透明颤菌血红蛋白基因在金色链霉菌中的克隆与表达

分别用质粒pJJ699与pUC19(vhb),pIJ702与pBR322(vhb),构建大肠杆菌链霉菌穿梭质粒,将透明颤菌血红蛋白基因转入金色链霉菌。在低溶解氧浓度下,透明颤菌血红蛋白的表达,可提高金色链霉菌氧的利用效率,产物合成比原始菌株提高40%～60%。在局部低氧的环境中,采用四环素抗性基因启动子带动血红蛋白基因表达,可有效发挥透明颤菌血红蛋白的氧传递效率,优于透明颤菌血红蛋白基因受溶解氧调控的天然启动子。     

氨基糖甙类抗生素JI-20A发酵培养条件的研究

研究了氨基糖甙类抗生素JI-20A分批发酵培养基和发酵工艺的优化。结果表明发酵培养基的优化组成为玉米淀粉60g/L,花生饼粉30g/L,麦芽糖10g/L,玉米浆8g/L,复合无机盐适量,淀粉酶适量,蛋氨酸1g/L和氯化钴6μg/mL。控制消后培养基pH值和氧的供应条件有助于抗生素JI-20A产生菌的菌体生长和产物合成。     

肺炎球菌表面蛋白A(PspA)的克隆表达及交叉免疫作用

本工作从中国临床最常见的5种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01, FY05, FY6B, FY19F, FY23F)克隆获得编码PspA蛋白N端α-螺旋区的基因片段。分别将5种PspA基因片段克隆到表达载体pET-27b(+)上, 成功构建重组质粒pET-pspA, 转化大肠杆菌BL21(DE3)。经乳糖诱导表达和亲和层析分离, 获得高纯度重组蛋白。通过家族专属引物PCR的方法鉴定这5种荚膜血清型肺炎球菌的PspA蛋白所属家族, 并进一步根据基因测序结果通过生物信息学方法鉴定了所属支系。FY01 rPspA、FY6B rPspA、FY19F rPspA同属于家族Ⅰ支系1, FY05 rPspA属于家族Ⅰ支系2, FY23F rPspA属于家族Ⅱ支系3。以FY01 rPspA免疫小鼠, 在20 μg/mL免疫剂量时抗体滴度达到1: 210000, 显示了重组蛋白较好的免疫原性。Western blotting交叉免疫反应性研究表明, 抗FY01 rPspA抗血清与FY01 rPspA、FY6B rPspA和FY19F rPspA反应性较好, 而与另外两种重组蛋白几乎无反应, 提示PspA交叉免疫作用仅限于本支系内。动物保护实验表明, FY01 rPspA免疫的小鼠对FY6B、FY01 两种菌的攻击具有较好的保护作用, 对FY05、FY23F的攻击未见明显的保护作用。本研究成果对于研制高效肺炎球菌疫苗具有重要的指导意义。     

栀子黄色素的醇提制备及其稳定性研究

通过单因素实验,考察栀子黄色素乙醇提取工艺。乙醇提取最优工艺条件为：乙醇浓度30％、液固比8：1、提取温度60℃、提取次数2次、每次1h。在此条件下,栀子黄色素、栀子苷和总三萜酸的提取率分别为1．32、110．76和94．91mg／g。     

醋酸杆菌AS1.41的醋酸发酵动力学特性

用分批培养的方法研究了醋酸发酵过程的动力学特性。醋酸杆菌AS 1.41的醋酸发酵过程属“非生长偶联型”,发酵初期菌体迅速增殖,发酵中期为醋酸生成的高峰期。高浓度的底物和产物对菌体生长及其产酸活性有抑制作用。在乙醇浓度2—4g/100ml和醋酸浓度小于3g/100ml范围内,发酵反应效率最佳,最大菌体比生长速率可达0.127h^-1,最大醋酸比生成速率为0.12g醋酸/h·OD。在工业常用的初始底物浓度范围内,底物抑制效应主要表现在对菌体生长的影响上。高浓度醋酸的存在显著抑制该菌的产酸能     

假单胞杆菌DM1在二氯甲烷降解过程中的微生物动力学

采用半连续培养技术研究了假单胞杆菌(Pseudomonas)DM1在二氯甲烷降解过程中的微生物动力学。高浓度底物二氯甲烷和高浓度产物氯化物对DM1的生长和底物的消耗具有严重的抑制效应。反应的最佳浓度条件是：CH₂Cl₂ 1．2mmol／L,氯化物<100mmo1／L。当二氯甲烷或氯化物浓度高于其极限浓度时,细菌失活并自溶,p≤O。对于具有严重底物抑制的发酵过程,特别是以有毒化台物为唯一碳源的生物降解过程,本文提出一个新的动力学模型。由两项组成,第一项反映了传统的Monod类型的可逆络合机理,第二项表示有毒物质对生物体代谢作用的不可逆抑制效应。该模型比其他传统模型能更好地描述二氯甲烷的生物降解过程。     

双交联法制备桔霉素-蛋白质偶联抗原及抗体

以1,4-丁二醇二缩水甘油醚(双环氧试剂)为偶联剂,合成桔霉素-蛋白质偶联抗原CIT-BSA,经过HPLC分析、紫外扫描和红外光谱鉴定表明,偶联物成功制备,CIT/BSA的偶联比为8.16.通过免疫BALB/C小鼠,获得抗桔霉素多克隆抗体,经间接ELISA检测,效价达到1.1×105.间接竞争ELISA表明,桔霉素(CIT)的最低检测浓度为10μg/L,其线性范围为10～250μg/L,IC50为100μg/L.分析了不同方法制备的偶联抗原的免疫原性,实验表明,桔霉素抗原决定簇C7位置的羧基保留是获得针对桔霉素特异性抗体的必要条件.为快速检测桔霉素的酶联免疫检测技术的建立和检测试剂盒的研制提供技术依据.     

耐热醋酸棱状芽孢杆菌中具有高的二硫键还原活性组分的提取和…

用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ层析柱从Ｃ．ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃｕｍ细胞提取物中分离出的两个具有相近分子量（７００）的活性组分，在ＭＶ＾＋存在下，对二硫键具有高的催化还原活性。这两组分参与的催化还原反应不以ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ为电子供体。在实验条件下，对二硫键的催化还原活性顺序为：ＧＳＳＧ〉硫辛酰胺〉胱氨酸〉胱氨酸〉硫辛酸。活性组分具有较高的反应稳定性和热稳定性。两组分在２６０、３５４和５     

药物诱导的孕烷X受体对基因表达的调控

孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)是一种重要的孤儿核受体,可以调节很多基因的转录表达,例如:CYP3A4、CYP2B6、UGT1A1、ABCB1和MRP2等。它通过与配体结合的方式活化,进行相关基因转录的调控。PXR的配体包括大量的外源和内源化合物。     

促甲基化因子对西索米星发酵的影响

研究发现,发酵培养基中添加2．0—3．0g,／L蛋氨酸或7．5—10．0mg,／L氯化钴可明显促进西索米星的合成。蛋氨酸的添加时机和添加方式对西索米星产物合成的作用明显不同。在产物合成中前期（30-48h）添加蛋氨酸的效果最佳。当发酵液中蛋氨酸初始浓度为0．656g／L时,与在产物合成初期一次性添加相比,1．5g／L蛋氨酸在产物合成初期、中期和后期均分成3次添加的效果更优,当发酵至91h结束时,发酵液中西索米星浓度可达0．70g／L。