支气管哮喘患儿肺功能状态及Th1Th2指标的变化观察

目的:观察支气管哮喘患儿肺功能状态及Th1Th2指标的变化情况。方法:选取2013年10月~2015年8月本院诊治的65例支气管哮喘患儿为观察组,另选择同期接受体检的健康同龄儿童65名为对照组。比较两组患儿肺功能状态及Th1Th2指标,观察不同严重程度及分期支气管哮喘患儿的肺功能状态及Th1Th2指标。结果:观察组患儿肺功能指标及血清Th1Th2指标均低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组患儿发作期肺功能指标及血清Th1Th2指标明显低于缓解期,差异具有统计学意义(P0.05);重度患儿肺功能指标及血清Th1Th2指标均低于轻度及中度患儿,差异具有统计学意义(P0.05);中度患儿肺功能指标及血清Th1Th2指标低于轻度患儿,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:支气管哮喘患儿肺功能状态及Th1Th2指标的变化较大,且疾病分期与疾病严重程度对其检测结果也有较大影响。     

利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9敲除microRNA 505的小鼠进行鉴定

利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9系统敲除的micro RNA 505小鼠进行鉴定,能快速检测出敲除小鼠的基因型,有效加快敲除小鼠基因功能验证的进程。首先,在Crispr/Cas9系统敲除的基因位点区域设计PCR引物,并在上游引物的5′端使用羟基荧光素(5-carboxyfluorescein,FAM)荧光修饰。模板经过PCR的扩增后,将PCR产物与已知片段大小的6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯(6-carboxy-X-rhodamine,ROX)混合,在377测序仪上通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。随后,根据相对分子质量内标法计算出PCR产物大小,从而达到鉴定小鼠基因型的目的。将上述荧光PCR技术应用于实践发现,两只奠基鼠、16只F1代小鼠以及26只F2代小鼠都能得到准确的鉴定,其中包括microRNA 505基因区段被敲除了17 bp和23 bp。因此,利用荧光PCR技术可以快速、准确地鉴定Crispr/Cas9敲除小鼠。     

利用慢病毒介导的shRNA在GT1-7细胞中敲低Srsf1及其对GnRH、Kiss1的影响

目的:探讨慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)敲低丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(Srsf1)基因对小鼠GT1-7细胞中性发育相关基因促性腺激素释放激素(GnRH)、Kiss1的影响。方法:实验分为3组,即空白对照组、阴性对照组及shRNA干扰组。用Srsf1 shRNA慢病毒稳转GT1-7细胞,Real-time PCR和Western blot检测GT1-7细胞中Srsf1在mRNA和蛋白水平的变化,并检测稳转株中GnRH、Kiss1基因的表达情况。结果:慢病毒介导的shRNA成功感染了GT1-7细胞,与空白对照组及阴性对照组相比,shRNA干扰组中Srsf1在mRNA水平降低了45%(P0.001),在蛋白水平敲低了42%(P0.05)。在稳定低表达Srsf1的GT1-7细胞中,GnRH、Kiss1基因在mRNA水平也显著降低(P0.05)。结论:成功的构建了Srsf1基因敲低的细胞株。在GT1-7细胞中敲低Srsf1基因会抑制GnRH、Kiss1基因的表达。     

qPCR array检测高糖对胆固醇合成基因表达的影响

目的:高血糖易引起胆固醇在体内积聚,增加糖尿病合并动脉粥样硬化性心血管疾病的患病风险。本文通过建立稳定的实时定量PCR芯片(Real-time quantitative polymerasechain reaction array,qPCR array)检测方案,研究高糖对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胆固醇合成基因表达的影响,探讨胆固醇合成基因在糖尿病大血管并发症发展中的作用机制。方法:以不同浓度葡萄糖(5、15、30mmo/L)和不同时间(0、6、12、18、24 h),刺激肝癌细胞Hepa1-6,利用qPCR array检测其胆固醇合成基因的表达差异。结果:与5mmol/L相比,高糖组(15、30 mmo/L)处理细胞18 h后,胆固醇合成基因CYP51、EBP、NSDHL、SQLE、FDFT1和PMVK的表达上调(P0.05),呈现剂量依赖性。与0 h相比,15 mmol/L高糖处理细胞12 h,CYP51、EBP和SQLE mRNA表达量上调(P0.01)。至24 h,CYP51、EBP降至0 h水平,而SQLE的表达量继续增加;NSDHL在12 h表达无差异,至18 h表达量发生上调(P0.05)。结论:该qPCR array检测方案能特异性检测胆固醇合成基因的表达量。高糖能够促进胆固醇合成基因的表达,使细胞内胆固醇积聚,这可能是糖尿病患者容易发生动脉粥样硬化的原因。这提示我们将胆固醇合成基因作为药物靶点可能延缓糖尿病动脉粥样硬化进展。     

