小麦总RNA的快速提取

Rneasy Kits用于从小量小麦中分离总RNA。它为同时和多次制备各种生物样品提供了一种快捷而简便的方法-整个过程可以在30分钟内完成。而且Rneasy方法中不再涉及使用有毒物质,如酚类、氯仿等。通过此方法纯化的RNA可用于各种标准的下游技术,如RT-PCR、polyA^ RNA选择、差异显示技术、Northern点杂交和狭线杂交、引物延伸、cDNA合成、陈列表达分析和表达芯片分析等。使用这个盒子,我们多次成功的进行了小麦总RNA的分离,其中的三次在本文中进行了分析。OD260nm/OD280nm介于1.7-2.0之间,OD260nm/OD230nm大于2.0.说明RNA纯度很高,未被蛋白质、苯酚等物质污染。     

玉米Ubi-1启动子在可育转基因玉米植株中的表达活性

本工作将玉米泛素基因-1启动子(Ubi-1)与大肠杆菌β-葡糖苷酸酶基因(gus,uidA)的编码区融合,通过基因枪粒子轰击方法转化来自玉米未成熟胚盾片组织的I-型愈伤组织,经PPT选择获得可育的玉米转基因植株,并采用组织化学方法分析了Ubi-1启动子驱动的gus基因在不同组织、细胞中的表达活性,发现gus基因在除花药壁以外的其它所试组织中均可以有效表达.UbiGUS在花粉、卵细胞和T1代转基因植株未成熟胚中的表达显示该启动子在植株发育的早期阶段即具有活性.对T0代转基因植株的花粉进行GUS组织化学染色,gus基因呈11分离,显示外源基因在转基因植株中以孟德尔方式遗传.同时发现,使用玉米本身的启动子Ubi-1可以降低外源基因在转基因玉米中的拷贝数,进而避免基因沉默现象的发生.目前已得到第二代转基因种子.     

温度和水分对不同基因型小麦未成熟胚体细胞胚胎发生以及分化能力的影响

对小麦未成熟胚盾片组织离体再生途径中,未成熟胚发育时期以及不同小麦品种的体细胞胚发生能力和体细胞胚的分化能力进行了研究,在所 试的14个小麦品种中,筛选出具有很强的体细胞胚发生能力和体细胞胚分化能力的4个品种,西农1376、盐2号、85＋1－3和宝丰7228。为进一步给小麦离体遗传操作打下基础,研究还对温度的影响进行了分析。通过低温手段解决了胚性愈伤组织随继代天数的延长体细胞胚分化能力快速降低的问题,同时研究还首次分析了干燥处理对小麦体细胞胚转换能力的影响,建立起一套高效的小麦离体培养再生体系,而且该体系从接种未成熟胚到再生植株移至土壤只需10－12周时间,避免了长期培养过程中存在的体细胞变异问题。     

拟南芥AZI1基因对酿酒酵母细胞生长和蒜薹灰霉菌侵染的抑制作用

本工作采用酿酒酵母细胞表达载体pESC和植物细胞表达载体pPZP211分析了拟南芥AZI1基因对真菌的抗性功能。半乳糖诱导产生的AZI1蛋白可以使酵母细胞的生长能力明显降低。DAB和台酚蓝染色结果显示用蒜薹灰霉菌孢子处理Col-0野生型植株叶片后被侵染部位只能产生少量H2O2,病原体可以扩散,而AZI1基因过表达植株叶片在侵染部位有大量H2O2产生,着色较深,表明转化体能够以局部细胞的死亡来阻止病原体侵染周围的细胞。在Col-0野生型植株中,AZI1基因的表达受外源水杨酸诱导,24h后达到峰值。以上结果说明AZI1基因在拟南芥对生物胁迫因素的应答过程中具有重要作用。     

秦艽(Gentiana macrophylla Pall.)离体培养再生过程中体细胞胚的发生(简报)

