维生素C和B_1对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究

目的探讨维生素C、B1联合用药拮抗铅对睾丸的毒性作用。方法 1.30只雄性小鼠随机分为2组(15只/组):空白对照组和铅染毒组。染铅组雄性小鼠每日腹腔注射醋酸铅20 mg/kg,空白对照组给予等容量的生理盐水,一日一次,第42日结束以上实验。将小鼠取血,用试剂盒检测血浆中谷胱甘肽的含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。将睾丸组织经过处理后,在光镜及透射电镜下观察睾丸组织结构变化;2.45只雄性小鼠随机分为3组(15只/组):空白对照组、铅染毒组和维生素联合干预组。染铅组雄性小鼠每日腹腔注射醋酸铅20 mg/kg,维生素干预组在染铅后,即时每组小鼠给予维生素C和维生素B1,一日一次,第42日结束。处死小鼠,取血,用试剂盒检测血浆中谷胱甘肽的含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。在光镜以及透射电镜下观察睾丸组织结构变化。结果1.与空白对照组比较,醋酸铅染毒组小鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)的水平降低,GSH/GSSG的比例降低,GPX活性升高,GR活性降低;光镜下睾丸组织生精小管变薄,各级生精细胞、支持细胞减少,部分细胞核出现核固缩;3.电镜下染毒组小鼠睾丸组织超微结构变化明显,支持细胞溶酶体增多,线粒体肿胀空泡化;2.与醋酸铅染毒组比较,维生素干预组小鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)的水平升高,GSH/GSSG的比例升高,GPx活性降低,GR活性升高;光镜观察结果:与染铅组相比,维生素B1和C联合干预组中破坏的睾丸生精上皮有所恢复;电镜观察结果:与染铅组相比,维生素B1和C联合干预组睾丸组织超微结构基本恢复正常,生精细胞和支持细胞结构正常,细胞器丰富。结果 1.醋酸铅使体内GSH的水平降低,GPX活性升高,GR活性降低,从而诱导氧化应激的发生,导致染铅小鼠睾丸的损伤;2.维生素干预组小鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)的水平升高,GSH/GSSG的比例升高,GPx活性降低,GR活性升高,维生素干预组小鼠血浆中氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽,从而发挥抗氧化作用,对小鼠睾丸起到保护作用。     

Epo/Epo-R在非小细胞肺癌中的表达和MVD关系及意义

目的探讨Epo/Epo-R在非小细胞肺癌中的表达和肿瘤微血管密度(MVD)关系及意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2008-2010年非小细胞肺癌存档蜡块40例(男28例,女12例),采用免疫组织化学S-P法检测40例非小细胞肺癌及癌旁组织中Epo/Epo-R的表达水平,并采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对Epo/Epo-R的表达进行定量分析,用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。同时检测肿瘤微血管密度(MVD),分析与临床病理之间的关系。结果 Epo/Epo-R在非小细胞肺癌中的表达明显高于癌旁组织。图像分析结果显示:两组间差异有显著性意义(P<0.05)。Epo/Epo-R表达阳性组织中,MVD计数显著高于Epo/Epo-R表达阴性者(P<0.05)。结论 Epo/Epo-R在非小细胞肺癌中呈高表达,并与微血管密度(MVD)密切关系,联合检测Epo/Epo-R和MVD更有利于正确判断疾病的临床病理特征及其预后。     

