噬菌体展示HIV-1 Tat38-61碱性区51和55位随机突变体文库的构建

为了构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N) 碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选,采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N) 碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106,滴度为2.65×1012 TU/mL,阳性克隆率为56.50％;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布,达到了对文库进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。     

不同碳氮源对糙皮侧耳木质纤维素酶活性的影响

以糙皮侧耳Pleurotus ostreatus为材料,研究简单碳氮源及木质素纯品诱导条件对其木质纤维素酶活性的影响。结果表明,不同的碳源培养基和氮源培养基对糙皮侧耳漆酶活性、羧甲基纤维素酶活性和木聚糖酶活性均具有极显著的影响（P<0.001）,且对糙皮侧耳菌丝生物量也有极显著的影响（P<0.001）。以蔗糖作主要碳源诱导物时,有利于提高糙皮侧耳漆酶活性;以果糖作主要碳源诱导物时,有利于提高糙皮侧耳羧甲基纤维素酶活性和菌丝生物量的积累;以葡萄糖作主要碳源诱导物时,有利于提高糙皮侧耳木聚糖酶活性。以酵母浸粉作主要氮源诱导物时,有利于提高糙皮侧耳漆酶活性和菌丝生物量的积累;以硝酸钾作为主要氮源诱导物时,有利于提高糙皮侧耳羧甲基纤维素酶活性;以硫酸铵作为主要氮源诱导物时,有利于提高糙皮侧耳木聚糖酶活性。碱性木素的存在,有利于提高糙皮侧耳漆酶活性,但不利于菌丝生物量的积累。与此同时,碱性木素的存在对糙皮侧耳羧甲基纤维素酶和木聚糖酶活性并没有促进作用。     

脑血康胶囊联合巴曲酶对急性脑梗死患者血清 MBP、NSE水平的影响

摘要 目的：研究脑血康胶囊联合巴曲酶对急性脑梗死患者血清髓鞘碱性蛋白(myebin bosic protein,MBP)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)水平的影响。方法：选择2018年3月～2019年3月我院收治的161例急性脑梗死患者,将其随机分为两组。对照组静脉滴注巴曲酶,首次给予10 BU,隔日给予5 BU,每两天给药1次;观察组在巴曲酶的基础上联合口服脑血康胶囊,每天3 次,每次3粒。观察和比较两组治疗总有效率、治疗前后血清MBP、NSE、全血黏度(whole blood viscosity,WBV)、红细胞压积(hematocrit,HCT)、血浆黏度(plasma viscosity,PV)和纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)水平及NHISS和BI评分的变化。结果：治疗后,观察组的有效率为91.25 %,明显高于对照组(64.2%,P<0.05);两组血清MBP、NSE、WBV、HCT、PV和FIB水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组的以上指标明显低于对照组(P<0.05);两组的BI评分明显升高(P<0.05),NHISS评分明显降低(P<0.05),观察组BI评分明显高于对照组,而NHISS评分明显低于对照组(P<0.05)。结论：脑血康胶囊联合巴曲酶对急性脑梗死有显著的疗效,能明显降低患者血清MBP、NSE水平,促进神经功能的恢复。     

非生物胁迫因子对棘孢木霉嗜铁素及钙调磷酸酶基因表达的影响

木霉菌(Trichoderma spp.)嗜铁素具有吸收、贮存和胞内运输铁的功能,对菌体自身的生长发育有重要作用,也是重要的生防促生因子,但嗜铁素的产量会受到环境中多种胁迫因子的影响。真菌的钙调磷酸酶基因能够调控外源离子的胁迫反应,但钙调磷酸酶信号通路与嗜铁素合成之间的关系并不明确。以棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)T6为材料,研究了NaCl、CaCl_2及pH对棘孢木霉菌T6嗜铁素产量以及嗜铁素合成关键基因(SidA)与钙调磷酸酶催化亚基基因(CnA)表达量的影响。结果表明,高浓度NaCl和CaCl_2以及高pH均能抑制嗜铁素的产生。利用半定量PCR分析得知,CnA基因与SidA基因之间存在一定的负调控关系,该结果与钙调磷酸酶专性抑制剂环孢菌素A能够提高嗜铁素产量的结果相一致。     

