代谢工程改造酿酒酵母合成肌醇

【目的】肌醇别名环己六醇,是一种具有生物活性的糖醇,在医药、食品和饲料等领域具有重要的应用价值。为获得生产肌醇的微生物细胞工厂,通过代谢工程改造,构建生产肌醇的酿酒酵母工程菌株。【方法】对酿酒酵母肌醇合成途径的正负调控同时改造,过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除肌醇生物合成的转录抑制子基因opi1和抗性基因kan MX,获得重组菌。利用气相色谱法检测重组菌发酵液中肌醇含量。【结果】构建了生物安全性的产肌醇基因工程菌株,摇瓶培养产量为1.021 g/L。【结论】通过过表达ino1和敲除opi1来改造酿酒酵母,能够有效提高重组菌的肌醇产量,为下一步的微生物发酵法产肌醇的工业应用奠定基础。     

不同栽培密度对水培上海青产量的影响

应用无土栽培以及设施栽培技术,对蔬菜‘华冠’上海青进行5个密度栽培,分析不同栽培密度下上海青的株高、株重、叶片数等生长指标。结果表明,A1、A2、A3和A4四个处理的密度相对较大,在定植15d内均能封行,个体生长差异较小;到成熟期时,不同栽培密度的植株生长势有较大区别,密度越小,单株植株生长越好,但总产量越低。其中,A4产量最高,达45.92 t·hm~(-2),增产率分别比A1、A2、A3、A5高30.75%、50.11%、121.62%、129.60%;A1与A4栽培密度一样(50棵·m~(-2)),但A4分布均匀,有利于植株生长发育,因此产量更高。     

CHIR-99021与FGF8协同诱导人表皮干细胞牙向分化

人表皮干细胞(human keratinocyte stem cells, hKSCs)可作为上皮源性的成体干细胞应用于牙齿再生,但是其诱导效率较低.本研究利用小分子化合物CHIR-99021提高hKSCs的Wnt/β-catenin信号活性,再与具有诱导成牙潜能的小鼠牙胚间充质重组,构建嵌合体,并移植裸鼠肾囊膜下培养20 d. 将嵌合体组织切片,并利用组织染色和免疫组化等方法鉴定牙齿结构. 结果显示,经FGF8诱导处理的hKSCs与小鼠牙胚间充质构成的嵌合体的成牙率为27.80%,其中成釉率仅为40.00%;经CHIR 99021诱导处理的hKSCs与小鼠牙胚间充质构成的嵌合体的成牙率仅为18.20%,其中成釉率高达100%;而CHIR 99021与FGF8协同作用,则进一步提高嵌合体成牙率至40.00%,其中成釉率也达75.00%. 进一步的研究发现,经CHIR-99021处理后,hKSCs的Wnt/β-catenin信号活性明显提高,同时FGF8的表达水平也显著上调. 以上结果表明,CHIR-99021可通过上调Wnt/β-catenin信号活性水平,同时促进FGF8表达,与FGF8协同,高效诱导hKSCs分化为具有分泌釉质功能的成釉质细胞. 研究结果对利用hKSCs作为上皮来源的成体细胞应用于人类牙齿再生的研究具有重要意义.     

福建省不同居群轮叶蒲桃叶形态与表皮特征比较

通过对福建省16个不同居群轮叶蒲桃叶片形态特征、叶表皮特征的观察及叶片主要性状的测量,探讨不同居群轮叶蒲桃叶型、叶表皮特征多样性,为属下种间鉴定提供依据。对16个居群轮叶蒲桃叶型多样性进行观察,采用直尺测量叶片主要性状如叶长、叶宽等;采用光学显微镜和扫描电镜对叶表皮特征进行观察。结果表明,16个居群轮叶蒲桃叶片中,闽西居群叶形为阔椭圆形;闽东、闽北、闽南等各地居群叶形为长椭圆形或近带形。不同居群轮叶蒲桃叶片表皮毛、角质层纹饰、气孔器形态与类型等表现一致,但表皮细胞垂周壁式样差异明显,具波状、浅波状、平直、弓形等几种类型,且在上下表皮间存在式样一致或有多元化现象。由此说明,福建省不同居群轮叶蒲桃叶形与表皮细胞垂周壁式样均处于较强烈分化的状态,表皮细胞垂周壁式样不能作为属种间分类的依据。     

