用质粒作底物测定核糖体失活蛋白酶活性的新方法

植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类能作用于核糖体最大RNA的独特蛋白质.它是研究蛋白质生物合成中核糖体RNA结构与功能的有力工具.利用RIP能在DNA中脱去一些腺嘌呤碱基使超螺旋DNA解旋的特点,分别以常用的质粒PUC18、PUC19和PBR322 DNA为底物,建立了测定RIP酶活性的一种新方法,其灵敏度是50ng(天花粉蛋白)和5ng(还原型的辛纳毒蛋白),酶催化反应的时间是60min.这个新方法具有方便、快捷、灵敏的特点,避免了常用方法中制备核糖体、提取RNA的仪器和技术条件的限制,检测的时间由原来的几天缩短到约120min,大大地降低了检测的费用,为广泛和深入地研究RIP提供了有利的条件.     

核糖体失活蛋白对核糖体拓扑结构的影响

辛纳毒蛋白和克木毒蛋白是本实验室纯化的2种新RIP,它们的作用位点是大鼠肝核糖体285rRNA的A4324.足迹分析表明除 A4324位外,其上、下文的鸟苷酸、腺苷酸也是辛纳毒蛋白和克木毒蛋白的识别位点.辛纳毒蛋白或克木毒蛋白修饰大鼠肝核糖体后,其rRNA的拓扑结构发生了变化,rRNA茎环结构中的双链区相对增多,核糖体的整体拓扑结构也随之变化,80 S核糖体减少,60 S和 40 S亚基增多.以上结果表明“S/R结构域”修饰后所引发的rRNA及核糖体拓扑结构的变化是RIP抑制蛋白质合成的重要机理之一.     

克木毒蛋白三种酶活性与色氨酸残基的关系

对一种新的核糖体失活蛋白──克木毒蛋白的研究表明,该分子中仅含一个色氨酸.此色氨酸与克木毒蛋白具有的三种酶活性有明显不同的关系.     

樟树核糖体失活蛋白在种子成熟过程中的动态变化与特性

樟树种子中存在着ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ两种新的核糖体失活蛋白,电泳分析与Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交结果表明ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ在９、１０、１１月份种子中的含量分别是８．９％２６．８％和１１．５％,以１０月份种子的含量为最高。ｃａｍｐｈｏｒｉｎ的含量则分别为１．７％,２．５％与４．６％,随着种子的成熟而为断增加。８月份的幼嫩种子中检测不出ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ。这表明樟树     

樟树核糖体失活蛋白在种子成熟过程中的动态变化与特性

樟树种子中存在着ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ两种新的核糖体失活蛋白,电泳分析与Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交结果表明ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ在９、１０、１１月份种子中的含量分别是８．９％,２６．８％和１１．５％,以１０月份种子的含量为最高。ｃａｍｐｈｏｒｉｎ的含量则分别为１．７％,２．５％与４．６％,随着种子的成熟而不断增加。８月份的幼嫩种子中检测不出ｃｉｎｎｍａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ．这表明樟树核糖体失活蛋白的表达受到了发育进程的时态调控．樟树叶片中可能不存在ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ,即两者的合成似乎具有一定的组织特异性．ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ均为糖蛋白。     

核糖体RNA拓扑学与RNA N－糖苷酶研究进展（下）

28S rRNA的α-sarcin结构域直接参与核糖体催化的蛋白质合成反应,已经证明天花粉蛋白是一种RNA N-糖苷酶,一种测定RNA N-糖苷酶活力的新方法也已初步建立.天花粉蛋白能使超螺旋DNA解旋并断裂为缺口环状和线状DNA.并已发现其它RNA N-糖苷酶也具有这一核酸内切活性.天花粉蛋白对28S rRNA,超螺旋DNA和艾滋病毒(HIV-1)RNA三种底物可能有相同的分子作用机制.     

穴居狼蛛毒中磷酸单酯酶和核酸酶的研究

本文分别用对硝基酚磷酸酯、3＇-[32p]标记的RNA和大肠杆菌噬菌体入DNA作底物测定了新疆产穴居狼蛛毒中与核酸代谢有关的酶,发现此毒中含有磷酸单酯酶、核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶。     

乌骨鸡皮肤酪氨酸酶的荧光特性研究

酪氨酸酶是生物体合成黑素的关键酶,广泛存在于动植物及人体黑素细胞中.我们曾用一步柱层析方法纯化了乌骨鸡皮肤酪氨酸酶.本文报道用荧光光谱学研究乌骨鸡酪氨酸酶物化性质的一些实验结果. 酪氨酸酶在聚丙烯酰胺疑胶上仅呈一条带. 乌骨鸡酪氨酸酶和许多既含色氨酸又含酪     

固相RNasin亲和层析RNase

大鼠肝RNasin与溴化氰活化的Sepharose 4B反应制备了固相大鼠肝RNasin。用固相大鼠肝RNasin亲和层析大鼠肝中性RNase,可以将其分为两部分。固相大鼠肝RNasin可以亲和层析牛胰RNase的结果说明,牛胰和大鼠肝RNase在二级和三级结构上都非常相似。这为大鼠肝RNase来源于胰脏的观点提供了一个新证据。固相RNasin可以亲和吸附大肠杆菌RNase说明原核细胞RNase与真核细胞RNase在分子起源方面有一定的亲缘关系。固相RNasin柱层析为纯化RNase提供了一个简便的新方法。