变化的生物学过程。这种感应过程是通过细胞内外信号的传递实现的。酵母细胞中存在着多种信号传递系统 ,其中有丝分裂原激活蛋白激酶 (Ｍｉｔｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅ…     

絮凝基因(FLOIG)的序列测定及分析

虽然酵母细胞絮凝的确切机制至今尚无定论,但已克隆了多个与絮凝相关的基因,如FLOI、FLO5、FLO11等[1-3].这些基因的表达可以赋予非絮凝酵母细胞以絮凝能力.酵母细胞的絮凝特性在酿造工业、固定化酶、精细化工和物生制药等领域具有广泛的应用价值[4,5].从一株强絮凝酿酒酵母菌株中克隆到一个约4.3kb的NDA片段,酵母转化实验证明该DNA片段能够赋予非絮凝酵母菌株以絮凝能力[6].本文简要报道对该DNA片段进行序列测定和分析的结果.     

发酵法生产谷胱甘肽的研究进展

谷胱甘肽是一种含巯基活性三肽。简要综述发酵法生产谷胱甘肽中的菌种选育、发酵调控策略、提取及分离纯化等方面的研究进展。     

优良酿酒酵母（面包酵母）三倍体菌株的选育

通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株 zLFH-121,其生物量分别为原始亲株 BL68、BL92、L77 的 1.22、1.33 与 1.83 倍;絮凝性能明显优于原始亲株 BL68、BL92。并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株 zLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力。在优化的培养条件下,生物量提高至 93．82g／L (湿重),为初始培养条件下的 1.30倍。经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株 zLFH-121 遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株。     

苹果渣发酵生产饲料蛋白的工艺条件

采用经试验所筛选出的菌种组合,通过试验,获得了苹果渣发酵的适宜工艺条件：接种比例为１∶５-１∶１０,接种量１５-３０％ ,料水比１０∶７-１０∶８,ｐ Ｈ 值为６-７,发酵时间 ３-４ｄ,静止发酵料层厚度不超过３０ｍ ｍ 。发酵产物测定结果显示,粗蛋白含量达到２９３０％ ,提高了４５７７％ ,蛋白质含量达到２７５６％ ,提高了８２８８％ ,粗纤维含量降低了２３２７％ 。测定结果还进一步显示,所选菌种具有明显的脱毒作用,棉酚含量降低９０６３％ 。大部分氨基酸含量较发酵原料显著增加,蛋白质营养价值明显提高。