基于RAPD改进的分子标记技术

随机扩增多态DNA(RAPD)由于经济、快速简便、不需预知模板DNA信息、对模板DNA要求较低,因此被大量应用于昆虫学的研究中,如昆虫的鉴定分类、构建连锁图谱、系统发育分析等。但RAPD也有许多缺点,主要是一种显性标记而不能区分杂合体和纯合体,结果的重复性易受多因素的影响等。针对这些缺点,人们通过将RAPD与其它检测技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳、单链构象多态(SSCP)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)等相结合,提高了其分析的灵敏度和稳定性;再者,还将RAPD标记发展成为其它更稳定的或共显性的标记,如SCAR、微卫星等,为RAPD进一步的应用开阔了前景。文章对这些检测和转化的改进技术进行综述。     

缓控释肥料在不同介质中的养分释放特性及其肥效

采用水浸法和土壤培养法测定了4种缓控释肥料（CRF1、CRF2、SCU、IBDU）的养分释放特性,并通过盆栽试验评价了缓控释肥料养分释放特性与油菜需肥规律的吻合性.结果表明：CRF1和CRF2在水中的释放曲线为“S”型,SCU为“破裂式释放”,IBDU的释放曲线呈倒“L”型;4种缓控释肥料在水浸法和土壤培养法中的养分释放特性均可用二项式方程进行拟合,说明两种方法存在一定的相关性.CRF1、CRF2两处理的油菜养分吸收量和生物量显著高于其他处理,以CRF2处理为最高,并且CRF1、CRF2的养分释放特性更接近油菜的需肥规律.     

微波处理对绿豆象的杀虫效果及对红小豆发芽率的影响

通过设置不同时间和功率的微波对裸露绿豆象Callosobruchus chinensis (L.)成虫、与红小豆混合的成虫、绿豆内幼虫及卵进行处理,以研究微波对绿豆象的杀虫作用及对绿豆象成虫产卵量、幼虫羽化率及卵孵化率等生物学特性的影响。试验结果表明：微波处理裸成虫的死亡率随处理时间及功率增加而升高。成虫在中高火和高火分别处理60 s和50 s以上时间时死亡率过半,为51.21%～99.92%。处理与红小豆混合的成虫死亡率随功率和时间变化趋势同相同处理的裸虫,但相同条件下与红小豆混合的成虫死亡率明显高于相同处理的裸虫。低火至中低火处理60 s、解冻50 s及中火至高火40 s以上时间时成虫死亡都过半,为55.75%～100%,而中火处理70 s、中高火至高火60～70 s可使成虫全部死亡。微波处理具一定后续效应,处理的成虫虽没立刻死亡但随后死亡率仍比对照高。成虫高火处理50 s后的第3天校正死亡率可达87.74%。微波处理还可降低绿豆象成虫产卵量、幼虫羽化率、卵孵化率及红小豆发芽率。成虫、卵和豆内幼虫对微波敏感性依次增高。红小豆在中低火处理60 s、解冻50 s、中火40 s、中高火至高火30 s以上时间时发芽率都低于一半,为0.21%～48.33%。微波对绿豆象杀虫效果显著,但使用时需考虑微波仪器、处理功率和时间、产品用途及含水量等诸多因素的影响并进行优化试验以取得最佳效果。     

控释肥硫膜降解对微域土壤性质的影响

硫包膜控释肥在农业上的大面积应用,引起了硫膜降解产物对土壤环境影响的广泛关注。选用山东有代表性的耕作土壤棕壤和潮土,设置处理包括硫加树脂残膜、硫残膜、硫磺片,采用尼龙滤网分隔法获取受控释肥硫膜影响较强的微域土壤,对比研究了硫膜对微域和非微域土壤某些化学性质的影响。结果表明,在棕壤上施用各含硫材料会显著影响微域土壤的pH值,微域各含硫材料的氧化高峰期出现在60d左右。硫膜降解对潮土pH值影响与棕壤相比不显著,但肥际微域与非微域相比下降明显。硫残膜对土壤中的微量元素能起到一定的活化作用,尤其是对潮土肥际微域有效铁的影响最为显著,培养结束时硫加树脂残膜处理是空白处理的6.58倍。潮土中施用含硫包膜控释肥可活化土壤养分,从而提高土壤中有效硫和有效磷的含量。控释肥硫膜降解对土壤性质影响显著的区域是在硫膜≤5mm范围内的土壤,而对非肥际微域土壤的化学性质无显著影响。     

