南京儿童医院PICU病原菌流行分布与耐药性分析

目的了解南京地区儿童重症监护病房（PICU）临床分离病原菌的流行分布与其对抗生素的耐药趋势,指导临床诊断及用药。方法回顾性分析2011年1月至2013年12月南京医科大学附属南京儿童医院PICU住院患儿所分离出病原菌的分布和药物敏感性试验结果。结果 1 476例各类送检标本中共分离出386株病原菌（26.2%）,其中革兰阴性杆菌265株（68.7%）,主要为肺炎克雷白杆菌,大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌;革兰阳性球菌93株（24.1%）,主要为凝固酶阴性葡萄球菌,金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌;真菌28株（7.2%）。3年中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别占62.7%和54.9%。革兰阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡星和头孢哌酮/舒巴坦较敏感;革兰阳性球菌对万古霉素和利奈唑胺较敏感。结论 PICU分离出的主要病原菌对常规抗菌药物的耐药现象严重,应结合患儿临床表现、感染部位和病原菌的流行病学特点合理选用抗菌药物。     

分子伴侣的功能和应用

本文综述了分子伴侣的分类、功能、作用机理、研究现状及应用前景。分子伴侣是在生物大分子的折叠、组装、转运及降解等过程中起协助作用,参与协助抗原的呈递和遗传物质的复制、转录及构象的确立,但自身并不发生任何变化的一大类广泛存在于生物体内的蛋白质分子。随着对分子伴侣的进一步研究和相关知识的不断深入,分子伴侣在生物产品开发、物种改良、抗衰老,疾病预防、诊断和治疗以及环境监测方面具有广阔的前景。     

羊朊毒体单抗结合表位分析

通过分段表达PrP核心片段和人工合成多肽,分析5株羊朊毒体单抗结合表位。分段表达PrP核心片段,通过PCR方法扩增目的片段,经酶切、连接后,将目的片段插入质粒pET32a,在大肠杆菌BL21中表达。将表达的系列融合蛋白与单抗进行免疫转印试验,根据反应情况确定单抗结合的大致部位,在此基础上设计合成多条针对性多肽,用ELISA方法进一步确定3株单抗的结合部位;通过与6段融合蛋白反应证明5株单抗的结合部位分别为:2H3在199aa～213aa之间,4C6、5F11和7F11在139aa～168aa之间,7F1在214aa～227aa之间,与3段人工合成多肽进行ELISA反应进一步得到4C6、5F11和7F11抗原结合表位在149aa～158aa之间;本研究确定了5株单抗在PrP分子上的结合部位,为羊痒病和牛海绵状脑病的检测、发病机制的研究奠定了基础。     

蝰科(Viperidae)蝮亚科(Crotalinae)线粒体12S rRBA基因序列分析及其系统发育

对蝮亚科（蛇岛蝮Ｇｌｏｙｄｉｕｓ ｓｈｅｄａｏｅｎｓｉｓ Ｚｈａｏ、黑眉蝮Ｇｌｏｙｄｉｕｓ ｓａｘａｔｉｌｉｓ Ｅｍｅｌｉａｎｏｖ、乌苏 里蝮Ｇｌｏｙｄｉｕｓ ｕｓｓｕｒｒｉｅｎｓｉｓ　 Ｅｍｅｌｉａｎｏｖ、　竹叶青Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓ 　ｓｔｅｊｎｅｇｅｒｉ 　Ｓｃｈｍｉｄｔ和分别来自不 同地区的尖吻蝮Ｄｅｉｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ　ａｃｕｔｕｓ　Ｇｕｅｎｔｈｅｒ、短尾蝮Ｇｌｏｙｄｉｕｓ　ｂｒｅｖｉｃａｕｄｕｓ　Ｓｔｅｊｎｅｇｅｒ各 两条）６种蛇共８个个体测定、分析了约３７０ｂｐ线粒体１２Ｓ ｒＲＮＡ基因序列;以游蛇科链蛇属半 棱鳞链蛇Ｄｉｎｏｄｏｎ ｓｅｍｉｃａｒｉｎａｔｕｓ　序列为外群构建分子系统树。分子数据结果支持尖吻蝮形态 学的属级分类地位;提示蛇岛蝮位于黑眉蝮的蛇岛亚种分类地位,同时探讨了蛇岛蝮的起源 问题;并提示短尾蝮和乌苏里蝮同位于种级分类地位。     

植株内种子蛋白多样性与繁育系统

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了３种锦鸡儿属植物种子的同工酶。分布在典型草原上的小叶锦鸡儿（Ｃａｒａ－ｇａｎａ ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌａ Ｌａｍ．）、典型荒漠的柠条锦鸡儿（Ｃ．ｋｏｒｓｈｉｎｓｋｉｉ Ｋｏｍ．）或荒漠草原的中间锦鸡儿（Ｃ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ Ｋｕａｎｇ ｅｔＨ．Ｃ．Ｆｕ）,同一植株不同单粒种子酶谱表现显著的变异,类似于经典遗传分析中互显性等位基因分离现象,７７株植株无一例外,因此可以进行     