根癌农杆菌介导的乙肝表面抗原基因对烟草的转化

构建了植物表达载体pBRSAg,该载体具有完整的植物表达元件,CaMV35S启动子、农杆菌T-DNA左右边界、植物报告基因gus和植物选择标记基因hpt,适用于农杆菌的转化;通过冻融法将重组质粒pBRSAg转入根癌农杆菌LBA4404中,利用农杆菌介导法转化烟草叶盘,经筛选培养获得烟草植株。抗性植株经GUS染色和PCR检测为阳性,初步表明乙肝表面抗原基因在烟草中得到表达。     

金弹总DNA提取及RAPD体系优化

以金弹叶片为材料,研究其总DNA提取方法及RAPD-PCR条件。结果表明,用改良CTAB法Ⅱ提取的DNA适于RAPD分析;优化的金弹RAPD-PCR体系为:反应体积20μl,Mg²⁺2.5 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.20μmol/L、模板DNA 1.0 ng/μl和1 U Taq DNA聚合酶。相应的扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,37℃复性60 s,72℃延伸120 s,循环45次;72℃延伸10 min,4℃结束。     

咸草总黄酮提取工艺的比较研究

通过超声波法与乙醇回流法分别提取咸草总黄酮,两者均采用L₉(3⁴)正交实验方法,并运用SPSS11.5软件统计分析。结果如下:超声波法的最佳提取条件为超声波功率400W、乙醇浓度60%、料液比1:60、超声波作用时间10min,样品总黄酮含量为1.558%;乙醇回流法的最优条件为水浴温度90℃、乙醇浓度60%、料液比1:60、回流时间1.5h,总黄酮含量2.011%。两种方法比较:乙醇回流法提取总黄酮含量较高,而超声波法更节省时间。     

血啉甲醚在鼻咽癌细胞中的浓度分布

利用激光诱导荧光方法实验测定了新型光敏剂血啉甲醚（Hematoporphyrin Monomethyl Ether, HMME）在鼻咽癌细胞株CNE中的时间分布和浓度变化规律.实验结果表明,鼻咽癌细胞株CNE的荧光光谱中的两个特征峰615 nm和675 nm证实了鼻咽癌细胞对HMME的选择性特异吸收.HMME在鼻咽癌细胞中的潴留浓度在混合培养后的140分钟达到最大值.当用于培养鼻咽癌细胞的HMME药物浓度低于32 μg/ml时,测量得到的相对荧光光谱强度与HMME浓度呈现出很好的线性关系,通过拟合方程可以间接确定在给定注射剂量条件下鼻咽癌细胞中所潴留HMME的浓度.结果可以为HMME在光动力学诊断与治疗中的临床应用提供理论依据和剂量参考.     

磷脂酰肌醇类脂质在嗜肺军团菌发病机制中作用的研究进展北大核心

嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种能引起被称为“军团病”的严重肺炎的致病菌,其利用自身的IVB型分泌系统(type IVB secretion systems)将效应蛋白转运到宿主细胞中,作用于宿主蛋白质和脂质,以形成军团菌在宿主细胞内生长所需的吞噬泡(Legionella-containing vacuole,LCV)。磷酸酰肌醇(phosphatidylinositols,PIs)作为细胞的重要脂质组成,参与细胞信号转导及囊泡转运等过程。而大量的证据表明嗜肺军团菌利用其效应蛋白调控宿主磷酸酰肌醇类脂质代谢及其LCV膜的脂质组成,以促进LCV的成熟。本文主要从军团菌的致病机制、其效应蛋白对磷酸酰肌醇类脂质的代谢调控及对宿主磷脂酰肌醇代谢酶的招募等方面进行了综述分析,期望对进一步理解军团菌调控宿主脂质代谢分子机制和其致病机制提供参考。     

温度与盐度对刺松藻生长和营养盐吸收的影响

随着养殖业迅猛发展，海洋富营养化问题日益加剧。利用大型海藻所具有的超吸收氮磷营养盐的能力，可有效治理和修复富营养化海域。从福建省连江县罗源湾海域养殖筏架采取经济价值较高的刺松藻，为分析其在海水养殖区的生长条件，在实验室条件下，研究温度（18、25、32 ℃）和盐度（10、20、30）对刺松藻生长和营养盐吸收的影响。研究结果表明，刺松藻生长受温度影响极显著(P<0.01)，受盐度及二者相互作用影响显著(P<0.05)；在25 ℃和盐度20的条件下，刺松藻特定生长率（specific growth rate，SGR）最高，达89.45%；在32 ℃和盐度30的条件下，刺松藻对营养盐的吸收效果最好，其中对NH+4-N的吸收效果最佳。研究结果为生物修复种群的选择和刺松藻的人工养殖提供了一定的参考。