温度对桃蛀螟生长发育和繁殖的影响

为了明确温度对桃蛀螟Conogethes punctiferalis (Guenée)生长发育和繁殖的影响, 本实验在恒温条件（15, 19, 23, 27和31℃共5个温度梯度）下, 以板栗为寄主食料, 研究了温度对桃蛀螟实验种群生长发育和繁殖的影响。结果表明： 温度对桃蛀螟各虫态的发育历期、 存活率、 蛹重以及种群繁殖力有显著影响。在15~27℃范围内, 各虫态的发育历期均随温度的升高而缩短, 发育速率与温度呈显著正相关。但是, 当温度上升至31℃时, 幼虫生长发育受到抑制, 其发育历期比27℃时延长了1.11 d, 而卵期、 蛹期和产卵前期仍符合随温度升高趋于缩短的趋势。此外, 15℃下桃蛀螟5龄幼虫发育停滞, 表明老熟幼虫的发育起点温度高于其他低龄幼虫。桃蛀螟世代存活率随环境温度变化的大小顺序为23℃>27℃>19℃>31℃, 其中, 23~27℃的存活率较高, 为54.44%~63.56%, 31℃时为4.30%, 说明温度过高或过低均不利于其生长发育。成虫产卵量在23℃时最高, 单雌平均产卵量达55.00粒, 其次为19℃和27℃, 单雌平均产卵量分别为43.30和39.70粒; 31℃下产卵量最少, 仅为20.90粒。由直接最优法计算得到桃蛀螟卵期、 幼虫期、 蛹期、 产卵前期及全世代的发育起点温度分别为10.37, 10.06, 14.27, 7.47和11.85℃, 有效积温依次为70.84, 287.71, 118.42, 58.33和509.06日度。研究结果为桃蛀螟发生期的预测预报提供了基础参考数据, 对指导生产实践有实际的应用意义。     

AFLP标记的特点及其在昆虫学研究中的应用

扩增片段长度多态性（AFLP）是一种新兴的很有效的分子遗传标记方法, 它通过对基因组DNA限制性内切酶酶切片段进行选择性扩增而揭示多态性,具有快速、经济简便、不需要预先知道模板DNA的信息、模板需要量少、重复性高、结果可靠及具有很高的信息含量等优点。AFLP也具有缺点,主要是标记是显性的,同其他显性标记一样,不能区分杂合体和纯合体,因而不能更好地估算种群遗传的变异,对种群遗传结构的分析不能提供更多的统计信息;AFLP技术较复杂,而且经常使用放射性同位素,对模板DNA质量要求也较高。为了克服AFLP的这些缺点,人们又在其基础上发展了其他相关技术,例如AFRP、SAMPL、DALP和TE-AFLP等。目前AFLP在昆虫方面的应用还不是很多,处于初级阶段,主要应用在生态型鉴定、种群遗传分析、连锁图谱构建等方面,相信随着其技术的发展完善,必将会越来越多地应用于昆虫学的研究中。     

去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道体内实验初步研究

目的：将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,观测带瓣管道材料体内情况。方法：去细胞处理牛颈静脉体,无菌处理后种植标记过的犬骨髓间质干细胞,构建组织工程带瓣管道,犬开胸手术,将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,术后4、8、12行胸部B超检查;取出补片,HE染色;荧光显微镜下标记细胞检测;样本钙含量测定。结果：术后犬胸部B超观察：瓣叶无增厚,钙化,管道血流通畅,无血栓及钙化。术后4、8、12周除了瓣叶逐渐缩小外,补片无动脉瘤形成,瓣膜表面光滑,无血栓形成,弹性良好,血管壁内面光滑,无血栓形成。种植种子细胞牛颈静脉带瓣补片成活。4周钙含量增加,8周时候,钙含量又有增加,12周时钙含量与8周相比无明显变化。结论：组织工程技术构建组织工程右心带瓣管道有可行之处。     

