A New β-Estradiol-lnducible Vector Set that Facilitates Easy Construction and Efficient Expression of Transgenes Reveals CBL3-Dependent Cytoplasm to Tonoplast Translocation of CIPK5

Transient and stable expression of transgenes is central to many investigations in plant biology research. Chemical regulation of expression can circumvent problems of plant lethality caused by constitutive overexpression or allow inducible knock （out/down） approaches. Several chemically inducible or repressible systems have been described and successfully applied. However, cloning and application-specific modification of most available inducible expression systems have been limited and remained complicated due to restricted cloning options. Here we describe a new set of 57 vectors that enable transgene expression in transiently or stably transformed cells. All vectors harbor a synthetically optimized XVE expression cassette, allowing I~-estradiol mediated protein expression. Plasmids are equipped with the reporter genes GUS, GFP, mCherry, or with HA and Strepll epitope tags and harbor an optimized multiple cloning site for flexible and simple clon- ing strategies. Moreover, the vector design allows simple substitution of the driving promoter to achieve tissue-specificity or to modulate expression ranges of inducible transgene expression. We report details of the kinetics and dose-dependence of expression induction in Arabidopsis leaf mesophyll protoplasts, transiently transformed Nicotiana benthamiana leaves, and stably transformed Arabidopsis plants. Using these vectors, we investigated the influence of CBL （Calcineurin B-like） protein expression on the subcellular localization of CIPKs （Calcineurin B-like interacting protein kinases）. These analyses uncovered that induced co-expression of CBL3 is fully sufficient for dynamic translocation of CIPK5 from the cytoplasm to the tonoplast. Thus, the vector system presented here facilitates a broad range of research applications.     

雌性大熊猫发情期尿中17β—雌二醇与孕酮水平的变化及其与配种的关系

本文用放射免疫法测定了3头雌性大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)发情期尿中17β-雌二醇与孕酮水平的变化。大熊猫的发情行为与尿中17β-雌二醇浓度的变化密切相关。发情期中,随着孕酮水平下降的同时雌二醇水平却迅速上升并达峰值(28.2—65.5毫微克/毫克肌酐),然后再下降到基础水平。性活动最强烈的日期发生在17β-雌二醇最高峰值的当天或峰后一天。在雌二醇峰后,尿中孕酮水平逐步升高,发情后期的孕酮平均值显著高于发情前期(P<0.01)。本实验中,3头大熊猫均妊娠,说明自然交配或人工授精的适宜时间可根据雌性大熊猫尿中17β-雌二醇的监测予以确定。     

雌二醇对成年大鼠肺表面活性物质分泌的影响

采用离体非灌流肺模型,观察了雌二醇(E_2)对成年大鼠肺表面活性物质(PS)分泌的影响,并探讨了前列腺素(PG)在其中的作用。结果显示:E_2(10~(-6)mol/L)可使肺磷脂释放指数和肺磷脂释放量增多,分别为对照组的150.0％(P<0.05)及160.7％(P<0.01),表明E_2可促进成年大鼠PS的分泌;PG合成抑制剂消炎痛(10~(-5)mol/L)可以抑制E_2促进肺磷脂释放的效应,表明PG在E_2促进PS分泌中起介导作用。以上结果提示E_2可能参与成年动物PS分泌的调控。     

X线照射卵巢研究雌激素与免疫功能相关性的动物模型的建立

采用X线局部照射大鼠的双侧卵巢,建立了雌激素缺乏的大鼠动物模型。实验发现X线照射卵巢三个月后大鼠血清雌二醇(E_2)含量明显降低,大鼠淋巴细胞的增殖及其产生白细胞介素2(IL—2)的能力升高。统计学分析表明,大鼠血清E_2含量与大鼠淋巴细胞产生IL—2的能力呈负相关。     

雌激素对兔子宫内膜细胞EGF受体和细胞周期的调控

 由受体放射配基结合分析证明家兔子宫内膜细胞的EGF受体Kd值为0.53nmol/L,每个细胞的最大结合容量为1.11×10~4结合位点。10~(-10)mol/L雌二醇处理24h,细胞的最大结合容量增至2.75×10~4结合位点数/细胞,而Kd值无明显变化,可是,当10~(-5)mol/L雌二醇处理24h,细胞的EGF受体结合率,DNA合成速度率均下降。G_0/G_1期细胞比值明显下降,而G_2+M期和S期细胞明显上升。     

