土壤中脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及脂肪酶基因的克隆

以橄榄油为惟一碳源进行富集培养、以罗丹明B为指示剂的平板进行初筛,摇瓶复筛得到产脂肪酶菌株;利用滴定法、平板扩散法以及转酯反应试验,最终筛选出具有较高转酯活性脂肪酶的菌株B2.通过对B2进行形态学观察,生理生化测定以及16S rDNA特征片段比较分析,初步确定B2为克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.).通过特定引物PCR扩增得到B2菌株两个脂肪酶基因K1和K2.利用丙酮法和(NH)2SO4沉降法得到B2菌株体内的胞内酶,以叔丁醇为溶剂,催化棉籽油与甲醇反应,经过薄层层析和高效液相检测产物为生物柴油.     

广西木论喀斯特森林土壤养分水平与植被及地形的关系

研究了广西木论喀斯特森林原生植被和次生植被的土壤养分特征,测定了陡坡、缓坡、洼地3种主要地形内林地0～5 cm表层土壤中的有机质(SOM)、氮、磷、钾含量,以及它们在石土面、土面两类主要小生境间的差异.结果表明:林分成熟度高、优势种不明显的原生林积累了高水平的SOM,缓坡石土面最高,达345 g kg-1,洼地的含量较低,但仍在80 g kg-1以上;土壤全氮(TN)、碱解氮(AN)含量也较高.以红背山麻杆(Alchornea trewioides)、广西野桐(Mallotus conspuyrcatus)、伞花木(Eurycorymbus cavderiei)等为优势种的次生林,物种多样性较原生林低,SOM、TN、AN含量也低,缓坡石土面和土面小生境的SOM分别为110 g kg-1和77 g kg-1,是原生林的32%和35%,下降幅度最大,其次为陡坡,而洼地的差异不明显.全磷(TP)、有效磷(AP)、全钾(TK)、有效钾(AK)含量在两林型间差异无明显规律.原生林和次生林土壤养分含量(除TK外)以缓坡>陡坡>洼地;但次生林中三者间无显著差异.同类型样地内小生境土壤养分含量(除TK外)均为石土面含量高于土面.     

中国不同年代食品动物大肠杆菌耐药性调查研究

收集到20世纪70,80,90年代和2000年食品动物大肠杆菌共326株,对不同年代的大肠杆菌进行耐药性、整合子／基因盒测定,结果表明在过去的30多年里,食品动物大肠杆菌耐药性呈逐渐增长的趋势．从1970～2000年,对青霉素类的耐药率从19．0％增长到81．3％;对四环素类药的耐药率从61．9％～63．5％增长到89．5％～93．1％;对氨基糖甙类的耐药率从0-9．5％增长到5．0％～63．1％,对氟喹诺酮类的耐药率从0％增长到50.2％-53．0％;对磺胺类药的耐药率从11．7％～57．1％增长到77．7％～79．7％;对氯霉素的耐药率从39．7％增长到51．8％．整合子的携带率从20世纪70年代的17．5％增长到2000年的79．1％,其中大多数为I型整合子,也有少数Ⅱ型整合子（90年代为4．4％,2000年为11．8％）．在20世纪70和80年代,大多数I型整合子的基因盒编码aadAI基因,比例分别为72．7％和70．0％．20世纪90年代和2000年基因编码dfrA—aadA的占多数,分别为80．0％和74．7％．近4个世纪以来,细菌的多重耐药谱也逐渐增宽．本项研究给兽医从业者滥用抗菌药提出了警示,同时提出中国动物源细菌耐药性的监测和控制是必要的．     

植物病原黄单胞菌退出群体感应生理状态的分子机制和生物学意义

黄单胞菌是一类引起多种作物病害的病原细菌总称。它们利用自身产生的DSF(Diffusible signaling factor)-家族群体感应(quorum sensing,QS)信号分子感应群体密度,调控致病相关基因的表达。当黄单胞菌培养达到对数生长后期时,培养体系中DSF信号分子浓度迅速降低,呈现一种典型的群体感应信号反转(turnover)现象。编码脂酰辅酶A连接酶的基因rpfB在黄单胞菌生长后期表达量显著提高,敲除rpfB导致DSF生物合成显著提高,因此,RpfB参与DSF-家族QS信号分子的降解,在群体感应后期引导黄单胞菌退出群体感应状态。DSF信号通过RpfC/RpfG双组分系统、环二鸟苷酸和全局性转录因子Clp负调控rpfB的表达。DSF群体感应信号关键降解基因rpfB存在于多种细菌中,表明该信号反转机制相对保守,但其调控的生物学功能因菌而异。     

