一种基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单域抗体的阻断ELISA方法及其评价

文中旨在利用猪流行性腹泻病毒 (Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S1蛋白生物素化纳米抗体建立一种阻断酶联免疫吸附试验 (Blocking enzyme-linked immunosorbent assay,bELISA) 方法,用于检测猪体内PEDV抗体水平及疫苗免疫效果的评估。对PEDV S1蛋白的特异性单域抗体 (Single-domain antibodies,sdAb) sdAb3基因进行扩增,并在3′端融合Avitag序列,构建至原核表达载体pET21b,进行sdAb3-Avitag蛋白诱导表达纯化。对纯化的sdAb3-Avitag融合蛋白进行生物素标记并鉴定其活性。以PEDV重组S1蛋白为抗原,通过对各反应条件进行摸索与优化,建立一种可靠灵敏的bELISA方法应用于血清样品检测,并与商品化试剂盒检测进行比价。成功构建重组载体pET21b-sdAb3-Avitag并诱导表达出sdAb3-Avitag蛋白。体外生物素标记的sdAb3 (sdAb3-Biotin) 具有良好的活性。所构建的bELISA方法中,最适参数为：S1蛋白的包被浓度200 ng/孔;血清稀释比例1︰2,血清孵育时间2 h;sdAb3-Biotin稀释比1︰8 000,孵育时间30 min;酶标抗体稀释比例1︰5 000,反应时间30 min。所建立的方法与猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等主要猪源病毒的阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性和重复性。利用建立的bELISA方法对临床54份猪血清样品进行检测,结果显示,该方法与商品化试剂盒检测结果具有92.56%的总体符合率。文中建立了一种省时可靠的bELISA方法,可用于PEDV的临床监测和疫苗免疫效果评估。     

精准肝切除术治疗原发性肝癌的临床效果分析

目的:探讨腹腔镜精准肝切除术的特点及效果,为普外科手术提供参考。方法:选取2011年10月-2013年7月我院收治的92例原发性肝癌患者的临床资料进行回顾分析。根据手术方式不同,将病例分为常规肝切除组和精准肝切除组,每组46例。观察并比较两组患者的评均术中出血量、手术时间、住院时间、手术前后的肝功能指标变化、并发症的发生率、肿瘤局部复发率及远期转移率等。结果:与常规肝切除组相比较,精准肝切除组患者的平均术中出血量少、住院时间短、术后并发症的发生率及肿瘤复发转移率低,但手术时间较长,组间比较差异显著,具有统计学意义(P0.05)。与手术前比较,两组患者手术后的血清TBIL、ALT及AST含量降低,ALB升高,精准肝切除组患者各项指标的变化程度更显著,肝功能优于常规肝切除组,组内及组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:精准肝切除术对于原发性肝癌的治疗具有良好临床的效果,不仅能够彻底清除病灶,而且降低了术后肝衰竭等并发症的发生率,值得推广应用。     

核酸疫苗pcDNA3.1-EG95的构建及在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达

克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95。根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序。重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录。测序结果表明克隆的目的基因包含了471bp的完整ORF并与载体连接正确。RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究。     

脾切除术对肝炎后肝硬化患者肝癌发生的影响

目的:观察脾切断流术对肝硬化门静脉高压症患者肝功的影响.方法:回顾分析2010.4-2011.12在我科住院的肝硬化门静脉高压症患者行脾切除术前后肝功能的变化.应用超声多普勒分别检测手术前后门静脉血流量(PVF)、肝动脉血流量(HAF),术中水柱法测量自由门静脉压力(FPP);回顾分析(通过对病历查阅获取)上述患者Child分级指标以及肝功能指标.用SAS 8.0对获取的指标采用配对资料t检验和卡方检验.结果:肝硬化门静脉高压症患者共480例,行脾脏切除加贲门周围血管离断术450例,单纯脾切除30例.PVF由术前的(1368± 402)ml/min减少至术后的(986± 295)ml/min(P＜0.01);HAF由术前的(412± 68)ml/min增加至术后的(526± 132)ml/min(P＜0.01);FPP由术前的(30± 6)cm H2O降至术后的(26± 5)cm H2O(P＜0.01).R15 ICG由术前的(18±8)％降至术后的(16±7)％(P＞0.05).肝功能Child分级A级患者比率由术前85％增加至术后95％(P＜0.01).其它肝脏功能指标如总胆红素、凝血酶原延长时间以及腹水消失率都明显好转.结论:脾切断流术后门静脉血流量虽然减少,但是肝动脉血流量增加及术后门体分流减少均有利于肝功能恢复.     

血管闭合系统(LigaSure)在门静脉高压症患者脾切除、贲门周围血管离断术中的应用

目的:本文旨在通过对比LigaSure与传统分离结扎在门静脉高压症脾切除、贵门周围血管离断术中的应用,来证实LigaSure是否同样适用于门静脉高压症手术.方法:将拟行脾切除、贲门周围血管离断术的患者共100例,随机分成LigaSure组(50例)和传统分离结扎组(50例),两组患者在肝脏原发疾病、肝功能、食管静脉由张程度方面无差异(P＜0.05);比较手术耗时、术中出血量,术后腹腔引流量、脾热、门静脉血栓、住院天数等.结果:两组在术后腹腔引流量、脾热、门静脉血栓、住院天数方面无差异,而手术耗时、术中出血差异显著(P＜0.001).结论:LigaSure在门静脉高压症患者的脾切除、贲门周围血管离断术的应用是安全、有效的,能显著的缩短手术时间和减少出血量,而术后并发症与传统分离结扎手术无差别.     