嗜水气单胞菌外膜蛋白W 基因的表达及其免疫原性分析

从患暴发性败血病的草鱼病灶处分离鉴定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)Wp3菌株。以其基因组DNA为模板扩增外膜蛋白W基因(OmpW),该基因全长为865 bp,开放式阅读框(ORF)为615 bp,与标准株ATCC7966的OmpW基因的同源性为99.8%。根据ORF序列设计引物扩增OmpW成熟肽编码序列并将其插入到表达载体pQE30中,转化大肠杆菌,经诱导可表达分子量为24.7 kD的带His标签的融合外膜蛋白His-W。用此融合蛋白免疫草鱼,所得草鱼血清经ELISA分析显示呈现阳性反应,说明重组蛋白能诱导产生抗体。采用实时荧光定量PCR分析草鱼头肾组织IgM基因表达水平的变化,结果显示免疫组IgM的表达量均明显高于空白组,其中低浓度免疫组(2μg/g)与空白对照组的差异显著(P<0.05),说明融合蛋白可使草鱼产生良好的免疫应答并上调抗体基因表达、产生高效抗体。保护性实验显示,不同免疫剂量均可使免疫组获得较高保护率(57%?86%)。结果显示,重组嗜水气单胞菌外膜蛋白W可作为草鱼嗜水气单胞菌基因工程亚单位疫苗。     

煤矸石对矿区土壤特性与植物生长的影响

本文通过室内和室外试验，将不同含量(10%、20%、30%、40%和50%)、不同粒径(0～2、2～5、5～8和8～10 mm)的煤矸石与土壤进行复配，形成具有不同容重(1.3、1.35、1.4、1.45和1.5 g·cm^-3)的新构土壤，探究土壤重构方式对新构土壤水分、团聚体结构稳定性以及黑麦草、紫苜蓿和白车轴草生长特征的影响。结果表明：土壤饱和含水量(SW)、毛管含水量(CW)和田间持水量(FC)随煤矸石含量、粒径和土壤容重增加而减小。>0.25 mm粒径土壤团聚体(R_0.25)、平均重量直径(MWD)和几何平均直径(GMD)随煤矸石粒径增加大体呈先增加后减少的变化趋势，在煤矸石粒径为2～5 mm达到峰值；R_0.25、MWD和GMD与煤矸石含量呈显著负相关。基于增强回归树(BRT)模型，煤矸石含量对SW、CW和FC的影响较大，对其变异贡献率分别为59.3%、67.0%和40.3%;煤矸石粒径对R_0.25、MWD和GMD的影响最大，对其变异贡献率分别为44.7%、32.3%和62.1%;煤矸...     

Ⅰ型胶原,内皮素对肾小球内皮细胞及系膜细胞产生细胞外基…

本文观察了Ⅰ型胶原，内波素对肾小球内皮细胞、系膜细胞增殖的影响，同时探讨了Ⅰ型胶原和内皮素对培养的内皮细胞及系膜细胞产生层粘连蛋白、纤连蛋白和Ⅳ型胶原的影响。结果提示：Ⅰ型胶原可以明显促进内皮细胞的增殖，内皮素对系膜细胞的增殖有一定作用；Ⅰ型胶原可以促进内皮细胞产生层粘连蛋白和纤连蛋白，并可以促进系膜细胞产生Ⅳ型胶原；内皮素可以促进系膜细胞产生ＦＮ增多。     

耻垢分枝杆菌ClpC和ClpX敲低表达菌株的构建及表型分析*

蛋白质平衡稳定对细菌的生长繁殖以及应对宿主免疫压力十分重要。Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌的蛋白质降解和平衡稳定中发挥重要作用。Clp蛋白酶中负责识别底物蛋白并将其解折叠的蛋白质有两种:ClpC和ClpX。为初步探究分枝杆菌中ClpC和ClpX各自的功能特点,运用CRISPRi的方法成功构建了耻垢分枝杆菌的ClpC和ClpX诱导型敲低表达菌株,并对其生长相关表型进行分析。结果显示:与野生菌株相比,ClpC和ClpX的低表达均能严重影响耻垢分枝杆菌的生长。ClpC低表达可导致菌株丧失生物膜的形成能力,而ClpX低表达则导致菌株无法维持正常细胞形态,电镜显示细胞壁不完整且细胞呈丝状化,提示ClpC和ClpX可能在分枝杆菌中具有不同的生理功能。可为后期深入开展ClpC和ClpX对分枝杆菌生理调控功能研究及新型抗结核药物筛选提供基础。