肿瘤微环境中相关细胞的研究进展

肿瘤的微环境对肿瘤的发生,发展具有重要的意义。实体瘤中除肿瘤细胞外存在大量的非肿瘤细胞,如肿瘤闻质细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、免疫细胞、脂肪细胞等等,这一系列的细胞与肿瘤细胞相互作用,通过一系列的因子分泌而促使肿瘤的进一步的恶化,目前传统的抗肿瘤药物研究往往局限于肿瘤细胞本身而忽略了肿瘤周围的细胞作用,使得肿瘤久治不愈。将来的药物开发应该围绕肿瘤细胞为主体的同时,兼顾微环境中的其他细胞,多靶点治疗肿瘤,真正实现肿瘤的治愈。     

9-顺式维甲酸在原代培养猪前体脂肪细胞分化中的调控作用

采用RT-PCR、油红O染色法、油红O染色提取法和分光光度计法,探讨不同浓度9-顺式维甲酸(9-cisRA)(0-10$mol/L)对体外原代培养猪前体脂肪细胞分化的影响及其可能机制。结果表明,9-cisRA在脂肪细胞分化中因浓度不同而发挥不同作用。低浓度9-cisRA(0-10nmol/L)促进前体脂肪细胞分化,并上调RXRα、PPARγmRNA表达,增加前体脂肪细胞分化标志酶3-磷酸甘油脱氢酶(glyc-erol-3-phosphate dehydrogenase,GPDH)的活性;高浓度9-cisRA(100nmol/L-10$mol/L)则抑制前体脂肪细胞分化,并下调RXRα、PPARγmRNA表达,减少GPDH的活性。结果提示9-cisRA在猪前体脂肪细胞分化中,可能通过调控RXRα和PPARγ基因表达变化来发挥其促进或抑制作用。     

Sirt1: 一种新的脂肪细胞和肌细胞调控因子

Sirt1(Sirtuin type 1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)的组蛋白脱乙酰酶, 为Sirtuins家族成员之一, 与细胞增殖、分化、衰老、凋亡和代谢密切相关。目前, 有关Sirt1与衰老和代谢的论文已在Science、Nature、Cell等杂志上连续刊出。其中, Sirt1通过抑制 PPARγ促进白色脂肪细胞中脂肪动员, 并且通过下调肌细胞标志基因表达来抑制成肌细胞分化。提示Sirt1不仅是一个重要的与机体“长寿”有关的因子, 而且可能在动物脂肪沉积和肌肉发育中起着关键的调控作用。     

EGCG对猪前体脂肪细胞增殖和分化的作用

表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate,EGCG）是绿茶提取物EGCG的生物活性成分,为了探讨其对猪前体脂肪细胞增殖和分化的影响,以不同浓度EGCG处理猪前体脂肪细胞,MTT法测定EGCG对猪前体脂肪细胞生长的影响;油红O染色检测猪前体脂肪细胞的形态学变化;油红O染色提取法定量分析脂肪细胞充脂量的变化;半定量RT-PCR检测分化转录因子过氧化物酶体增生物激活受体佗（PPARγ2）和CCAAT／增强子结合蛋白α（C／EBPα）mRNA表达水平变化。结果显示：EGCG随着浓度的递增显著抑制猪前体脂肪细胞的增殖（P〈0．01）;低浓度的EGCG（5μmol／L）不影响脂肪细胞分化,而高浓度EGCG（200μmol／L）显著抑制猪前体脂肪细胞分化,同时下调PPARγ2和C／EBPαmRNA表达,本研究结果表明EGCG可抑制猪前体脂肪细胞的增殖和分化。     

肥胖时过表达的新的脂肪因子apelin：是友是敌？

Apelin是孤儿G蛋白偶联受体一血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白（putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1,AH）的天然配体。Apelin及其受体APJ在体内分布广泛。Boucher等报道在分离出的人及小鼠成熟脂肪细胞有apelin的合成和分泌,并认为apelin是一种新的脂肪因子。     

IGFBP3通过癌旁脂肪细胞促进肾癌细胞生长与转移的作用研究

目的:探讨肾透明细胞癌的分泌蛋白IGFBP3对癌旁脂肪细胞分化的作用及通过脂肪细胞促进肾透明癌细胞生长与转移的作用。方法:通过肾细胞癌的基因数据库发现过表达的基因IGFBP3,免疫组化和RT-PCR确认IGFBP3在标本中的表达。RT-PCR和Western Blot检测IGFBP3对脂肪细胞分化成熟特征标志物表达的影响。以过表达IGFBP3的786-O细胞为模型,Western Blot检测IGFBP3的促脂肪细胞分化作用与TGFβ-smad1/5/8及TGFβ-p38MAPK信号通路的关系。将过表达IGFBP3的786-O细胞与脂肪细胞共培养得到条件培养基,通过油红染色检测条件培养的肾癌细胞中脂滴含量,迁移实验和CCK8实验分别检测脂肪细胞对肾癌细胞侵袭性及增殖的影响。结果:相较于正常组,肾癌标本中IGFBP3的表达增加(P=0.017)。IGFBP3使脂肪细胞分化成熟相关标志物PPARγ、PGC1α、c/EBPα、Prdm16、UCP1表达增加。以IGFBP3处理脂肪细胞时,可以增加TGFβ下游蛋白表达水平,30 min后p-smad1/5/8表达增加(P=0.024),60 min后p-p38MAPK表达明显增加(P=0.013)。条件培养后的786-O细胞内的脂滴形成增加(P=0.028),脂肪细胞促进786-O细胞的增殖和迁移能力。结论:IGFBP3是肾透明细胞癌中过度表达的蛋白,能够促进前脂肪细胞分化,其机制主要通过激活TGFβ通路中的smad1/5/8、p38MAPK。成熟的脂肪细胞能够促进肾癌细胞质脂滴形成,并且促进肿瘤的增殖、提高肿瘤的侵袭性。     