尼莫地平联合阿托伐他汀钙对血管性痴呆患者SOD活性和血脂水平的影响

目的:研究尼莫地平联合阿托伐他汀钙对血管性痴呆患者超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和血脂水平的影响。方法:选择2017年1月～2019年1月我院收治的95例血管性痴呆患者,随机分为两组。对照组口服尼莫地平治疗,每次30 mg,每天3次;观察组在服用尼莫地平的基础上,加服阿托伐他汀钙治疗,每次20 mg,每天1次。比较两组治疗前后的SOD活性和血脂水平。结果:观察组的总有效率高于对照组(P0.05);治疗后,两组的日常生活能力量表(Activity of daily living scale,ADL)和简易精神状态评价量表(Mini-mental state examination,MMSE)评分均升高(P0.05),且观察组的高于对照组(P0.05);治疗后,两组的SOD活性升高(P0.05),且观察组高于对照组(P0.05);治疗后,两组的高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)均明显升高(P0.05),甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和总胆固醇(Total Cholesterol,TC)均明显降低(P0.05),且上述指标的变化程度观察组优于对照组(P0.05)。结论:尼莫地平联合阿托伐他汀钙能明显提高血管性痴呆患者的SOD活性,改善血脂水平,改善智能认知能力和生活能力。     

IκBL：IκB家族的成员之一？

IκB家族是一组能够与转录因子NF-κB直接结合并调节NF-κB活力的蛋白.IκB蛋白结构上的普遍特点是拥有负责与NF-κB结合的多个锚蛋白(ankyrin)重复序列.IκBL包含ankyrin的重复序列并且能够抑制LPS诱导的NF-κB激活.然而,IκBL与NF-κB能否直接结合仍不确定.本文综述了IκB家族成员结构和功能上的特点,并分析了IκBL是否应被视为IκB家族成员之一.     

乙肝病毒感染与B 细胞型非霍奇金淋巴瘤的相关性研究

目的：探讨乙肝病毒（HepatitisB virus, HBV）感染与B细胞型非霍奇金淋巴瘤（B-cell Non-Hodgkin''s Lymphoma,B-cell NHL） 的相关性。方法：回顾性分析2008 年1 月至2014 年1 月我院232 例NHL患者作为研究组,另选取经病理学、影像学等诊断为其 他类型肿瘤的患者230 例作为对照组。比较两组研究对象HAV、HBV及HCV 的感染情况。结果：研究组患者HBsAg阳性率高于 对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;但两组患者Anti-HAV和Anti-HCV 阳性率无明显差异（P>0.05）。B-cell NHL患者HBsAg 阳性率高于对照组和T-cell NHL患者,差异具有统计学意义（P<0.05）。T-cell NHL患者HBsAg阳性率与对照组无显著差异（P>0. 05）。B-cell NHL 年轻患者HBsAg 阳性率高于T-cell NHL患者,差异具有统计学意义（P<0.05）。B-cell NHL 患者Anti-HBs、 HBeAg、Anti-HBe及Anti-HBc阳性率与对照组存在明显差异（P<0.05）;而T-cellNHL患者与对照组无显著差异（P>0.05）。结论：B-cell NHL感染HBV 的几率较高,HBV 感染与B-cell NHL早期发病有明显的关联性。     

腹腔镜肝部分切除术中肝血流阻断方法的选择及对患者肝功能的影响

目的:探讨三种不同的肝血流阻断方法用于腹腔镜肝部分切除术的安全性及有效性,为肝胆外科手术提供参考。方法:对我院2011年7月至2013年9月收治的83例肝脏肿瘤行肝部分切除术患者的临床资料进行分析。根据肝血流阻断方式,将所选病例分为三组:间歇性断流组(22例),完全断流组(28例),选择性断流组(33例)。观察并比较三组患者的手术时间、断流时间、术中出血量、输血量、术后肝功能指标的变化及并发症的发生率。结果:三组的平均手术时间和断流时间无显著差异(P0.05);选择性肝血流阻断组患者的术中出血量和输血量均显著少于间歇性断流组和完全断流组(P0.05);三种断流方式术后均发生并发症,但选择性阻断术后并发症的发生率明显低于间歇性断流和完全断流术,差异具有统计学意义(P0.05)。三组患者术后的血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸转氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST)的水平均呈现不同程度降低,血清白蛋白(ALB)的含量升高;选择性断流组各指标变化更明显,数值更接近于正常水平(P0.05)。结论:与传统断流方法比,选择性肝血流阻断法能够减少剩余肝脏的再灌注损伤,有利于提高手术效果。但该方法存在一定局限,应根据患者实际情况选择断流方式。