高盐含油废水中微生物筛选及系统发育研究

对舟山港口的油轮冲洗水样品嗜盐微生物进行筛选,得到7株菌株,其中DG30-2b、T37-2b和DG30-3b对体积分数为1.0%的稠油降解效果较好,降解率分别为28.5%、24.1%和18.7%。这3株菌分别为Bacillus cereus(蜡状芽胞杆菌)、Lysinibacillus xylanilyticus(木糖短小芽胞杆菌)和Thauera aminoaro-matica(氨基脂陶厄氏菌)。对这3株菌进行了降解条件优化,发现其在原油中的最适降解温度均为30℃,最适pH为7.0,最适原油降解浓度为体积分数0.5%。菌株DG30-2b和T37-2b的最适降解盐度均为质量分数2.0%,而菌株DG30-3b最适降解盐度为质量分数3.0%。将该3株菌按照体积比1:1:1混合后组成DGT菌群,对体积分数为1.0%的石油污染的土壤进行处理,并进行GC/MS色谱测定后,对污染物的迁移规律做了初步分析,结果显示C25以上的烷烃含量降低,C18左右的烷烃含量增多,表明菌群DGT有较好的降解效果,具有将长链烷烃降解为短链烷烃的能力。     

半红树植物玉蕊对淹水-盐度胁迫的生长及生理响应

玉蕊(Barringtonia racemosa)是典型的半红树植物,具有重要的药用及观赏价值,目前已被列为濒危植物,亟需保护。为探明不同淹水水位、淹水时长以及水体盐度对玉蕊生长的影响,筛选出适合玉蕊生存的最佳环境组合,该文以二年生玉蕊实生苗为试验材料,模拟全日潮,采用L_9(3~4)正交试验设计,对其生长及生理指标进行分析。结果表明:(1)第1组(淹水水位为地径高、淹水时长为4 h、水体盐度为4‰)、第4组(淹水水位为枝下高、淹水时长为4 h、水体盐度为8‰)、第6组(淹水水位为枝下高、淹水时长为12 h、水体盐度为4‰)最适合玉蕊生长。(2)第5组(淹水水位为枝下高、淹水时长为8 h、水体盐度为12‰)的植株叶片MDA含量最大,POD、CAT活性及可溶性糖含量也达到最大值,表明其通过启动保护酶系统及调节渗透物质有效抵抗逆境。(3)第7组至第9组(淹水水位为植株高)均出现死亡株,死亡率分别为33.33%、8.33%、25%,其中第9组在株高、地径、叶片数的增长量均为最小值。综上结果发现,玉蕊在淹水水位≤枝下高、淹水时长≤12 h、水体盐度≤12‰的环境组合中均表现出积极的形态适应及较强的抗性,能在一定的深度、淹长时长及盐度的潮汐水淹环境下生长,而淹水水位和水体盐度对玉蕊生长影响显著,淹水时长对植株整体影响不大。     

巴里坤湖和玛纳斯湖嗜盐菌的分离及功能酶的筛选

目的:了解新疆巴里坤湖与马纳斯湖中嗜盐菌及功能酶的多样性。方法:从两湖中采集水样进行菌种分离,采用PCR方法扩增出其16S rRNA基因(16S rDNA),并测定了基因的序列。对分离菌株进行了蛋白酶、淀粉酶、酯酶、脂肪酶、以及纤维素酶的筛选。结果:从两湖水样共分离得到51株嗜盐菌。基于16SrDNA序列的同源性比较和系统发育学分析,发现从两湖分离获得的中度嗜盐菌分别属于Planococcaceae、Bacillacea、Staphylococcus、Halomonadaceae、Salicolaceae以及Pseudomonadacaeae 6个属。分离得到的极端嗜盐古菌属于Halobacteriaceae属。功能酶筛选结果表明产蛋白酶的嗜盐菌共有15株,产酯酶的共有23株,产淀粉酶的共有8株,未获得产脂肪酶和纤维素酶的嗜盐菌。结论:新疆巴里坤湖和马纳斯湖中有丰富的嗜盐微生物资源及酶资源,有重要的研究意义和应用前景。     

新疆阿牙克库木湖可培养嗜盐古菌的种群结构

从新疆南部的阿牙克库木湖采集了19个水样和15个土样,分离培养嗜盐微生物。采用PCR方法获取其中62株嗜盐古菌16S rRNA基因序列。序列分析结果表明,分离到的菌株分属6个属,占已报道嗜盐古菌属总数的27%,其中以Halorubrum和Natrinema属的菌株为优势菌株。通过Shannon多样性指数分析发现,阿牙克库木湖冬春两季嗜盐古菌多样性差异不明显。研究还发现4个嗜盐古菌新物种,表明阿牙克库木湖蕴藏着具有地域特点的嗜盐古菌资源。     