内源性硫化氢对慢性应激结肠高动力的影响

本文旨在探讨内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)与慢性应激大鼠结肠高动力的关系。大鼠随机分为慢性避水应激(water avoidance stress,WAS)组和假避水应激(sham water avoidance stress,SWAS)组,记录大鼠每日1 h应激期间大便粒数,连续10 d;分别制作结肠平滑肌条,使用生物机能实验系统记录两组肌条自发性收缩活性以及SWAS组H2S合成酶抑制剂预处理后收缩活性;测定结肠内源性H2S的产生浓度;采用免疫组化和Western blot等方法观察结肠内源性H2S合成酶分布及表达。结果显示,WAS组大鼠应激期间大便粒数、结肠肌条收缩的曲线下面积(area under the curve,AUC)均高于SWAS组(P0.05);WAS组结肠内源性H2S产生量明显低于SWAS组(P0.001);H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)在纵行肌条和环形肌条细胞浆、肌间神经元细胞核中强表达,胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)主要表达于肌间神经元胞浆;与SWAS组相比,WAS组大鼠结肠(去除粘膜及粘膜下层后)CBS和CSE的表达下调(P0.001);H2S合成酶抑制剂明显增加SWAS组肌条收缩的AUC(P0.001)。以上结果表明,内源性H2S合成酶表达下调、H2S合成减少是慢性应激结肠高动力的原因之一。     

纳洛酮治疗慢性阻塞性肺病合并II型呼吸衰竭患者临床疗效研究

目的：探讨纳洛酮治疗慢性阻塞性肺病合并II型呼吸衰竭患者血清降钙素原、炎症因子的改变及临床疗效。方法：收集2013 年5 月至2014 年9 月来我院治疗的COPD合并II 型呼吸衰竭患者60 例,根据治疗方法不同随机分为对照组和观察组,对照组 给与常规治疗,观察组在常规治疗的基础上给与纳洛酮治疗。记录两组患者在治疗前后静脉血PaCO2、PaO2的变化以及临床疗 效。采用Elisa 法检测两组患者在治疗前后血清PCT、TNF-琢、IL-6 含量的变化,并用RT-PCR 法检测两组患者在治疗前后血清 PCT、TNF-琢、IL-6 DNA 的改变。结果：观察组患者在治疗前静脉血PaCO2的值为81.3± 9.4 mmHg,治疗后下降为45.4± 5.3 mmHg,PaO2由49.6± 3.9 mmHg 上升至81.3± 5.9 mmHg,均优于对照组,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;临床总有 效率为85.7%,高于对照组的68%,且差异有统计学意义（P＜ 0.05）。ELISA 检测结果显示,两组患者在治疗后,血清PCT,CRP、 IL-6 含量均显著下降,且观察组下降程度高于对照组,RT-PCR 检测结果与ELISA检测结果相一致。结论：纳洛酮治疗COPD 合 并II型呼吸衰竭的临床疗效显著,能有效的提高PaO2,降低PaCO2,且能有效的减缓炎症反应的加重。     

不同剂量柚皮素对FADU细胞生长的调节及机制研究

目的:探究不同剂量柚皮素(naringenin)对人下咽癌FADU细胞的作用及其相关机制。方法:以不同剂量(0、100、200、400、800μg/m L)柚皮素对FADU细胞进行处理,倒置显微镜观察细胞形态学变化;cck-8法检测药物作用后不同时间(24、48、72 h)FADU细胞增殖的变化;流式细胞仪检测柚皮素作用48 h细胞凋亡的变化;采用Transwell趋化小室体外侵袭实验测定48 h后细胞的侵袭能力的变化;蛋白免疫印迹法检测48 h后细胞内PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响。结果:cck-8法检测发现柚皮素抑制FADU细胞增殖作用明显,呈浓度和时间依赖性;流式细胞结果发现200,400,800μg/m L柚皮素作用48 h后,FADU细胞的凋亡率显著增高,差异有统计学意义(P0.05)。Transwell体外侵袭实验发现,随着柚皮素浓度增加,FADU细胞穿透聚碳酸酯滤膜的能力逐渐减弱,柚皮素有效的抑制FADU细胞在体外的侵袭能力,呈浓度依赖性。同时,蛋白免疫印迹法凋亡相关蛋白检测结果表明,FADU细胞内BCL2、P-AKT和P-PI3K蛋白表达均受到明显抑制。结论:柚皮素能有效抑制人下咽癌FADU细胞的增殖、体外侵袭能力,诱导细胞凋亡;其机制与下调PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达有关。     