辽河口湿地植物多样性及物种功能型空间分布格局

辽河口湿地是我国典型的滨海湿地, 在过去几十年受人为过度干扰, 植被变化明显。本研究拟通过野外实地调查揭示辽河口湿地植物多样性及功能型的空间格局。结果表明, 潮上带的物种丰富度和Shannon-Wiener指数均高于潮间带。与潮上带相比, 潮间带的盐生植物与湿生植物比例较高, 而中性植物、甜土植物、中生植物与旱生植物的比例较低。物种丰富度、Shannon-Wiener指数以及中性植物、甜土植物、中生植物、旱生植物的比例均随着与海岸线距离的增加而增加, 盐生植物、湿生植物比例则与之相反。对所调查样地与植物物种的主成分分析(PCA)表明, 潮上带主要为芦苇(Phragmites australis)、刺儿菜(Cirsium setosum)、山莴苣(Lagedium sibiricum)等中性和甜土植物, 潮间带为盐地碱蓬(Suaeda salsa)、扁秆藨草(Scirpus planiculmis)、水烛(Typha angustifolia)等盐生植物。可见, 盐度与水位是决定辽河口湿地植物多样性及物种功能型的关键生态因子。     

不同剂量及注药方向罗哌卡因对肛肠手术麻醉效果的影响

目的:研究不同剂量及注药方向罗哌卡因对肛肠手术麻醉效果的影响及安全性。方法:选择2015年1月~2016年12月在我院进行肛肠手术治疗的患者148例,按照麻醉方法的不同分为四组,每组各37例,即罗哌卡因8 mg向头注药组、罗哌卡因8mg向尾注药组、罗哌卡因10 mg向头注药组以及罗哌卡因10 mg向尾注药组。比较四组患者的感觉阻滞恢复时间、感觉阻滞起效时间以及运动阻滞恢复时间及恶心呕吐、尿潴留、腰部不适、头痛等术后不良反应的发生情况。结果:罗哌卡因10 mg向头注药与向尾注药的感觉阻滞起效时间比较差异均无统计学意义(P0.05),10 mg向头注药组的运动阻滞恢复时间明显短于10 mg向尾注药组(P0.05),以10 mg向头注药组感觉阻滞恢复时间最短(P0.05),8 mg向尾注药比10 mg向尾注药阻滞起效明显减慢(P0.05),运动以及感觉阻滞恢复时间均明显缩短(P0.05),10 mg向头注药组的感觉阻滞起效时间明显短于8 mg向头注药组(P0.05),运动以及感觉阻滞恢复时间均明显延长(P0.05)。四组均未发生恶心呕吐以及头痛等术后不良反应,罗哌卡因8 mg向尾注药组的尿潴留以及腰部不适的发生率均明显低于其他三组(P0.05)。结论:向尾端迅速注射罗帕卡因8 mg进行蛛网膜下隙阻滞对肛肠手术患者的麻醉效果最好,且安全性最高。     

