人CD147的克隆表达及其对成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

CD147可以促进基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,与肿瘤的生长和浸润有关。为了研究CD147在大肠癌中的作用,利用RT-PCR从一健康人克隆了cd147基因,测序发现该基因存在两个碱基突变,其中C634T造成了CD147跨膜区212位氨基酸由L突变为F。分别构建CD147的原核(pGEX-5x-147)和真核(pEGFP-147)表达系统,在宿主菌BL21和CCL229细胞中均获得了稳定表达。Western印迹显示原核表达产物比真核CD147分子量小,说明原核CD147缺乏糖基化。荧光显微镜显示真核CD147表达定位于CCL229细胞膜,表明突变L212F不影响CD147的膜定位。用明胶电泳检测表达的CD147对MMPs表达的影响,结果显示原核产物不能诱导MMPs表达上调,而真核产物能够明显诱导MMPs表达上调,说明糖基化对于CD147活性是必需的,真核系统能够表达具有生物功能的CD147,并且突变L212F不会影响蛋白质的活性。     

不同CO_2浓度条件下灰飞虱体内RSV的定量检测

灰飞虱的群体带毒率及体内条纹病毒(rice stripe virus,RSV)的准确检测是预测水稻条纹叶枯病在CO2浓度升高背景下能否大发生的重要参考依据之一。本研究应用quali-fiedRT-PCR(qRT-PCR)测定不同CO2浓度条件下灰飞虱体内的RSV含量。结果表明:在试验的3个CO2浓度梯度(370、470和570μl.L-1)下,470μl.L-1的CO2浓度最适合RSV在灰飞虱体内的增殖,此方法与现已普遍应用的酶联免疫检测法(enzyme-linkedi mmu-nosorbnent assay,ELISA)和斑点免疫结合检测法(dotimmunobinding assay,DIBA)相比,具有快速、灵敏和特异性强的优点,且不需制备抗血清,适于普及应用。     

小麦RCA的cDNA片断克隆和反义表达载体的构建

目的:试图分离和克隆小麦Rubisco活化酶cDNA片断并构建反义表达载体。方法:采用RT-PCR技术克隆cDNA片断,对序列用Blast等软件进行分析,并将该片断反向连接于植物表达载体pROK2的CaMV35S启动子下游,构建反义表达载体。结果:获得了小麦Rubisco活化酶(RCA)的cDNA片断(GenBank注册号:DQ984669);小麦RCA的cDNA片断推导的氨基酸序列与其它植物的RCA氨基酸序列高度同源。序列比较表明,用本实验所得的cDNA序列推导出的氨基酸序列与GenBank登录的大麦(AAA63163)、南极银须草(AAP83928)、水稻(AAX95414)、玉米(AAC97932)、拟南芥(NP 850321)和烟草(CAA78703)等的RCA序列的同源性分别为97%、95%、88%、83%、82%和82%;分析表明,该序列为新的小麦RCAα的cDNA序列;通过选择和引入合适的酶切位点进行载体构建,构建了小麦RCA的cDNA反义表达载体pR-AntiRCA。结论:构建成了小麦RCA的cDNA反义表达载体。     

检测人老化胎盘组织中miR-182的表达

目的：通过检测miR-182在正常妊娠各期、老化胎盘组织中的表达,探讨miR-182在胎盘发育过程中的调控作用,并同时探讨miR-182与血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的相关性,为寻找胎盘老化特别是胎盘提前老化发生机制提供依据。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测42例标本（早孕绒毛和胎盘组织）中miR-182的表达情况。结果：miR-182在正常妊娠早孕绒毛组织、正常妊娠胎盘组织及老化胎盘组织中均表达。miR-182表达水平各个组间比较：早期与中期妊娠组、中期与晚期未足月妊娠组、晚期未足月与晚期足月妊娠组有显著差异（P〈0.05）;胎盘老化组与正常妊娠早期、中期、晚期未足月、晚期足月组有极显著差异（P〈0.01）;妊娠的早期、中期、晚期,miR-182的表达逐渐增多,老化胎盘组织中miR-182高水平表达。结论：miR-182与胎盘老化的发生高度相关,可能在胎盘老化机制中起重要的调控作用。     

PBL+SP教学方法在七年制妇产科实习教学中的应用

目的:探讨PBL+SP教学方法在七年制妇产科实习教学中的应用效果.方法:以哈尔滨医科大学七年制三个班共105名学生为研究对象,随机选取PBL+SP教学试验组及传统方式+SP教学对照组研究对象,在妇产科实习教学中采用不同的教学方法,以阶段考试评价教学效果.结果:试验组和对照组基础知识题得分无明显差异,试验组病例分析题得分与对照组有统计学差异(P＜0.05).结论:PBL+SP教学方法既能锻炼学生的临床思维能力,又能保证基础知识的掌握,适合在七年制学生实习教学中应用.     

黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建

以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8.该质粒通过E.coil ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接舍转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3.通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点.以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高迭1 000 μg/mL以上.     

腺相关病毒载体介导的人内皮抑素的体外表达及对内皮细胞抑制作用的研究

抗血管生成基因治疗是一有希望的抑制肿瘤生长及转移的方法.在实验中构建了含有人内皮抑素(endostatin)基因的重组腺相关病毒载体rAAV-hE.所包装纯化的重组病毒滴度达0.5×1012v.g./ml.rAAV-hE能有效感染培养细胞,EIA法检测培养液上清中内皮抑素浓度达36.42ng/ml.rAAV介导所表达的内皮抑素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)和牛毛细血管内皮细胞(BCE)具有抗增殖抑制作用,抑制率分别为68.1%和41.6%.此结果为进一步的动物实验奠定了基础,表明重组腺相关病毒载体介导的抗血管生成有望应用于肿瘤基因治疗.     

着丝粒区域DNA的研究进展

着丝粒是染色体的重要结构,在真核生物的细胞分裂中负责染色体的分裂分离。近年来对着丝粒的研究已经成为遗传学的一个热点。本文对着丝粒DNA的重复序列、着丝粒区域的基因及着丝粒的形成机制等作了简要的介绍。     

于俊生教授诊治慢性肾功能衰竭的经验

于俊生教授在多年临床经验基础上提出脾肾亏虚,痰湿、瘀血、浊毒潴留,少阳枢机不利是慢性肾功能衰竭的病机关键。慢性肾功能衰竭以脾肾亏虚为本,痰湿、瘀血、浊毒留蓄为标,以及在慢性肾功能衰竭中的致病特点和常见临床表现。于俊生教授治疗慢性肾功能衰竭的特点是重视肾脾胃功能的调理及兼顾活血化瘀、利湿泄浊解毒,标本兼治;辨病与辨证相结合,运用中医辨证论治理论,使病理进程减慢,肾功能得以改善。