NF-kB 和TGF-beta1在超声乳化术治疗的白内障患者结膜上皮细胞中的表 达及其意义

目的：探讨NF-kB 和TGF-beta1 在超声乳化术治疗的白内障患者结膜上皮细胞中的表达及其意义。方法：选取我院眼科收治 的白内障患者24 例,共24 眼,且均接受超声乳化白内障摘除术和后房型人工晶状体植入术治疗。在治疗前和治疗后15天、30 天,采用免疫组织化学法检测患者结膜上皮细胞中NF-kB 和TGF-beta1 的表达,并进行泪液分泌试验、荧光素染色、泪膜破裂时间 和泪河高度测量四项检查。结果：NF-资B 和TGF-茁1 呈现先增强后减弱的趋势,与术前相比,术后15 天患者NF-kB 和TGF-beta1 染 色程度显著增强,差异具有统计学意义,(P<0.05);与术后15 天比较,术后30 天NF-kB 和TGF-beta1 染色程度减弱,差异具有统计 学意义,(P<0.05);与术前相比,术后15 天泪膜破裂时间较术前明显缩短,荧光素染色明显增强;与术前相比,术后30 天四项检查 结果无差异,P＞0.05。结论：超声乳化手术可提高白内障患者结膜上皮细胞中NF-kB 和TGF-beta1的表达,与术后眼膜的炎症反应 有关。     

关闭盆底腹膜在腹腔镜直肠癌Miles根治术中的意义

目的:探究关闭盆底腹膜在腹腔镜直肠癌Miles根治术中的意义。方法:选取2012年3月至2014年3月我院治疗的拟行腹腔镜直肠癌Miles根治术患者48例,按随机数字法分为观察组和对照组各24例,观察组在腹腔镜Miles根治术后关闭盆底腹膜,而对照组则不关闭。比较两组手术时间、骶前引流总量、切口感染率及肠梗阻发生率。结果:观察组的手术时间较对照组长(t=5.207,P=0.000),但两组的骶前引流总量、切口感染率和肠梗阻发生率差异无统计学意义(P=0.210、1.000、0.602)。观察组术后分别有3例(12.50%),对照组有2例(8.33%)患者因肿瘤复发而采取放射治疗,其中仅对照组2例患者出现放射性小肠炎。结论:是否关闭盆底腹膜在腹腔镜直肠癌Miles根治术术后疗效差异不大,但关闭盆底腹膜可有效预防术后放射性治疗中放射性小肠炎的发生。     

大肠杆菌质粒的快速提取

质粒的提取是生物学中的常规技术之一 ,但常规法提取质粒十分复杂 ,繁琐并且费时。国外公司的试剂盒大大简化了此过程。但价格使国内大多数实验室难以承受。我们利用自制的玻璃粉提取质粒 ,大大简化了提取过程 ,同时相对于进口试剂盒而言 ,实验成本也大大降低     

缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

目的：探讨缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：制备缺血预处理（IP）和缺血再灌注损伤（I／R）模型,采用末端标记技术（TUNEL）检测心细胞凋亡,应用免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达,结果：缺血再灌注组心肌细胞凋亡率明显比正常对照组高（P＜0．05）,而缺血预处理组心肌细胞凋亡率明显比缺血再灌注组低（P＜0．05）,缺血再灌注组Bcl-2表达阳性细胞率明显比正常组低（P＜0．05）,而缺血预处理组Bcl-2表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组高（P＜0．05）。缺血再灌注组Bax表达阳性细胞率明显较正常组高,而缺血预处理组Bax表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组低（P＜0．05）。结论：缺血再灌注可诱导心肌细胞凋亡,缺血预处理可减少心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡发生中起重要作用,缺血预处理可上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达。     

RNA干扰非特异性研究进展

RNA干扰(RNAi)靶向基因治疗是目前研究的热点,其依赖序列特异性的基因表达调节为生物学发展带来重大突破.然而在应用RNAi时所产生的一系列非特异性反应阻碍了RNAi进一步的临床应用,这其中主要包括脱靶基因抑制和内在免疫副反应等.主要从非特异性反应的产生机制、脱靶效应的预测和RNAi非特异性的控制3个方面对近几年研究成果进行综述,探讨临床应用前景.