Fsp27基因沉默载体的构建及其对细胞脂解的影响研究

构建脂肪特异性蛋白27(Fat-specific protein of 27,Fsp27)基因沉默载体,研究沉默Fsp27基因表达对3T3-L1细胞脂解的影响,并对其作用机制进行探究。采用RNAi技术,构建Fsp27基因真核干扰载体,下调Fsp27基因的表达。“鸡尾酒”法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。脂质体转染脂肪细胞,油红O染色脂滴,酶法测定细胞中甘油及甘油三酯的含量。Western blot法检测细胞中Fsp27、HSL、ATGL和PPARγ的蛋白表达。Western blot结果显示:阳性sh-Fsp27干扰载体均能有效下调Fsp27的表达,且伴随细胞内ATGL和PPARγ的表达量升高(P<0.05),其中sh-Fsp27-2的沉默效果最好;酶学方法检测结果显示:阳性sh-Fsp27干扰组细胞中甘油三酯含量下降,甘油含量升高(P<0.05);油红O染色结果发现:空白对照组与阴性对照组均有大脂滴堆积,阳性sh-Fsp27组小脂滴分布广泛,未见明显的大脂滴。sh-Fsp27-2组基因沉默载体的沉默效果最好,Fsp27基因沉默可以加快3T3-L1细胞的脂解速率,其主要是通过抑制脂滴融合和增强ATGL酶的水解来完成对脂解的调控。     

黑木耳中抑制胰脂肪酶活性物质的提取工艺及体外抑制效果

本文以黑木耳醇提物和水提物为研究对象,以对胰脂肪酶活性的抑制率为指标,分别对其提取工艺进行了单因素和正交试验,选取优化后抑制率高的提取物进行抑制类型和3T3-L1前脂肪细胞方面的研究。结果表明醇提物的最佳提取工艺为提取温度70℃、提取时间1h、乙醇浓度90%、料液比1:20,抑制胰脂肪酶的IC₅₀=681.56μg/mL。水提物的最佳提取工艺为提取温度70℃、提取时间2h、料液比1:40,抑制胰脂肪酶的IC₅₀=850.59μg/mL,醇提物的抑制效果优于水提物。醇提物对胰脂肪酶的抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数为4.69mg/mL;醇提物浓度低于1mg/mL时,对3T3-L1前脂肪细胞的活性无影响;浓度高于400μg/mL时即可显著抑制前脂肪细胞的分化。     

咸宁桂花精油的前驱脂肪细胞生长和人体舒压试验的研究

本文采用超临界CO2流体法萃取三个品种咸宁桂花的干桂花得到其精油;采用石油醚浸提法浸提鲜桂花得到其浸膏,用气质联用分析了萃取桂花精油和浸膏的香气成分及其相对含量。进一步探讨了获得的精油对前驱脂肪细胞株3T3-L1细胞培养及生长的影响,并行人体神经舒压试验。结果发现其可减少细胞中的中性脂肪量;心电图LF和HF数据显示桂花精油具有一定的神经舒缓功效。     

PI3K/AKT抑制剂渥曼青霉素对猪前体脂肪细胞增殖和凋亡的影响

为探寻PI3K/AKT抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin,WM)对猪前体脂肪细胞增殖和凋亡均无影响的适宜浓度,文章首先分离并验证了猪原代前体脂肪细胞的分化潜能,然后对不同浓度渥曼青霉素处理11 d的细胞采用Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡,并通过凋亡相关基因的表达以及DNA损伤程度进行验证,同时利用甲烷硫代磺酸盐(Methanethiosulfonate,MTS)检测了细胞的增殖活性。结果表明,100 nmol/L渥曼青霉素对猪前体脂肪细胞的增殖和凋亡均无显著影响,而200 nmol/L的渥曼青霉素对猪原代脂肪细胞的增殖活性虽没有显著影响,但对细胞凋亡有显著促进作用。研究发现,处理后促凋亡因子caspase8和TNFR1表达显著上调,非caspase依赖促凋亡因子GZMA表达无显著性差异,而GZMB表达则显著上调,抗凋亡因子Bcl-x1表达显著上调,cFLIP表达则无显著性差异。100 nmol/L的渥曼青霉素对细胞DNA的损伤不显著。因此,100 nmol/L的渥曼青霉素对猪前体脂肪细胞的增殖和凋亡均无显著影响,是在不影响细胞生长的情况下研究PI3K通路对脂肪细胞分化的较为理想的浓度。