利用农杆菌介导法将γ-生育酚甲基转移酶基因导入油菜的研究

将γ-生育酚甲基转移酶基因导入油菜,旨在提高菜油中的维生素E含量。为了使该基因在油菜种子中特异表达,采用油菜种子特异启动子BcNA1,构建了植物表达载体pBIBE。以花油五号和花油六号油菜品种子叶柄为受体,将γ-生育酚甲基转移酶基因(γ-TMT)通过农杆菌介导法转化油菜,获得了22株抗卡那霉素再生植株。经过PCR检测,其中有7株表现为阳性,初步证明γ-TMT已整合到油菜基因组中。     

油菜叶绿体基因ndhB的序列

1　Ｓｏｕｒｃｅ　ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｆｒｏｍａＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ,ｗｈｉｃｈｗａｓｌｉｇａｔｅｄｔｏｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ( )ｖｅｃｔｅｒ (ｎａｍｅｄａｓｐＳＮ) ,ｆｒｏｍｔｈｅｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ(Ｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅ)ｃｖ.Ｈ1 65.2　Ｎａｍｅａｎｄｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｃｈｌｏｒｏ ｐｌａｓｔｇｅｎｅｎｄｈＢｉｓ 2 4 67ｂｐｌｏｎｇｗｉｔｈｔｗｏｅｘｏｎｓｔｈａｔｅｎｃｏｄｅ 51 0ａ…     

利用ihpRNA介导的基因沉默培育抗冷糖化马铃薯

为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihpRNA)载体pBIV;采用微束激光穿刺技术转化马铃薯品种,得到了149个转基因株系,其中139个转基因株系在低温贮藏35 d时块茎还原糖含量低于亲本材料。RT-PCR分析表明还原糖含量降低的转基因植株中检测不到AcInv基因mRNA的积累。本研究结果表明以3′UTR作为RNAi载体的干涉片段可以有效地抑制靶标基因mRNA的积累,通过对AcInv沉默可获得抗低温糖化的马铃薯育种材料。     

信号肽序列修饰的PAP cDNA克隆及高频率转基因烟草的获得

通过RT-PCR从美洲商陆叶片中获得PAPN端氨基酸修饰的cDNA克隆PAP-sp1。构建携带PAP-sp1的植物转化载体pBPAP,利用农杆菌介导将PAP-sp1导入烟草品种K326叶片细胞,通过抗性筛选、组织化学和PCR鉴定获得了转基因烟草植株,按形成转基因不定芽的外植体数统计,烟草K326的转化率高达8.1%。攻毒实验表明,与对照植株相比,转基因烟草株系发病推迟,感病程度较低,开花结果提早。     

烟草脱外壁花粉的电激基因转移

以 β-葡糖苷酸酶 GUS 基因作为报告基因 ,通过瞬间表达的检测 ,比较了烟草 Nicotianatabacum L . 脱外壁花粉、未萌发与萌发花粉的电激导入效果 ,探讨了不同电激条件及启动子对外源基因瞬间表达的影响 .结果表明 :当脉冲时间常数为 13 ms时 ,导致脱外壁花粉和萌发花粉生活力下降约50 %的电场强度分别为 750 V/ cm和 12 50 V/ cm,在此条件下电激 ,二者的导入效果最好 .脱外壁花粉的GUS基因表达水平约为萌发花粉的 5倍、花粉粒的 30倍 .玉米花粉特异启动子 Zm13- 2 60 能启动 GUS基因在脱外壁花粉和萌发花粉中高效表达 ,而 Ca MV 35S的启动活性很低     

云杉针叶三磷酸腺苷酶活性的超微细胞化学定位

用磷酸铅沉淀技术研究了云杉幼龄针叶及成龄树针叶细胞的三磷酸腺苷酶(ATPase)活性定位。从形态结构上可以看到,种子萌发的幼龄针叶细胞的细胞壁较薄, ATP酶活性反应产物磷酸铅颗粒主要分布于细胞质和细胞质膜上。成龄针叶细胞壁较厚,内质网等细胞器发达,ATP酶主要在细胞壁有较高的活性反应。两者细胞的液泡及细胞核中也有少量定位。幼龄针叶ATP酶活性较成龄针叶的活性较弱, 这种活性变化与不同发育时期叶的生理功能有关。     

初始培养条件对定兴芥小孢子胚胎发生的影响

本文探索了油菜花药培养中小孢子胚早期发育的适宜条件。花药分步悬浮法第一培养基的简化实验表明,小孢子胚在仅含有20%蔗糖的空白培养基上的诱导率(212%)与对照的(202%)无显著差异。这样,第一培养基便从原Keller培养基简化为不含大量、微量和有机元素而仅含有20%蔗糖的水溶液,并且,花药第一阶段的培养时间从原来的3—5天减少到1.5—2天。此外,研究了花药在蔗糖水溶液上的滞留时间对小孢子胚胎早期发育的影响。滞留36～48小时,小孢子胚的诱导率(135%)最佳。考察小孢子胚胎早期发育的状况与不同滞留时间的关系则发现,36—48小时内每100个活细胞里,膨大细胞约占70%。这表明,早期培养时,花粉只要膨大而不需分裂即可转入第二阶段培养,便可获得较高产率的胚状体。     

植物与病原真菌互作的形态变化及其生理、生化机制和基因调控

本文从生理、生化、酶学及基因调控等方面对植物与病原真菌互作过程中的形态变化进行了综述,以期为植物抗病方面的研究提供参考     

利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究

本文以甘蓝型“双低”油菜新品种Ｈ１６５为实验材料,以子叶柄为外植体,研究了微束激光转化系统中的一些关键因素,如取材时间以播中后４－５天为宜;高渗液预处理２０－４０分钟者最佳;外源ＤＮＡ浓度以０．０５－０．１μｇ／μｌ获得转基因植株最有利等。已建立一种操作简便,重复性好,并能准确定位于靶体细胞的转化体系,并用这个转化体系成功地将菜豆几丁酶基因导入油菜,并获得转基因植株。经ＰＣＲ扩增检测为阳性,实验结     

减数分裂的机制及其研究进展

减数分裂是有性生殖过程中的关键步骤,近年来,借助于先进的分子生物学技术,通过对一些模式生物的研究,在减数分裂染色体相互作用、周期调控等方面取得了重要的研究成果,进一步形成了对其分子机制的某些认识⒚为此,对减数分裂的机制及其研究进展进行了综述⒚