本文以秦艽叶片和茎段作为外植体,通过离体培养对秦艽植株再生途径进行研究。愈伤组织在添加2mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MS培养基上诱导,两周内可出现愈伤组织。愈伤组织在相同激素配比并附加500mg/L LH的MS培养基上继代。愈伤组织的分化在添加有0.1mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MB培养基上进行。通过显微观测,疑似体细胞胚可以在叶片和茎段的愈伤组织上产生。形态学和组织学的分析进一步证实了秦艽离体再生过程中体细胞胚发生的现象。体细胞胚和合子胚一样,也经历球形、心形、鱼雷和子叶胚等发育时期。相对独立的结构说明秦艽的体细胞胚可能是单细胞来源。体细胞胚在愈伤组织的表面和内部都有出现。在本实验中,体细胞胚发生途径是在秦艽愈伤组织形成后观察到的唯一再生途径。     

红豆草与苜蓿原生质体融合再生属间体细胞杂种植株

通过PEG诱导红豆草抗羟脯氨酸细胞系原生质体与苜蓿根癌农杆菌702转化系原生质体融合,首次选择得到非对称属间体细胞杂种愈伤组织,并分化出17株小植株.PEG可诱导原生质体紧密粘连,使相连膜环化形成泡囊状结构,导致原生质体相互融合.融合诱导溶液中附加 5％～ 10％甘油可以明显提高异源融合频率.采用后滴原生质体法具有较好的结果.杂种再生芽的染色体数目处于30～60条之间,并包含红豆草的小染色体和苜蓿的2条具有2个明显缢痕的染色体.同工酶分析和胭脂碱合成酶活性检测,均证实其杂种特征.     

发根农杆菌A4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后,在附加２ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前,用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ,然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物）,再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液,于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异     

苜蓿根癌农杆菌转化系原生质体培养研究

首蒂是一种重要的豆科牧草。1980年,Kao等首次由首精叶向原生质体通过胚状体途径再生植株获得成功'",此后有关首请原生质体再生植株的报道已经涉及很多不同品种'。本工作对首带胭脂碱型农杆菌转化愈伤组织进行了原生质体培养,建立起一种简便有效的培养方法;并分析了碘乙酸胺对原生质体的作用,为融合实验打下了基础。1材料与方洁以本实验室得到的首精（Medicago。tiva）根瘤农杆菌（Agrohacteriumtumdeciens）702菌株转化系为材料。取2g转代12d的颗粒状黄绿色愈伤组织转人10mL酶液,于黑暗、25C、50r／min条件下游离6h。酶液组成为2…     

Regeneration of intergeneric somatic hybrids by protoplast fusion between Onobrychis viciaefolia and Medicago sativa

Protoplast fusion was induced between sainfoin and alfalfa by an improved polyethyleneglycol (PEG) method. The intergeneric somatic calluses were selected based on complementation of hydroxyproline-resistance of sainfoin and hormone autonomy growth of alfalfa transformation cell line. 17 somatic hybrid plantlets were regenerat-ed. PEG could induce the tight agglutination of protoplasts. During diluting and washing process, cyclization of the linked membrane and formation of vesicle-like structures were observed, resulting in protoplast fusion. 5%-10% glycerol supplemented in the fusion inducing solution markedly increased the frequency of heterogeneous fusion. Better fusion results were obtained when mixed protoplast suspension was dripped in petri dishes in which PEG solution was previously placed. Chromosome number of regenerated hybrid buds varied from 30 to 60. The genome of hybrids in-cluded the small chromosome from sainfoin and two chromosomes with two clear constrictions from alfalfa. The hybrid     

一种优化的植物总DNA提取方法

根据自己提取植物基因组DNA的实际经验,改进了Clark利用CTAB提取植物基因组DNA的方法。在试验过程中发现,通过在研磨材料时加入液氮、用剪去端部的吸头转移含有DNA的溶液,并且将加入RNase A消化RNA的步骤改在最后进行等一系列改进,可以获得高质量的DNA。本文同时就主要提取步骤进行了分析。