极端环境脂肪酶菌种库建立及其酶学性质研究

为得到特殊性质的脂肪酶酶种,从来源于极端环境的27份样品定向筛选脂肪酶产生菌,并构建了一个小型的菌种库。其中酵母L112在20℃,pH5．0时酶活为18．60u/ml,属低温酸性酶种。酶学性质研究表明,该酶最适作用温度为25-30℃,最适pH为5.4。在pH4.8,50℃条件下40min保持60%以上酶活。Mg^2 和Ca^2 对酶有激活作用,Zn^2 、Fe^2 、Cu^2 和EDTA有抑制作用。该产酶菌析经中国科学院微生物研究所鉴定为罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii(Kufferath)C.E.Slcinner).     

枯草芽胞杆菌FB123细菌素的理化性质及抑菌谱的研究

研究了细菌素产生菌枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)FB123 所产细菌素的理化性质及其抑菌谱.枯草芽胞杆菌FB123经过 28 ℃、32 h的发酵得到发酵上清液,用饱和度为50%的硫酸铵溶液沉淀发酵上清液中的细菌素.以革兰阴性菌大肠杆菌和革兰阳性菌金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法检测细菌素抑菌活性,对细菌素粗品进行理化性质的研究.结果表明该细菌素最适作用pH为 6.0,最适作用温度 40 ℃,具有较宽的pH作用范围和较好的热稳定性.各种蛋白酶、金属离子对其活性有不同程度的影响.抑菌谱试验结果表明,该细菌素对多种革兰阳性菌和革兰阴性菌有明显的抑制作用,虽然对部分真菌有抑制作用,但抑制作用较弱.     

嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶及其氨基酸序列测定

扩展青霉(Penicillium expansum)FS1884所产生的碱性脂肪酶经硫酸铵沉淀、Sephacryl S-200柱层析后,再经嗜硫色谱(Thiophilic Chromatography)柱层析,被纯化了173．8倍,最终比活为5694．9U／mg。纯化后的脂肪酶达到了SDS-PAGE电泳纯、PAGE电泳纯以及毛细管液相色谱(Capillary Liquid Chromatography)纯。该脂肪酶N-端氨基酸序列测定的结果是：A T A D A A A F P D L H R A A K L S S A,与来自青霉属其它真菌脂肪酶一级结构作了比较。     

扩展青霉碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达

将编码扩展青霉碱性脂肪酶 (PEL)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K ,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115 ,通过橄榄油 MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS PAGE分析、橄榄油检验板鉴定 ,表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中 ,分子量约 2 8kD ,与扩展青霉碱性脂肪酶大小一致 ,占分泌蛋白的 95 %。橄榄油检验板检验表明该表达蛋白可分解橄榄油 ,通过优化该表达菌的发酵条件 ,以橄榄油为底物进行酶活测定 ,其发酵液酶活可达 2 6 0u mL。     

提高酵母菌原生质体制备与再生的方法研究

研究了提高酵母菌原生质体制备与再生率的技术路线:选用酵母菌对数生长中期,约培养9～12h(A600为0.5～1.0)的细胞,采用1.5%蜗牛酶和1.0%纤维素酶的混合酶液水解去除细胞壁,经特定条件,可获得98%的原生质体制备率,通过分离到含有0.01mol/LCaCl2和15%蔗糖的YEPDS再生培养基上培养,再生率可达95%以上。     

由扩展青霉产生碱性脂肪酶的纯化及其特性

国外报道了不少由细菌、霉菌、酶母菌产生的中性脂肪酶及由细菌产生的碱性脂肪酶的纯化方法,国内尚未见有关脂肪酶纯化的报道。为了进一步研究和扩大该酶在医药、食品等方面的应用范围,我们对由扩展青霉突变株UN-503产生的碱性脂肪酶进行了纯化及其特性的研究,现报道如下。     

中温碱性脂肪酶的研究——Ⅴ.扩展青霉PF868碱性脂肪酶在皮革及皮毛脱脂工艺上的应用

本文报导扩展青霉PF868产生的碱性脂肪酶在动物皮革及皮毛脱脂工艺上的应用。试验结果表明:碱性脂肪酶20～30u/mL的浓度在pH9.0和温度 30～35℃条件下对猪皮、绵羊皮、兔皮及旱獭、狐狸和水貂皮毛具有良好的脱脂效果,脱脂率在80％以上,高于传统碱法(Na_2CO_3)和表面活性剂法(JFC)。碱性脂肪酶不仅可脱尽皮板深层油脂,而且可以软化皮板。酶法脱脂的成革其抗张强度、伸长率、撕裂强度以及崩裂高度均优于碱法和表面活性剂法脱脂革,提高了成革的等级率。     

中温碱性脂肪酶的研究Ⅱ.扩展青霉PF868变株产酶条件

本文报道中温碱性脂肪酶高产变株扩展青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ）ＰＦ８６８的产酶条件。研究结果表明ＰＦ８６８最适产酶条件为：碳源玉米粉,氮源黄豆饼粉,起始ｐＨ７．５,产酶培养温度２６℃,移种量１０％;亚适量的豆油有利于产酶;７００ｐｐｍ的泡敌不抑制菌丝生长且有利于产酶;适量的非离子表面活性剂Ｔｗｅｅｎ和Ｓｐａｎ类有利于菌丝生长和脂肪酶的释放。     

碱性脂肪酶的研究——Ⅰ.菌株的分离和筛选

碱性脂肪酶是在碱性条件下水解脂肪分子中甘油脂键的一种分解代谢酶。国外从60年代后期陆续有关于碱性脂肪酶研究的报道。国内至目前尚未见到由微生物中筛选到这类酶的报道,本文主要介绍从霉菌和细菌中,筛选产碱性脂肪酶菌株的研究结果。     

醋酸钙不动杆菌产生的耐热碱性脂肪酶的研究

从福建省福州市郊区土壤中分离筛选到一株活力强的作用温度高的碱性脂肪酶野生型菌株：醋酸钙不动杆菌F-1903。该菌产酶培养基组成(％)：大豆粉2.O、玉米浆1.0、糊精1.0、磷酸氢二钾0．5、硝酸钠0．5。产酶最适条件：发酵培养基起始pH9.0,温度26℃,周期2。小时。酶作用最适温度54℃,最适pH9．2。Ca2+件对酶有激活作用,EDTA有抑制作用。