二代测序应用于检测GT1-7细胞中KISS1和GnRH启动子的DNA甲基化状态的研究

目的:利用二代测序技术检测GT1-7细胞中KISS1和GnRH基因启动子范围内的甲基化状态,并用金标准的亚硫酸氢盐修饰后的克隆测序作为对照,比较二代测序与金标准克隆测序在研究DNA甲基化检测中的差别。方法:提取GT1-7细胞基因组DNA并进行亚硫酸氢盐处理。进行巢式PCR,将PCR产物进行二代测序。同时采用金标准的亚硫酸氢盐修饰后克隆测序的方法作为对照,对相同批次的PCR产物进行克隆测序。结果:PCR产物二代测序结果表明KISS1和GnRH两个基因的27个CpG甲基化位点信息完整,结果准确。挑取10个克隆进行一代测序结果表明序列无丢失,KISS1和GnRH两个基因的27个CpG甲基化位点信息完整。结论:利用高通量的二代测序技术能够有效的对DNA甲基化的PCR产物进行检测,二代测序和克隆测序都是研究DNA甲基化的有效方法,但前者与克隆测序相比每一个读取序列(reads)都相当于一个单克隆,且二代测序每个区段得到成百上千个reads,因此二代测序结果更加精确。     

棕尾别麻蝇金属硫蛋白的分离纯化及性质分析

将棕尾别麻蝇Boettcherisca peregrina幼虫置于含800 μg/g CdCl₂的食物中取食48 h后,可诱导金属硫蛋白(MT)的合成。诱导处理后的幼虫匀浆上清液经Sephadex G-50分子筛柱、UNO^TM Q1阴离子交换柱和Bio-Gel P-6脱盐柱层析,纯化得到2个亚型,即MT-Ⅰ和MT-Ⅱ。MT-Ⅰ和MT-Ⅱ的分子量均为9 kD,每蛋白分子均含7个Cd和20个巯基,且具254 nm的Cd-SH特征吸收肩。两者的氨基酸组成中,以半胱氨酸含量最高,分别为36.6%和31.8%;而芳香族氨基酸和组氨酸含量甚少,约1%～2%。     

基于林分昆虫多样性调查的传统灯诱法改进效果分析

昆虫在生物多样性调查中具有不可替代的地位，灯诱法是效率最高的昆虫采集方法之一，然而传统的灯诱方法存在诱集范围无法界定、采样流程标准性不足等问题。为此，使用自制的聚光灯诱箱（Spotlight Box Trap，SBT）作为改进灯诱方法，并使用灯诱帐（Moth Collecting Tent，MCT）作为传统灯诱法进行对照；以北京杨（Populus×beijingensis）与油松（Pinus tabuliformis）人工林为样地，对两种灯诱装置采集的蛾类数量及物种组成、物种多样性指数与形态参数等多个指标进行评价。共采集蛾类24科164种6728号，其中北京杨林分SBT采集19科93种1164号，MCT采集22科125种2573号；油松林分SBT采集21科87种1044号，MCT采集22科117种1947号。分析显示：（1） MCT采集的个体数量与物种数量均高于SBT，总体上SBT在不同样地间的数据误差水平更低。（2）两种灯诱装置采集的蛾类优势种组成显著不同（P<0.05）；SBT共有种的数量比例始终高于MCT，即后者的特有种占比例更高。（3）总体上SBT物种多样性指数的数据误差水平更低。（4） MCT采集的蛾类物种体型更大（体长约为SBT的1.20倍）、飞行能力更强（相关参数约为SBT的1.20倍至1.36倍）。结果表明，在林分昆虫多样性的调查中，传统灯诱法的数据稳定性较差，对林分的代表性不足。聚光灯诱箱因其对光域的可控性和采集昆虫的规范性，具备更高的稳定性，在森林昆虫多样性调查与监测中具有更好的适用性与应用前景。     

新生儿短肠综合征的肠内营养研究进展

从喂养方式、喂养过程、营养成分、护理重点等多方面综述新生儿短肠综合征肠内营养的研究进展,并结合患儿的实际病情以及实验室检查结果等指标,提出对患儿进行持续性的肠内营养支持的具体做法：（1）在现实情况允许的条件下,保证用母乳喂养患儿,无法提供母乳的情况下合理配比奶粉,并根据实际需要添加一些纤维和脂类的补充剂,保障患儿健康发育;（2）在给予肠内营养的过程中全程无菌化处理,调节适宜的温度,合理选择药物;（3）应用大规模对照试验方式,通过大数据对比总结出持续肠内营养对短肠综合征患儿的影响,为儿科护理工作提供科学依据。