荧光高效液相色谱法测定三种失眠模型大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量

目的测定睡眠剥夺大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量。方法复制药物诱导失眠动物模型、平台水环境诱导失眠动物模型、刺激诱导失眠动物模型,以Agilent 1100荧光检测器高效液相系统为检测工具,Agilent ZORBAX SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,柱温25℃,激发波长λex=357 nm,发射波长λem=455 nm,甲醇-50 mmoL/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)为流动相,采取梯度洗脱,测定正常组及模型组大鼠脑组织中谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(γ-GABA)、牛磺酸(Tau)的含量。结果谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸分别在10.06～0.0503、10.13～0.0506、10.05～0.0502、10.03～0.0501μg/mL范围内,其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r分别为0.99995、0.99995、0.99985、0.99990)。测得药物诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.2042±0.0145)、(0.0086±0.0005)、(0.0919±0.0024)、(0.0421±0.0011)μg;平台水环境诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.2144±0.0159)、(0.0085±0.0004)、(0.0966±0.0035)、(0.0433±0.0012)μg;刺激诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.1818±0.0043)、(0.0084±0.0005)、(0.0824±0.0033)、(0.0414±0.0018)μg;正常大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为(0.1744±0.0038)、(0.0085±0.0004)、(0.0791±0.0022)、(0.0406±0.0012)μg。结论本实验建立的方法能满足同时测定大鼠脑组织中谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸的含量测定的需要,Glu、Tau、γ-GABA与失眠可能存在一定的量效关系,三种失眠动物模型均能较好的反映出脑内氨基酸类神经递质的变化。     

精氨酸、精氨酸盐酸、半胱氨酸、胱氨酸对重组人tPA蛋白复性的影响

以重组人tPA蛋白为材料研究了精氨酸、精氨酸盐酸盐、半胱氨酸、胱氨酸对蛋白质复性效果的影响,重组tPA蛋白包涵体经尿素变性溶解后,在精氨酸、精氨酸盐酸盐、半胱氨酸、胱氨酸存在的条件下进行复性,结果表明,碱性的精氨酸在质量分数0.2%时可减少蛋白质凝聚,显著提高复性效果,tPA复性后的活性可提高50%以上,半胱氨酸单独使用具有类似β-巯基乙醇的作用,精氨酸盐酸盐和胱氨酸单独使用对复性无影响,而半胱氨酸和胱氨酸联合使用,有类似氧化-还原系统作用。可提高活性20%。     

血清腺苷脱氨酶检测在几种自身免疫性疾病中的临床意义研究

目的:探讨血清腺苷脱氨酶(ADA)检测在几种自身免疫性疾病诊断中的应用价值。方法:收集确诊的系统性红斑狼疮(127例)、类风湿性关节炎(103例)和重症肌无力患者(34例)的血清标本,以同时期体检的正常成人(149例)为对照,采用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和黄嘌呤氧化酶(XOD)法检测血清中ADA活性。结果:系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、重症肌无力患者和正常体检者血清中的ADA活性均值分别为(12.91±5.82)U/L、(10.91±3.70)U/L、(9.21±3.57)U/L、(8.73±2.79)U/L。系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎患者血清中ADA活性均显著高于正常体检者(P0.05),而重症肌无力患者血清中ADA活性和正常体检者相比差别无统计学意义(P0.05)。ROC结果显示将血清ADA活性10U/L同时作为RA和SLE诊断的阳性值,ADA活性诊断SLE的AUC为0.748,敏感性为59.8%,特异性为83.2%。ADA活性诊断RA的敏感性为42.7%,特异性为83.2%。血清ADA活性为10 U/L作为诊断的参考值上限,其诊断SLE的效果优于ESR和hs-CRP,其诊断RA的效果低于ESR和hs-CRP。结论:系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎患者血清ADA活性均有升高,在系统性红斑狼疮患者中升高更为明显,可作为系统性红斑狼疮潜在的辅助诊断标志物。     

微生物酶分子改造研究进展

近年来,越来越多的酶蛋白已经采用重组微生物反应器进行高效生产。为了改善酶蛋白的催化性能,提高其环境适应性,同时提高酶蛋白的表达量,降低生产成本,各种针对酶蛋白分子改造的基因工程技术已经得到大量的应用。综述了用于酶分子改造和进化的主要分子生物学方法,如定点突变、易错PCR、基因改组、密码子优化等技术及其应用成就。     