利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因

在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因 (Selectable marker genes,SMGs) 将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来,这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控,也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法,在体细胞克隆前后两个时段内,利用Cre/loxP系统删除SMGs的可行性,同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明：尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除,但两次遗传修饰导致细胞严重老化,无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题,成功率高,缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs,但有超过30%的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因,SMGs删除率达到43.9%~72.8%,是一种较佳的SMGs删除手段。     

人血清白蛋白融合技术研究进展

结合笔者所在课题组的实验研究成果,综述人血清白蛋白融合技术研究进展。人血清白蛋白融合技术是近些年来应用较多的用 于改造小分子蛋白和多肽药物的手段。但是众多的研究结果发现将小分子蛋白/多肽和人血清白蛋白融合后会出现一些共性的问题,例 如目标蛋白产率低、易降解等。这些共性问题可以通过融合蛋白的优化设计、蛋白酶缺陷宿主的构建、融合基因多拷贝以及与分子伴侣 共表达得以解决     

浙江苍南近海沉积物细菌物种多样性

针对浙江苍南大渔湾近海海底沉积物样品（东经120°34′28．6″,北纬27°19′57．3″）,采用非培养法构建分子文库,并结合纯培养法分离培养海洋微生物,基于克隆子和分离菌株的16SrRNA基因序列,开展系统发育学研究,分析近海沉积物细菌群落结构及多样性。序列分析结果表明,文库克隆子主要属于δ-变形杆菌纲（Deltaproteobacteria）和γ-变形杆菌纲（Gammaproteobacteria）,部分序列与已报道物种的相似性较低,表明浙江苍南近海环境样品具有较好的微生物多样性,蕴藏着大量未知细菌物种资源。研究还分离获得细菌79株,丰富了近海微牛物资源库。分子鉴定结果表明,这些菌株主要属于α-变形杆菌纲（Alphaproteobacteria）、γ-变形杆菌纲（Gammaproteobacteria）和芽孢杆菌纲（Bacilli）。通过非培养和可培养数据结合发现,浙江苍南近海沉积物中的细菌优势类群为δ-变形杆菌和γ-变形杆菌。     

嗜盐古生菌br基因的遗传分析

从新疆阿尔金山地区阿乌拉仔盐湖分离纯化到几株极端嗜盐古生菌AJ11, AJ12和AJ13, 采用PCR技术分别扩增了其16S rRNA基因(16S rDNA)和编码螺旋C至螺旋G的细菌视紫红质(bacteriorhodopsin, BR)蛋白基因片段, 测定了基因的核苷酸序列。基于16S rDNA序列的同源性比较以及系统发育学研究表明, 分离到的菌株是Natrinema属中成员, 并构成一个独立的微生物种群。随后的遗传分析, 包括GC含量、转换与颠换的比率、同义突变率分析, 表明br基因间具有较高的遗传分歧程度, 并面临着净化选择和偏倚突变压的双重抑制。研究为物种资源及BR蛋白资源的进一步利用打下基础。     

东北太平洋深海沉积物细菌多样性

采用两种方法提取中国结核合同区东区沉积物不同层次总DNA,通过克隆测序构建了含有79个克隆子的细菌16S rRNA基因文库,分析了该海域沉积物中细菌的多样性.79个克隆在系统发育树中形成了11个大分支,包括Gamma proteobacteria(22.8%),Alpha proteobacteria(16.5%),Planctomycetacia(7.6%),Delta proteobacteria(6.3%), Nitrospira(6.3%),Actinobacteria(6.3%),Beta proteobacteria(5%),Acidobacteria(5.1%),Sphingobacteria(3.8%),Firmicutes(2.5%),Other bacteria(17.7%),其中Gamma proteobacteria在总文库中所占比例最高,该分支细菌在0～2cm、4～6cm层也是优势菌种.Gamma proteobacteria中假单胞菌(Pseudomonas)为优势属(22.2%).各个层次中所含细菌类群有所不同,Alpha proteobacteria、Gamma proteobacteria、Delta proteobacteria 、Planctomycetacia、Nitrospira 、Actinobacteria和Acidobacteria为三层样品共有类群.     

高效抑藻放线菌的筛选和活性

为了寻找抑杀微囊藻的放线菌,对江苏海洋滩涂土壤中分离到的放线菌进行了筛选,获得了1株对微囊藻有强烈抑杀作用的菌株YC0412。进一步实验表明这株放线菌对其它富营养水体中常见藻类,小球藻、栅藻、鱼腥藻和集胞藻都有不同的抑杀作用,藻的液体培养物中分别加入1/10体积的YC0412发酵液,培养3d后生长分别被抑制了32.4%,12.46%,32.9%,82.19%和32.57%,说明该菌的抑藻作用具有广谱性。通过对YC0412形态学特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列进行分析,结果表明YC0412为1株灰霉素链霉菌（Streptomyces griseinus）。为了弄清杀藻活性物质的性质,对YC0412发酵液分别采用乙酸乙酯和氯仿进行了抽提,测定结果显示,乙酸乙酯提取物有很好的杀藻作用,说明其活性产物应该是一种弱极性脂溶性物质。