甾类雌激素叠氮化物与雌二醇17β-脱氢酶的激光亲和反应

以雌酮为原料,经过硝化、还原、重氮化及叠氮化钠处理,得到2-叠氮雌酮、4-叠氮雌酮、2-叠氮雌二醇和4-叠氮雌二醇。本文测定这四种叠氮衍生物作为雌二醇17β-脱氢酶底物的表观条件K_m依次为;1.75×10~(-4)mol/L、2.37×10~(-4)mol/L、1.39×10~(-4)mol/L、1.97×10~(-4)mol/L。在280nm波长激光照射下,它们均使雌二醇17β-脱氢酶失活,并遵循准一级动力学规律。如果这类亲和反应发生在雌激素依赖性肿瘤细胞内的雌激素酶或受体上,使酶或受体失去活性而不能发挥其正常的生理功能,可能会抑制肿瘤细胞的生长。用320nm波长激光照射时,四种化合物都没有使酶失活的作用。     

雌性川金丝猴的邀配行为与尿液雌二醇水平的关系

2001年10～12月及2002年9月～11月,我们对上海野生动物园一群半散养条件下的川金丝猴进行了研究,记录了群体内的4只成年雌猴的邀配行为,同时收集了观察对象的晨尿,利用放射免疫法测定其中的雌二醇含量。结果显示,在未受孕的月经周期内,雌猴的邀配行为集中在雌二醇高峰前后,雌猴在卵泡期和黄体期邀配频次显著下降,说明邀配行为受雌二醇水平的调控。同一群体内不同个体的月经周期并不同步,邀配高峰互不重叠,这可能是雌猴避免相互竞争产生的结果。利用雌二醇测定结果推断受孕日期,发现进入妊娠期后雌猴仍然频繁地向雄猴邀配,并得到雄猴的响应。妊娠期内的雌二醇水平虽有波动,但都高于月经周期内排卵前的雌二醇高峰,邀配频次与雌二醇水平没有明显的相关性,因此这一时期的邀配行为不能归结为激素作用的结果,它们应该具有其它社会功能[动物学报49(6)：736～741,2003]。     

环境激素睾丸酮和雌二醇对卜氏晶囊轮虫繁殖影响

采用生态学实验方法, 研究睾丸酮(Testoterone)和雌二醇(Estradiol)单一及组合对卜氏晶囊轮虫生命周期中主要发育阶段历时和种群增长率的影响。结果显示: 睾丸酮(T)的48h LC₅₀为9.56 mg/L, 直线回归方程为Y=1.98X+3.06 (R2=0.92); 雌二醇(E) 48h LC₅₀为8.18 mg/L, 直线回归方程为Y=3.53X+1.78 (R2=0.92)。除0.5 mg/L浓度组外, 睾丸酮和雌二醇均显著缩短轮虫平均寿命、减少后代幼体个数以及降低种群增长率(r)。其中8 mg/L睾丸酮与对照组相比显著延长轮虫生殖前期11.71%、平均寿命缩短52.22%, 后代个数减少82.20%; 8 mg/L雌二醇与对照组相比, 生殖前期显著延长7.10%, 平均寿命缩短49.75%, 后代个数减少83.33%。在2种激素定量组合(8 mg/L)实验中, 与对照组相比, 各实验组的生殖前期显著延长34.17%—48.01%, 平均寿命显著缩短31.56%—42.12%, 后代个数明显减少24.44%—80.33%; 第5天, 处理组T₆E₂、T₄E₄、T₈E₀、T₀E₈和T₂E₆的r值比对照组分别降低30.00%、37.14%、41.43%、60.00% 和65.71%。研究结果显示睾丸酮和雌二醇对卜氏晶囊轮虫生长发育及种群增长率有明显影响, 并且卜氏晶囊轮虫对雌二醇表现更为敏感, 2种激素呈现出协同作用。     

植物性雌激素genistein对哇巴因所致豚鼠乳头状肌迟后去极化及触发活动的效应

应用标准玻璃微电极技术,研究了植物性雌激素genistein(GST)对哇巴因所引起的豚鼠乳头状肌迟后去极化（DAD）及触发活动（TA）的效应,结果如下：（1）预先给予是GST（10,50,100umol/L)剂量依赖性地抑制哇巴因（1umol/L)所引起的鼠乳头状肌DAD及TA;（2）预先应用一氧化氮合酶抑制剂L－NAME（1mmol/L),不影响GST（50μmol/L）对DAD及TA的效应;（3）单独应用17β－雌二醇（E2,5μmol/L）或GST（10μmol/L）对DAD及TA无明显影响,而联合应用相同剂量的GST和E2则产生明显儿应,以上结果提示,GST可能通过抑制钙离子内流从而具有抗心律失常作用,这对于心血管系统的保护有一定意义。