斑蝥素对小菜蛾体壁组织结构的影响

为探究昆虫天然产物斑蝥素(cantharitin,CTD)对鳞翅目昆虫小菜蛾Plutella xylostella(L.)的触杀机制,利用透射电子显微镜观察了该物质处理小菜蛾4龄幼虫体壁组织结构的变化。斑蝥素亚致死剂量0.15μg/头和半致死剂量0.3μg/头点滴处理试虫前胸背板,中毒试虫反映结果类似。处理12h后中毒试虫虫体发黑,陆续死亡。处理12h后,体壁细胞细胞核固缩并且边极化,线粒体扭曲,内脊模糊出现空泡化,线粒体和粗面内质网数量下降;处理24h后,体壁细胞出现的类似处理12h后的症状,且症状更为明显。结果表明CTD对小菜蛾体壁表皮层组织结构无显著破坏作用,但对体壁细胞有明显的致毒作用。     

去细胞牛颈静脉构建组织工程右心带瓣管道体内 实验初步研究

目的:将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,观测带瓣管道材料体内情况。方法:去细胞处理牛颈静脉体,无菌处理后种植标记过的犬骨髓间质干细胞,构建组织工程带瓣管道,犬开胸手术,将体外构建的组织工程右心带瓣管道,以带瓣补片的形式移植于犬主肺动脉,术后4、8、12行胸部B超检查;取出补片,HE染色;荧光显微镜下标记细胞检测;样本钙含量测定。结果:术后犬胸部B超观察:瓣叶无增厚,钙化,管道血流通畅,无血栓及钙化。术后4、8、12周除了瓣叶逐渐缩小外,补片无动脉瘤形成,瓣膜表面光滑,无血栓形成,弹性良好,血管壁内面光滑,无血栓形成。种植种子细胞牛颈静脉带瓣补片成活。4周钙含量增加,8周时候,钙含量又有增加,12周时钙含量与8周相比无明显变化。结论:组织工程技术构建组织工程右心带瓣管道有可行之处。     

不定根向重力性定点角不同的苹果自根砧插穗内源激素差异分析

研究不定根向重力性定点角(GSA)不同的苹果(Malus spp.)自根砧木在嫩枝扦插生根过程中的插穗中内源激素含量动态变化,为通过外源激素调控不定根GSA提供理论依据。以八年生苹果‘国光’(M.pumila cv.Ralls)与海棠(M.sp.)杂交实生苗的当年生枝条为试验材料,于5月中旬进行嫩枝扦插,筛选出不定根GSA不同的株系,并于次年再次进行嫩枝扦插,在扦插后0、8、16、24和32 d随机取插穗基部检测内源激素含量。试验结果表明:(1)按照扦插苗不定根GSA的不同,可把苹果自根砧苗木分为3类:30°≤GSA≤60°的不定根比例不小于50%,且GSA30°的不定根比例大于GSA60°的比例的自根砧,属于深层根型(DRT);30°≤GSA≤60°的不定根比例不小于50%,且GSA30°的不定根比例小于GSA60°的比例的自根砧,属于中间根型(IRT);GSA60°的不定根比例不小于50%,且30°≤GSA≤60°的不定根比例大于GSA30°的比例的自根砧,属于浅层根型(SRT)。(2)在苹果自根砧嫩枝扦插生根过程中,3种根型插穗内吲哚乙酸(IAA)含量的变化趋势呈"倒V"形,脱落酸(ABA)和异戊烯基腺嘌呤(iPA)含量呈下降趋势,玉米素核苷(ZR)含量呈"下降-上升-下降"的趋势;赤霉素(GA3)含量在中间根型插穗中的变化趋势呈"倒V"形,在深、浅层根型的则呈"V"形;扦插16 d后,插穗中IAA含量表现为深层根型中间根型浅层根型,ZR和GA_3含量表现为深层根型中间根型浅层根型,ABA和iPA含量表现为中间根型浅层根型深层根型,IAA/GA_3、IAA/ZR和IAA/iPA比值表现为深层根型中间根型浅层根型。扦插16 d后,不定根GSA越小,插穗中IAA含量越少,ZR和GA_3含量越多,IAA/GA_3、IAA/ZR和IAA/iPA比值越小。生长素是参与不定根GSA形成的主要激素,其在从茎尖向不定根的极性运输过程中与细胞分裂素相互作用,共同调节不定根GSA的形成。