海洋细菌Bacillus sp．HN07的分离鉴定及所产碱性纤维素酶性质研究

从渤海海域（121°30′00″E,40°25′00″N）海泥中筛选到一株产碱性纤维素酶的海洋细菌。通过形态观察、生理生化特性及16SrDNA序列分析,鉴定该菌株属于芽孢杆菌属（Bacillus）,命名为Bacillussp．HN07。研究表明：HN07最适生长温度30℃,适宜在pH7．0～8．0、含2．0％～3．0％NaCl的培养条件下生长和产酶,并且具有较好的遗传稳定性。酶学性质初步研究显示,HN07所产碱性纤维素酶最适反应温度为45℃,最适pH为8．0,在碱性条件下具有较好的稳定性,具有潜在的工业应用价值。     

短小芽孢杆菌2080碱性蛋白酶的纯化与性质

短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）2080碱性蛋白酶的发酵液经超滤、硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析得到了纯化的组分。SDS-PAGE电泳分析显示其分子量约为61kDa。酶学性质研究表明,该纯化酶的最适pH为10．5,最适温度为50℃。     

外源性PTEN增强放射线诱导胰腺癌ASPC-1细胞G2/M期阻滞

目的观察外源性PTEN在乏氧及放射前后对胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期及克隆形成的影响。方法将质粒pEAK8和pEAK8-PTEN分别转染ASPC-1细胞,获得ASPC-1-pEAK8细胞及ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞,将ASPC-1、ASPC-1-pEAK8和ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞各分成常氧组、乏氧组、照射组、乏氧照射组。乏氧组施加乏氧（1%O2）处理,乏氧时间为24 h,照射组接受4Gy单次照射,乏氧照射组在乏氧下进行照射。应用Western印迹杂交、流式细胞术、成克隆分析法检测外源性PTEN对ASPC-1细胞PTEN蛋白表达、细胞周期分布及细胞克隆形成能力的影响。结果ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞PTEN蛋白增加明显。常氧下,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞G2/M期细胞增多,并且放射线进一步增强了G2/M期细胞阻滞。乏氧8h后,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞凋亡比例显著提高。常氧及放射后,ASPC-1、ASPC-1-pEAK8、ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞克隆形成率分别为33.33±8.38%、31.67±4.32%、24.00±3.90%和5.53±0.52%、5.33±0.74%、3.73±1.20%。乏氧及放射后,细胞克隆形成率分别为29.67±4.97%、29.50±3.39%、19.83±5.12%和12.08±0.78%、11.17±0.73%和7.38±0.58%。结果表明,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1,ASPC-1-pEAK8细胞在照射及乏氧前后克隆形成率均明显降低。结论外源性PTEN可使胰腺癌ASPC-1细胞阻滞在G2/M期,增强乏氧诱导细胞凋亡,增强放射线诱导ASPC-1细胞G2/M期阻滞的能力,提高放射线对ASPC-1细胞在常氧及乏氧下的细胞杀伤。     

ILKAP在肿瘤发生发展中的作用

整合素连接激酶相关磷酸酶（ILKAP）是蛋白磷酸酶2C（PP2C）家族的新成员,初步的研究结果显示,这是一种与细胞凋亡信号通路密切相关的磷酸酶.ILKAP广泛表达于人体组织中,在骼肌、肾脏、肝脏中有高水平的表达.介导细胞凋亡是ILKAP的主要生理功能,因而与肿瘤的发生、发展密切相关.ILKAP主要通过负调控整合素激酶信号通路,以及正调控c-Jun氨基末端激酶/促分裂原活化蛋白激酶（JNK/MAPK）信号通路而发挥作用.另外,在很多肿瘤细胞中,存在ILKAP基因的杂合性缺失或突变体,使ILKAP不能正确表达,从而不能介导肿瘤细胞的凋亡.     

蛋白磷酸酶2A在真菌细胞中的研究进展

蛋白质可逆的磷酸化修饰在真菌细胞生命活动中发挥着重要作用。磷酸化与去磷酸化过程相互协调。蛋白质中磷酸丝氨酸/苏氨酸位点的去磷酸化反应主要由蛋白磷酸酶2A (Protein Phosphatase2A,PP2A)负责催化。PP2A由催化亚基、调节亚基与结构亚基组合成有活性的三聚体全酶形式发挥功能。本文以模式真菌酿酒酵母、裂殖酵母与人类条件致病菌白色念珠菌为例,总结了PP2A家族成员在真菌细胞中的研究进展及去磷酸化作用调控真菌细胞生命活动的重要性,分析了PP2A调控真菌生命活动尚需解析的作用机制,并提出了可能的研究思路。