安荔赤眼蜂在中国野外首次发现及其体内Wolbachia的检测

【目的】为丰富赤眼蜂Trichogramma的种类资源,明确野外新采集的一种赤眼蜂的种类,探明该赤眼蜂所感染Wolbachia的类型。【方法】采用挂米蛾Corcyra cephalonica卵卡法在华南农业大学树木园诱集到两批赤眼蜂,通过形态鉴定和PCR扩增ITS2序列并测序分析的分子鉴定手段对野外采集的赤眼蜂材料进行种类鉴定;通过PCR扩增Wolbachia的外膜蛋白基因(wsp)序列,检测赤眼蜂体内Wolbachia的感染情况;通过PCR扩增wsp序列和多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)对检测到的赤眼蜂体内的Wolbachia进行同源性分析。【结果】所诱集到的两批赤眼蜂均被鉴定为安荔赤眼蜂Trichogramma oleae Voegelé & Pointel,体内Wolbachia的感染率达100%。该Wolbachia株系与安荔赤眼蜂(前南斯拉夫品系)、短管赤眼蜂T. pretiosum(乌拉圭品系)以及T. deion(荷兰品系)体内Wolbachia亲缘关系较近,属于B超组Sib亚组,对应MLST序列型为ST486。【结论】安荔赤眼蜂T. oleae为中国野外首次发现,是完全感染Wolbachia的产雌孤雌生殖品系。本研究为害虫生物防治提供了一种新的天敌种类资源,并为进一步探明Wolbachia与赤眼蜂的互作提供了研究材料。     

毛菍的组织培养和植株再生

1 植物名称 毛菍（Melastoma sanguineum Sims．）。 2材料类别 成熟种子。 3培养条件 种子萌发培养基：（1）MS0;芽诱导增殖培养基：（2）MS＋6-BA0．5mg·L^-1（单位下同）＋NAA0．02;（3）MS＋6-BA0．5＋NAA0．2;（4）MS＋6-BA2．0＋NAA0．02;（5）MS＋6-BA2．0＋NAA0．2;（6）MS＋6-BA5．0＋NAA0．02;（7）MS＋6-BA5．0＋NAA0．2;（8）MS＋TDZ0．5：（9）MS＋TDZ0．5＋NAA0．2;     

耐碱性木聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及其酶学性质

摘要：【目的】从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因,将其在巨大芽孢杆菌中进行表达,并对表达产物进行性质分析。【方法】将克隆得到的木聚糖酶基因xynA以及带有自身启动子序列的结构基因, 构建在芽孢杆菌表达载体pWH1520和改造后的载体pWG03中,得到重组质粒pWTEJX和pWGXYN,分别转化到巨大芽孢杆菌BM70中,获得重组巨大芽孢杆菌BMJXH9和BMGpp12;经过诱导产酶培养,均得到分泌表达。【结论】重组巨大芽孢杆菌BMGpp12比BMJXH9产酶活力提高了三倍     

火针层孔菌（桑黄）粗多糖对荷瘤小鼠的免疫调节研究

研究了火针层孔菌不同粗多糖对荷瘤小鼠的免疫调节作用。荷瘤小鼠随机分为四组:胞外粗多糖组、菌丝体粗多糖组、子实体粗多糖组和生理盐水阴性对照组。给药10d后测定荷瘤小鼠脾NK细胞活性和脾淋巴细胞的增殖率。结果显示火针层孔菌粗多糖组与阴性对照组相比能够提高小鼠脾NK细胞活性和脾淋巴细胞的增殖率(P<0.01),表明火针层孔菌液体发酵粗多糖和子实体粗多糖对荷瘤小鼠免疫功能均有调节作用。     

Livin shRNA质粒载体的构建及评价

目的:构建有效的Livin shRNA重组质粒.方法:设计、合成Livin shRNA,与pGenesil-1质粒载体链接构建重组质粒,通过酶切电泳、基因测序证实是否正确构建,通过转染高表达Livin的大肠癌HT-29细胞检测Livin mRNA下降水平,筛选出最佳的shRNA.结果:重组质粒pGenesil-shRNA经酶切电泳、基因测序证明寡核苷酸片段成功插入预计位点,且序列与我们设计合成的完全一致;重组质粒载体转染HT-29细胞后,肿瘤细胞Livin mRNA含量较转染前及对照组均有明显的下降(p＜0.01),其中尤以Livin1抑制作用明显,抑制率达到66%.结论:我们正确构建了Livin ShRNA重组质粒,且制备的shRNA能有效抑制Livin基因的表达,为探讨针对Livin基因的RNAi对肿瘤的治疗奠实验基础.     

广东省珠海地区蜻蜓目昆虫物种多样性调查

2006～2008年对广东省珠海地区的蜻蜓资源进行调查研究.经过对采集标本的鉴定,珠海地区蜻蜓目昆虫为2亚目7科19属24种,其中2种为广东新记录种,7种为优势种.该地区蜻蜓几的区系特点是:东洋种15种,占总数的50.00%;古北种11种,占总数的36.67%;广布种4种,占总数的13.33%.