介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法

介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物,以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接;加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速,可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内．     

禄丰古猿幼年下颌骨的研究

本文记述了１９８０年在云南省禄丰县石灰坝村禄丰古猿地点发现的最晚中新世禄丰古猿的幼年下颌骨ＰＡ８６９。作者将此标本与西瓦古猿的,南方古猿的和现生大猿的幼年下颌进行了对比,记述了禄丰古猿幼下年颌的若干特征,这些特征表明禄丰古猿幼年下颌体各部主要尺寸的比例关系本种成年的十分相似。     

人珠蛋白信使核糖核酸的制备及其体外翻译

本文以新生儿ABO血型不配溶血换得的血网织红细胞为材料,用酚-氯仿提取及Oligo(dT)纤维素亲和层析制备了人珠蛋白mRNA。并在变性条件下经琼脂糖凝胶电泳鉴定,证明它是9～10S的RNA。人珠蛋白mRNA在兔网织红细胞溶解物与麦胚体外翻译体系中的翻译活性与其浓度均有依赖关系。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳及萤光显影鉴定了无细胞体系的翻译产物为人珠蛋白;并以醋酸纤维膜电泳分析了体外合成的人珠蛋白肽链组成,结果表明新生儿血中珠蛋白mRNA合成的α、β、γ珠蛋白肽链之比为3:1:2。     

非缺失型α地中海贫血基因的克隆化分离

从一例基因型为αα~T/—的血红蛋白H病患者的手术切除脾制备了染色体DNA,用BamHⅠ水解后,回收14±1kb的DNA片段,作为插入体。以λEMBL_4噬菌体经非超离心法制备基因组DNA作为替换载体。经BamHⅠ水解回收左右臂,与α地贫脾DNA 14kb片段连接,包装、传染后,得10~4—10~5重组噬菌体/μg。以人α珠蛋白基因特异的探针作Benton原位杂交,M4×10~3克隆中筛出两个含α珠蛋白基因序列的克隆株。其中一株扩增后制备的重组DNA经酶解图谱及Southern印迹杂交鉴定,中间可替换部分含有14kb的人α珠蛋白基因组DNA。从而在我国首次从中国地贫病人中,以基因工程的方法,分离了克隆化的非缺失型α地贫基因,为研究其结构与功能打下了重要基础。     

~(35)S标记探针检测人类单拷贝基因

应用改进的缺口翻译方法,将α-~(35)S-dATP参入DNA分子,获得了>10~8dpm/μgDNA的高比度~(35)S标记探针。用其做Southern吸印杂交探测人类单拷贝基因组织,放射自显影4～10天,能够得到满意的力谱。与~(32)P相比,~(35)S具有半衰期长,无辐射伤害,价格便宜等优点。     

霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析

构建了霍乱毒素B亚单位(choleratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15％SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的30％。含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性。同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的高级结构,具有生物活性。     

双季晚稻田大面积放养固氮蓝藻的试验

通过晚稻田大面积放养固氮蓝藻试验,我们初步提出了土池大量培养和茬口田大面积生产藻种等一系列的培养和生产藻种的技术措施;生产了30吨的鲜藻种接种到晚稻田中。经过加强管理,先锋大队990亩晚稻田全部养藻化。接种的藻生长旺盛,平均产量达到1000斤/亩以上。抽样测产估计,晚稻田中鲜藻量达到500吨。晚稻田养藻使水稻增产约10%,个别达到20%以上。因此,晚稻田放养固氮蓝藻为晚稻开辟了新的有希望的肥源。       

禄丰古猿下颌恒齿萌出顺序的研究

本文分析了禄丰古猿不同年龄的次成年下颌标本上各齿种萌发的情况，得出其下颌恒齿的萌出顺序为Ｍ１Ｉ１Ｉ２Ｍ２Ｐ３Ｐ４ＣＭ３。这种萌序与类人猿的相一致。     

甲状腺机能状态对甲状腺及血浆游离酪氨酸含量的影响

本工作研究了不同机能状态的甲状腺和游离酪氦酸合量变化之间的关系。主要结果如下:(一)在硫尿嘧啶和小剂量碘作用下,甲状腺呈机能亢进的组织学图相,在大剂量碘的作用下形成机能低下的图相。(二)在硫尿嘧啶和小剂量碘的作用下,甲状腺内的游离酪氨酸含量(以每单位组织算)显著减少,而血浆的游离酪氨酸浓度增高。(三)用大剂量碘饲养的动物的甲状腺的酪氨酸合量(以每单位组织算)升高,血浆的酪氨酸浓度降低。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌是引起全球所有年龄组高发病率和病死率的主要病原菌。目前投入使用的有23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗。荚膜多糖疫苗有许多局限性,蛋白结合疫苗是对其改进,但也不能完全取代它。两者都具有一定效力和良好的安全性,其中蛋白结合疫苗具有更好的免疫原性。此外,其他多价结合疫苗也已进入临床试验阶段。蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗、活疫苗也在研制和开发中。