慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法,本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后,Western 印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%（P<0.05）. pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞,感染3 d时GFP的表达量达95%,感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因. Western 印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后,AFP表达水平均有降低,抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后,细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制.     

窥视科学的窗口:高校科教影视资源的建设研究

科技是第一生产力的观念已经深入人心,高校作为科技人才的培养基地应该为学生提供全面而丰富的学习资源,其中科教类影视资源是必不可少的一项。当今社会,媒介融合已成大势所趋,本文将探讨在媒介融合的时代背景下,高校如何有效地完成科教影视资源的建设和分享,促进应用型人才的培养,推动科技的创新。     

不同水稻品种对虫害胁迫的生理响应

以褐飞虱-水稻为模式,研究虫害胁迫下植物的化学防御生理生态特征,测定了可溶性糖含量、叶绿素含量、光合速率、蒸腾速率、气孔导度以及细胞间隙二氧化碳浓度、防御酶的时间变化特征.结果表明,经虫害诱导,不同品种水稻可溶性糖含量降低;同时,光合速率以及叶绿素含量也相应下降;蒸腾速率、气孔导度和细胞间隙二氧化碳浓度的变化不显著。虫害对水稻叶片多酚氧化酶、过氧化物酶和脂氧合酶均具有诱导作用.这种诱导作用具有时间效应,且不同品种诱导作用不一致.     

1600例重症心脏瓣膜置换术中的体外循环管理

目的报告1600例重症心脏瓣膜置换术中的体外循环管理技术。方法CPB中采用低液面预充、中度血液稀释、浅低温、HCT22～25％,心肌保护为高钾含血停跳液灌注。对心胸比例超过85％,合并肝大、腹水、肺长期淤血的患者,CPB中采用超滤法。结果体外循环时间90～357min,主动脉阻断时间50～170min,心脏停跳时间54～175min,术中灌注压55～70mmHg,中心静脉压0～5cm H2O,尿量平均200～800ml,自动复跳1047例,占65％。结论为了提高重症心脏瓣膜手术的体外循环质量,增加手术成功率,强调：(1)中度血液稀释,提高胶体渗透压;(2)CPB中用高钾含血停搏液作为心肌保护,必须做到按时、足量灌注;(3)及时补充碱性药物和电解质;(4)补充充足的镁离子可增加细胞内的钾离子浓度。     

植物病原细菌中超氧阴离子释放及其释放位点的研究

实验发现很多植物病原细菌具有自身释放超氧阴离子的现象 ,其释放规律与菌株的致病性可能存在一定的关系。并且植物病原细菌超氧阴离子的释放是多位点的 ,在细胞膜、细胞壁及无菌滤液中用化学方法及电子自旋共振法 (Electronspinresonance ,ESR)都能够检测到超氧阴离子的释放。无论是自然生理状态下 ,还是SOD酶活性被抑制后 ,都显示各组分中无菌滤液的超氧阴离子浓度最高 ,可能是植物病原细菌超氧阴离子释放的主要位点。     

重组SCIRR39多克隆抗体的制备及检测

目的：在大肠杆菌中表达大鼠脊髓损伤与修复蛋白39（SCIRR39）的C端抗原表位,并制备其多克隆抗体。方法：从大鼠脊髓全横断损伤脊髓cDNA中扩增1386bp的Scirr39基因编码框,亚克隆该基因编码蛋白C端359～461位氨基酸残基的DNA片段,插入表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况,切胶纯化目的蛋白;利用多克隆抗体制备技术,制备重组SCIRR39蛋白的多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体效价,Western印迹检测抗体的特异性。结果：SCIRR39蛋白C端抗原表位与GST的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式高表达,相对分子质量为37．9×103;获得抗SCIRR39蛋白C端抗原表位的兔抗血清,其效价达到1：104;Western印迹显示多克隆抗体能特异识别重组SCIRR39蛋白的C端抗原表位。结论：在原核系统中表达纯化了重组SCIRR39抗原表位蛋白,制备的重组蛋白多克隆抗体将用于检测SCIRR39在脊髓损伤过程中的表达变化。     

黄芩的生物学研究进展

药用黄芩为唇形科(Labiatae)黄芩属(Scutellaria)多年生草本植物黄芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)的干燥根,是我国大宗中药材之一,药用历史悠久。我们对其原植物黄芩的种质资源、形态结构、生长发育、繁殖方式等方面的研究进展,以及黄芩药材的解剖学研究和显微鉴定等进行了系统考察和总结,可为深入进行原植物黄芩的生物学研究及药用黄芩的真伪鉴别和提高药用部分的质量和产量提供依据和资料。     

耐低温厌氧蛋白酶产生菌B-25的选育及产酶条件研究

从公园池塘污泥中分离到一株性状优良、耐低温的厌氧蛋白酶产生菌B-25,经形态、生理生化特性、16SrDNA序列分析鉴定为双酶梭状芽孢杆菌（Clostridium bifermentans）。对其最适产酶条件进行了初步研究,该菌培养96h时酶活力达到高峰,最适初始pH为7．5,在16℃、22℃、30℃培养酶活较高,该酶不耐高温,60℃以上酶活全部丧失。     

细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示

细胞表面展示技术已广泛应用于突变文库的高通量筛选,有力地促进了蛋白质工程的发展。以来自于铜绿假单胞菌的自转运蛋白Est A的羧基端结构域作为锚定区,构建脂肪酶LipA与EstA羧基端结构域的融合基因,并将融合基因插入到改造后的pACYC-Duet表达载体中,获得表面展示载体pBCCB-X1。将载体pBCCB-X1分别导入到大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600菌株中,以IPTG诱导融合基因的表达。分别用三丁酸甘油酯定性检测和pNPO定量检测诱导表达后的全细胞脂肪酶的水解活性。试验结果表明,脂肪酶LipA在大肠杆菌JK321和大肠杆菌UT5600细胞表面均得到功能性展示,水解活性分别为(2.8±0.1)U/OD和(2.6±0.06)U/OD。脂肪酶LipA在大肠杆菌细胞表面的功能性展示,为后续高通量筛选LipA突变基因文库,奠定了坚实的基础。     

瓣膜病变合并肾功能不良患者的体外循环管理

目的：探讨瓣膜病变合并肾功能不良患者的体外循环管理方法。方法：2003年1月～6月在我院接受瓣膜置换术且术前肾功能检查指标异常的15名患者作为研究组,2002年1月～6月符合上述条件的18名患者作为对照组。两组患者体外循环管理的不同之处在于：研究组患者在体外循环中应用平衡超滤,严格选用抗生素,少用或不用人工胶体,不用甘露醇,体外循环中避免肾缺血。结果：研究组患者术后肾功能明显好于对照组。结论：在研究组患者中应用的上述措施对术前就用肾功能损伤的患者是有帮助的。