| 利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9敲除microRNA 505的小鼠进行鉴定 |
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| 引用本文： | 仝莉,王茂春,李雨,李凯,周宇荀,肖君华,金力.利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9敲除microRNA 505的小鼠进行鉴定[J].生命科学研究,2016(4):296-300,308. |
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| 作者姓名： | 仝莉 王茂春 李雨 李凯 周宇荀 肖君华 金力 |
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| 作者单位： | 东华大学环境科学与工程学院;东华大学化学化工与生物工程学院;复旦大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31371257);上海市科委关键项目(12140900404,14140900502) |
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| 摘 要： | 利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9系统敲除的micro RNA 505小鼠进行鉴定,能快速检测出敲除小鼠的基因型,有效加快敲除小鼠基因功能验证的进程。首先,在Crispr/Cas9系统敲除的基因位点区域设计PCR引物,并在上游引物的5′端使用羟基荧光素(5-carboxyfluorescein,FAM)荧光修饰。模板经过PCR的扩增后,将PCR产物与已知片段大小的6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯(6-carboxy-X-rhodamine,ROX)混合,在377测序仪上通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。随后,根据相对分子质量内标法计算出PCR产物大小,从而达到鉴定小鼠基因型的目的。将上述荧光PCR技术应用于实践发现,两只奠基鼠、16只F1代小鼠以及26只F2代小鼠都能得到准确的鉴定,其中包括microRNA 505基因区段被敲除了17 bp和23 bp。因此,利用荧光PCR技术可以快速、准确地鉴定Crispr/Cas9敲除小鼠。
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| 关 键 词： | Crispr/Cas9系统 荧光PCR技术 基因型鉴定 microRNA 505敲除小鼠 |
Genotyping of MicroRNA 505 Knockout Mice by Crispr/Cas9 Using Fluorescent PCR |
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| TONG Li;WANG Mao-chun;LI Yu;LI Kai;ZHOU Yu-xun;XIAO Jun-hua;JIN Li.Genotyping of MicroRNA 505 Knockout Mice by Crispr/Cas9 Using Fluorescent PCR[J].Life Science Research,2016(4):296-300,308. |
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| Authors: | TONG Li;WANG Mao-chun;LI Yu;LI Kai;ZHOU Yu-xun;XIAO Jun-hua;JIN Li |
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| Institution: | TONG Li;WANG Mao-chun;LI Yu;LI Kai;ZHOU Yu-xun;XIAO Jun-hua;JIN Li;College of Environmental Science and Engineering,Donghua University;College of Chemical Engineering and Biotechnology,Donghua University;School of Life Sciences,Fudan University; |
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