陇东红富士果树养分回流对土壤表层管理的响应

地处陇东黄土高原的庆阳市苹果园普遍缺乏有效的土壤表层管理措施,以盛果期的"红富士"果树为对象,研究不同土壤表层管理方式在养分回流期对苹果树体贮藏养分的动态变化。研究结果表明:优化覆膜(T2)与优化覆草(T3)一年生枝条叶片的叶绿素含量均显著高于常规处理(T1)。T2和T3处理的一年生春梢、秋稍和封顶枝中的碳素贮藏物质(可溶性糖、淀粉)和氮素贮藏物质(总游离氨基酸、可溶性蛋白质)的含量均显著高于T1,T3比T2处理对碳素贮藏物质含量的提升效果更为明显。此外,相同枝条类型不同组织中的贮存养分含量不同,可溶性糖和可溶性蛋白质的含量表现为表皮积聚,韧皮部木质部,淀粉与总游离氨基酸含量表现为主轴积聚,木质部韧皮部。不同枝条类型中贮藏物质的含量整体表现为秋梢封顶枝春梢,秋梢在提升养分贮藏水平中起到了重要作用。     

丙型肝炎病毒E2基因DNA 免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白417～750位氨基酸的DNA片段克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(-)中的CMVIE启动子下游,构建成HCV E2重组真核表达质粒pcE2.ELISA法检测pcE2 DNA免疫兔血清中的E2抗体变化和维持规律,结果显示免疫20d已有抗体产生,30d后开始进入高峰,40d时达到最高值,至第90d抗体水平保持平稳,抗体滴度达到11600左右.流式细胞计数仪(FACS)检测pcE2 DNA免疫鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCDNA3.1(-)的阴性鼠相比,CD4+淋巴细胞水平略有上升,CD8+细胞水平有较大升高,增幅达35.46%.免疫组化检测结果显示注射pcE2的小鼠组织中有明显的阳性着色,而注射pcDNA3.1(-)的对照组小鼠免疫组化结果为阴性.以上结果表明pcE2在实验动物内表达出的HCV E2蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其是MHC-1限制性杀伤性CD8+T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的,因此HCV E2 DNA免疫有可能成为预防和治疗HCV感染的一条新途径.     

腺苷脱氨酶活性对自身免疫性肝病的临床意义研究

摘要 目的：探讨腺苷脱氨酶（ADA）在自身免疫性肝病患者血清中的变化及其临床意义。方法：利用酶法试剂盒检测自身免疫性肝病患者血清中的总ADA（tADA）及其同工酶ADA1和ADA2的活性变化,利用受试者工作曲线（ROC）分析总ADA、ADA1及ADA2活性的诊断价值。利用Spearman相关性分析自身免疫性肝病患者各指标之间的相关性。结果：与对照组相比,tADA和ADA2活性在自身免疫性肝病患者血清中均极显著升高（P<0.001）,ADA1活性有一定程度升高（P=0.035）。不同自身免疫性肝病亚型患者之间的血清tADA、ADA1及ADA2活性均无显著差异。ROC分析显示,血清tADA和ADA2活性具有诊断价值,ADA1活性无诊断价值。tADA活性截断值取13.5 U/L时,诊断特异性为93.3%,敏感性为81.2%。血清ADA2活性截断值取9.5 U/L时,诊断特异性为85.0%,敏感性为83.3%。而ADA1无显著的诊断价值,ADA活性与白蛋白球蛋白比值呈显著负相关（r=-0.41,P=0.004）,与球蛋白水平具有一定程度的正相关（r=0.34,P=0.018）,与ALT呈弱正相关（r=0.29,P=0.042）,与其他指标的相关性均无统计学显著性。结论：血清tADA及ADA2活性在自身免疫性肝病患者血清中显著升高,并且具有一定的诊断价值。     

黄土高原小流域不同地形下土壤有机碳分布特征

研究了黄土高原小流域尺度塬面、坡地、沟道和梯田4种地形条件下土壤有机碳总量和活性组分的分布、储量及碳库管理指数的差异.结果表明,小流域土壤有机碳和不同活性有机碳的变异系数介于32％-70％之间,表现出中到高度的变异特征.4种地形下各组分有机碳含量和储量以塬面土壤最高,沟道土壤最低,并随土层深度的增加而降低,降低程度随有机碳活性增强而增加.以塬面土壤为对照所获得的碳库管理指数可灵敏指示有机碳对地形条件的响应特征,中活性有机碳库管理指数的指示效果最好.研究结果可部分解释黄土高原土壤有机碳地带性分布特征.     

“知己健康管理”在慢性疾病患者的应用

目的：探讨“知己健康管理”模式对社区慢性疾病患者中改变不良生活方式后所产生的效果。方法：对社区57例慢性疾病患者进行3个月的强化知己健康管理,采用自身对照方法对其管理前后的生活方式、行为改变、血压及血脂等变化进行比较。结果：管理后患者血压、体重指数、腰围、血糖、血脂等均得到改善（P〈0．05）。结论：“知己健康管理”可以强化社区居民对疾病的认识,改变不良的生活方式,有利于疾病的控制及危险因素水平的降低。