游蛇的Duvernoy氏腺体及其分泌物

长期以来 ,人们认为毒蛇与无毒蛇的根本区别在于前者有毒腺、毒牙 ,然而 ,对后沟牙无沟牙游蛇 Duvernoy氏腺体或口腔分泌物的毒性进行研究发现 ,有些游蛇其上颌牙无沟亦无管 ,却具有毒性 [1] 。游蛇的 Duvernoy氏腺体及其分泌物一直很少受到关注 ,这种复杂的管状腺体由 1 9世纪初 ,法国著名的形态学家 George Louis Duvernoy命名 ,因而称为 Duvernoy氏腺体。　　游蛇占世界上所有蛇类的 65% ,至少包括 6个亚科 ,大约 1 56种。目前还不清楚究竟有多少种游蛇具有 Duvernoy氏腺体。在人类研究的 30 0种游蛇中 ,发现 2 50种游蛇具有 Duverno…     

抗菌肽CM4组分对K562癌细胞染色质DNA断裂作用的SCGE研究

单细胞凝胶电泳法（singe cell gel electrophoresis, SCGE)是一种快速,敏感的检测单个哺乳动物细胞DNA断裂的技术,也叫彗星实验（comet assay).此实验首次通过SCGE法观察抗菌肽CM4组分对人髓样白血病K562细胞和正常人白细胞核染色质DNA的影响,从而进一步研究抗菌肽抗癌作用的机制.荧光显微镜观察显示经抗菌肽CM4组分处理过的K562癌细胞核染色质DNA出现断裂,形成一个亮的荧光头部和彗星似的尾部,而经同样处理的正常人白细胞和未经抗菌肽处理的K562癌细胞核染色质DNA未出现断裂,核完整,呈圆形.经彗星尾长分析,前者DNA损伤率平均为73.62%,统计学处理P＜0.001,具高度显著性差异.这表明,抗菌肽CM4对K562癌细胞核染色质DNA有明显的断裂作用,而对正常人白细胞则没有断裂作用.     

中国家蚕抗菌肽CBM1、CBM2的克隆和表达研究

根据所测定的中国产家蚕CBM1和CBM2 cDNA序列,设计成熟肽的特异性引物,将此基因与凝血因子Xa（FXa）的切割序列以PCR方法连接起来,克隆至pGEX—KG表达质粒中。该载体为改进的GST融合表达质粒,所携带的6个Gly有助于提高FXa的切割效率。克隆得到的融合载体在大肠杆菌JM109中扩增和筛选。经DNA测序,证实为含有正确序列的乙酰化的pGEX—KG—FXa—NCBM1（pKG—FXa—NCBM1）、非乙酰化的pGEX—KG—FXa—CBM1（pKG—FXa—CBM1）和乙酰化的pGEX—KG—FXa—NCBM2（pKG—FXa—NCBM2）、非乙酰化的pGEX—KG—FXa—CBM2（pKG—FXa—CBM2）。将该载体在BL21中诱导表达,得到GST-FXa切割位点NCBM1、CBM1、NCBM2、CBM2等4种融合蛋白。经SDS—PAGE,考马斯亮兰染色后,Lab—Work扫描,其表达产物达到15％～20％,每升培养液平均可得20mg融合蛋白。菌体总蛋白经GST-亲和层析柱得到纯的GST—FXa—NCBM1、GST—FXa—CBM1、GST—FXa—NCBM2、GST—FXa—CBM2融合蛋白,再经FXa酶切后,透析过柱得到重组的NCBM1和CBM1。平板抑菌试验证明,4种融合蛋白均有明显的生物学活性,且没有显著的差异。     

耐热嗜酸古细菌Sulfolobus acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的表达调控和性质研究

古细菌Sulfolobus acidocaldarius细胞内谷氨酰胺合成酶的表达量随着培养条件的改变有较大差异,RNA印迹表明,该差异是在mRNA水平受到调控.经DEAE-Sepharose和Sephacryl S-300两步分离酶蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶过滤测定分子质量,表明该酶为12个相同亚基组成,分子质量为630 ku的多聚体.该酶的最佳pH为7.3;对羟胺、谷氨酰胺、ADP和Mn2+的Km值分别为3.5 mmol/L、1.3 mmol/L、0.15 mmol/L和0.24 mmol/L;其γ-谷氨酰转移酶活性和生物合成酶活性的最佳温度均为90℃.Arrhenius曲线表明,γ-谷氨酰转移酶的活化能为47 kJ/(mol*K),生物合成酶的活化能分别为29 kJ/(mol*K)(40～75℃)和10 kJ/(mol*K)(55～90℃).对该酶的抑制剂研究发现,与其他来源的谷氨酰胺合成酶不同,甘氨酸、L-丙氨酸能明显抑制 S.acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的活性,而常规的抑制剂如L-色氨酸、L-组氨酸、5′-AMP却没有抑制作用,甘氨酸、L-丙氨酸的抑制作用为竞争性抑制,推断该酶的活性调节与绝大多数革兰氏阳性菌一样不受腺甘酰化的影响.     

江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒的抑菌作用及其抑菌组分L-氨基酸氧化酶的分离纯化

我们用平皿测活法研究了江浙蝮蛇毒对真菌和大肠杆菌生长的抑制作用，并对其抗细菌的组分进行柱层析分离纯化，得到组分单一的LAO不仅有抑菌作用还有L-氨基酸氧化酶的活性。纯化后LAO的比活力为808U／mg。蛇毒经酸性聚丙烯酰胺电泳后测抑菌活性发现有3个抑菌组分(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，LAO为抑菌组分Ⅱ。