2型糖尿病病理生理因素通过SKA1诱导细胞中心体扩增

为研究糖尿病相关的细胞中心体扩增的分子机制,并证明糖尿病的病理生理因素(病生因素)通过纺锤体和动粒相关蛋白1(spindle and kinetochore associated complex protein 1, SKA1)诱导细胞中心体扩增,该研究采用免疫荧光、Western blot检测糖尿病病生因素高葡萄糖、高胰岛素、高自由脂肪酸(棕榈酸)处理下中心体扩增情况、SKA1表达情况及在干扰SKA1后对中心体扩增的影响。结果显示,糖尿病病生因素高葡萄糖、高胰岛素、高自由脂肪酸(棕榈酸)显著诱导HCT116、MCF-7、Hela细胞中心体的扩增,处理组较对照组细胞中心体扩增率显著升高(P0.01);糖尿病病生因素处理组中SKA1蛋白表达量较对照组显著升高(P0.01), SKA1 siRNA组中SKA1蛋白表达量与三因素处理组相比显著降低(P0.01); SKA1的siRNA组中的中心体扩增率较三因素处理组显著降低(P0.01)。该研究证明, 2型糖尿病病生因素在HCT116、MCF-7、Hela中通过SKA1诱导细胞中心体扩增。     

利用多基因缺失型杆状病毒在昆虫细胞中生产腺相关病毒

腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)是基因治疗领域最常使用的病毒载体之一,产量低、成本高是该产业面临的关键瓶颈问题。本研究旨在基于多基因缺失型杆状病毒,建立双病毒感染昆虫细胞以生产AAV的技术体系。首先,进行AAV生产用多基因缺失型重组杆状病毒的构建和扩增,并检测杆状病毒滴度及其感染细胞的效果;然后,使用双杆状病毒共感染昆虫细胞,并优化感染条件;最后,基于优化条件进行AAV生产,并检测评估产量、质量等相关指标。结果表明,AAV生产用多基因缺失型杆状病毒滴度较野生型无差异,感染后细胞存活率下降明显减缓。使用双病毒路线进行AAV优化生产,Bac4.0-1的基因组滴度为1.63×10¹¹ VG/mL,Bac5.0-2的基因组滴度为1.02×10¹¹ VG/mL,较野生型产量分别提升了240%和110%。电镜下,3组均具有正常的AAV病毒形态,且转导活性相近。本研究建立了基于多基因缺失型杆状病毒感染昆虫细胞的AAV生产体系,显著提高了AAV产量,具有一定的应用价值。     

低自旋氰配位紫色震颤菌血红蛋白血红素及其周围质子的核磁共振研究

报道了低自旋氰配位紫色震颤菌血红蛋白 (VtHb CN)血红素及其周围质子的核磁共振谱 .通过MCOSY ,NOESY ,1DNOE和TOE ,以及SUPERWEFT实验对VtHb -CN的¹H核磁共振谱进行识别 .已识别了血红素和配位组氨酸的几乎所有共振峰 ,获得了这些共振峰的自旋 晶格弛豫时间和它们的化学位移随温度的变化关系 ,由此可分别获得这些质子到血红素Fe³⁺ 的距离和抗磁化学位移 .通过化学位移的pH滴定 ,得到了配位组氨酸 (His 85 )的咪唑环的电离平衡常数pK_a( =4.95 ) .这一较低的pK_a 值 ,归因于带正电的Fe³⁺ 以及His 85与血红素Fe³⁺   的配位 .     

重组苏云金杆菌ICP基因工程菌研究进展

综述了苏云金杆菌ICP基因及重组ICP工程菌的研究进展,描述了工程菌构建的主要方法,以及目前构建获得的各类ICP工程菌的特点,讨论了ICP工程菌的应用前景和发展方向。     

小菜蛾对菊酯类农药抗性水平及高效农药应用研究

室内试验彩和叶片浸渍法,对江苏五个地区的小菜蛾进行毒力及抗性测定比较。结果表明江苏南京、扬州等菜区小菜蛾对三种拟除虫菊酯已产生高抗水平的抗性,抗性倍数74．03－324．13。小菜蛾对溴氟菊酯、氰戊菊酯、DDVP、快灵表现不同程度的交互抗性;对杀虫双、氟铃脲、宝路不产生交互抗性;对锐劲特、灭虫灵为负交互抗性。筛选出高效、低毒、无公害的单剂6个,复配剂3个。灭虫灵、锐劲特、氟铃脲、抑太保、宝路、杀虫双对小菜蛾具有很高的活性,LC50为0．018－71．83ppm。田间试验结果,灭虫灵8ppm防效95％以上,持效期10天;氟铃脲50ppm,前期药效表现慢,7－10天达90％以上。三个复配剂中以灭虫灵与高效氯氰菊酯复配药效与速效表现突出,10ppm12－15天药效95％以上,其它两个复配剂见效较慢,5－10天的防效90％以上。     

粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌的增效特性及对Bt毒蛋白的降解活化作用

以小菜蛾Plutella xylostella为试虫,采用生物测定方法测定了粘虫颗粒体病毒（Pseudaletia unipuncta granulosis virus,PuGV-Ps）对苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）的增效作用。结果表明：不同配伍PuGV-Ps和Bt间的共毒系数在105.3至195.0之间, PuGV-Ps对Bt毒力具有增强作用,其中以Bt∶PuGV-Ps为4∶1增效作用最明显,72 h LC₅₀为0.039 mg/mL。不同温度和pH值都影响PuGV-Ps对Bt的增效作用,16℃～20℃增效程度明显高于24℃～32℃,而碱性条件下（pH 8～9）增效作用更显著。PuGV-Ps对Bt的增效作用因小菜蛾龄期不同而变化,2、3龄幼虫死亡率较单独使用Bt分别提高了50%和30.31%,而作用于低龄（1龄）和高龄（4龄）幼虫时对Bt的增效作用不显著。PuGV-Ps饲喂2 h后再接毒Bt,小菜蛾死亡率明显提高,48 h死亡率达66.67％,较直接饲喂Bt+PuGV-Ps处理死亡率提高了53.87％,差异极显著。SDS-PAGE表明PuGV-Ps具有碱性蛋白酶的活性,离体条件下能促进δ-内毒素酶解为47 kD,60 kD和61 kD的毒性肽。     

低温冻存对兔脂肪间充质干细胞部分生物学特性的影响

目的：研究低温冻存对兔脂肪间充质干细胞部分生物学特性的影响。方法采用组织块法分离培养兔脂肪间充质干细胞。用倒置显微镜观察原代细胞的细胞形态,流式细胞仪检测兔脂肪间充质干细胞的免疫表型。取第3代兔脂肪间充质干细胞置于-196℃液氮保存半年,37℃复苏并传至第7代。实验分为两组,实验组为冻存复苏后传至第7代的兔脂肪间充质干细胞,对照组为未冻存的第7代兔脂肪间充质干细胞,用MTT绘制其生长曲线;添加成脂、成骨诱导液进行诱导,油红O、茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测分别进行鉴定。结果体外培养的兔脂肪间充质干细胞呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛。流式细胞仪检测显示,第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD44、CD90,阴性表达造血细胞相关的表面标志CD45。两组细胞生长曲线呈典型的“S”形,无统计学差异（P＞0.05）;成脂诱导14 d后,油红O染色呈阳性;成骨诱导2周时茜素红染色阳性,ALP表达活性随成骨诱导时间延长不断增加且无统计学差异（ P＞0.05）。结论冻存后的兔脂肪间充质干细胞体外生长及多向分化潜能未发生显著变化。     

粘附分子CDl46是影响滋养层细胞侵入行为的关键分子

前期研究观察到一种现象,在正常妊娠的胎盘中细胞粘附分子CDl46选择性地表达在侵入性滋养层细胞中,而在滋养层细胞侵入不足的先兆子痫病人的胎盘中CDl46表达降低或缺失．本文进一步研究了CDl46分子影响滋养层细胞侵入行为的作用机理．免疫荧光实验显示CDl46分子选择性地表达在具有侵袭能力的中间滋养层细胞,而在非侵入性的细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞中不表达．细胞功能实验表明,影响滋养层细胞侵入性的两个关键要素,即细胞迁移和基质金属蛋白酶的分泌,都受到CDl46特异抗体的显著抑制．这些研究结果提示,粘附分子CDl46是影响细胞侵入行为的关键分子．这为深入研究胚胎植入和肿瘤浸润的分子调控机理提供了一个关键的分子模型．     

粘附分子CD146是影响滋养层细胞侵入行为的关键分子

前期研究观察到一种现象, 在正常妊娠的胎盘中细胞粘附分子CD146选择性地表达在侵入性滋养层细胞中, 而在滋养层细胞侵入不足的先兆子痫病人的胎盘中CD146表达降低或缺失.本文进一步研究了CD146分子影响滋养层细胞侵入行为的作用机理.免疫荧光实验显示CD146分子选择性地表达在具有侵袭能力的中间滋养层细胞,而在非侵入性的细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞中不表达.细胞功能实验表明,影响滋养层细胞侵入性的两个关键要素,即细胞迁移和基质金属蛋白酶的分泌,都受到CD146特异抗体的显著抑制.这些研究结果提示,粘附分子CD146是影响细胞侵入行为的关键分子.这为深入研究胚胎植入和肿瘤浸润的分子调控机理提供了一个关键的分子模型.     

派丽奥治疗牙周炎的细菌学研究

目的 评价牙科用派丽奥软膏对中度和中重度牙周炎患者的疗效,并与牙周临床常用药物“牙康”（甲硝唑）进行比较。方法 口腔临床38例中度和中重度成人牙周炎患者被纳入,并随机分为派丽奥试验组和牙康对照组,将派丽奥软膏缓缓注入牙周袋内,给药量约0．05ml。每周给1次药,共给药2次。采用厌氧培养方法测定用药前后牙周袋内病原菌的变化。结果 派丽奥软膏对牙周袋内病原菌有很好的抗菌作用,其有效率为90％;对梭杆菌、消化链球菌、优杆菌、产黑色素的革兰阴性厌氧杆菌如牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌等牙周主要病原菌有明显的抗菌作用（P〈0．05）。结论 派丽奥软膏与牙康比较抗菌作用差异无显著性（P〉0．05）．