高粱叶片磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶疏水微区的荧光研究

应用疏水荧光探针──ＡＮＳ在不同浓度的变构效应剂存在时进行荧光滴定．磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶分子中疏水微区的微环境能被效应剂或底物诱导产生变构,不同的变构效应剂所诱发的构象态是不一致的。这进一步证明了高粱叶片磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶在溶液中的多构象态。     

番茄果实中焦磷酸：果糖—6—磷酸1—磷酸转移酶的两种…

番茄果实由绿转红的过程中,焦磷酸：果糖－６－磷酸转移酶的酶型发生转化。在体外通过胰蛋白酶处理部分纯化的番茄绿果实中ＰＦＰ来探讨酶型转化的原因,蛋白免疫印渍结果证实ＰＦＰ的α－亚基比－更容易受到胰蛋白酶的降解,这也是ＰＦＰ经胰蛋白酶处理后酵解与生糖活性下降的原因,然而ＰＦＰ的亚基经尿素解离后,以胰蛋白酶处理的蛋白免疫印渍分析却表明ＰＦＰ的两种亚基均被胰蛋白酶更加有效地降解,显然α－亚基在ＰＦＰ的高级     

玉米叶片依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶两种分子型动力学特性的研究

从玉米叶片中部分纯化了依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PPi-PFK),对果糖2,6-二磷酸具有很高的敏感性(K_a≈15nmol/L)。纯化过程中酶的生糖方向活性对酵解方向活性的比值逐渐增加。F2,6-P_2的参与使这一比值下降,并且解除高浓度PPi对酶FBP形成活性的抑制。 用胰蛋白酶限制酶解,90min使80％酶的酵解方向活性丧失而仍然保持几乎全部的酶的生糖方向活性。胰蛋白酶修饰的酶的动力学结果表明F6P饱和曲线呈明显S型而且V_(max)大大下降。在F2,6-P_2存在下修饰酶的K_m(F6P)值比天然酶约大4倍。 酶的生糖方向活性动力学特性的比较说明天然酶和胰蛋白酶修饰酶几乎具有相同的催化能力和底物(F6P)亲合力。 实验支持植物PPi-PFK存在两种可以相互转化的酶分子型的调节酶的活性和作用方向的模型。     

菠萝叶片依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶的纯化及其特性

经硫酸铵分部,DEAE—纤维素、羟基磷灰石、Sephadex G—200及磷酸纤维素柱层析,从菠萝叶片分离得到电泳均一的依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFP)。SDS电泳图谱表明有一条分子量为62kD的主带和一条57 kD的弱带。Fru—2,6—P_2对酶的正反应活性有促进作用。动力学研究表明,Fru—2,6—P_2增加V_(max)及酶对底物Fru—6—P和Mg~(2+)的亲和性。     

番茄果实中焦磷酸:D-果糖-6-磷酸 1-磷酸转移酶的两种酶型的分离纯化及其特性

用快速蛋白液相层析仪(FPLC)Mono Q柱(HR5/5)分离纯化成熟绿番茄果实中PFP的两种分子酶型及其特性。一种酶型为Q_1,是含两个β-亚基(60kD)的二聚体,比活为5μmol min~(-1) mg~(-1);另一种为Q_2,由四个α-亚基(66kD)和四个β-亚基(60kD)组成八聚体,比活为70.5μmol/min~(-1)·mg~(-1)。Q_1的分子量是120kD,Q_2的分子量介于500kD和530kD之间。用纯化的Q_2制备的抗血清专一地与Q_2起沉淀反应。PFP酶液贮存后,其Q_1/Q_2蛋白量比值增加明显,表明部分Q_2转化为Q_1。Q_1具有催化活力表明PFP的活性中心位于β-亚基。α-亚基可能借增强PFP酶对F2,6P_2的亲和力以提高酶的比活而起调节功能,但是Q_1的活力依赖于F2,6P_2的激活,表明β-亚基处也可能存在F_2,_6P_2的调节位点。Q_2含紧密结合的F2,6P_2分子,并表现出对F2,6P2_的不敏感性,基于此种现象,有必要重新认识PFP对F2,6P_2敏感性的内在实质。     

Pi和PGA对玉米叶片PFK-2/FBPase-2的作用

Fructose-6-phosphate 2-kinase and fructose 2,6-bisphosphatase have been partially purified from maize leaves by PEG fractionadon and by chromatography on TSK-DEAE ion exchanger and Blue-Sepharose 4B. Fructose-6-phosphate 2-kinase was activated by phosphate and inhibited by 3-pnosphoglycerate. Furctose 2,6-bisphosphatase was inhibited by inorganic phosphate and fructose-6-phosphate.The observed pattern of reguladon suggests that systhesis and degradation of Fru-2,6-P_2 respond to changes in the concentration of effectors. An increase in the level of glycerate-3-phosphate or dihydroxyacetonephosphate will result in a decrease in the level of Fru-2,6-P_2. Conversely a rise in Fru-6-P concentration will lead to an increase in the Fru-2, 6-P_2 concentration.     

植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究——Ⅶ.PEP羧化酶必需赖氨酸残基的化学修饰

本文报道纯化的高粱叶片PEP羧化酶经氨基修饰剂TNBS和PLP的修饰迅速失活。酶的TNBS失活与保温时间和抑制剂浓度呈函数关系并表现为拟一级反应的特性。动力学资料表明酶仅被1分子TNBS修饰即失活。TNBS修饰酶的吸收光谱特性表明被修饰的是酶蛋白的赖氨酸残基。底物(PEP)和效应剂(G6P)保护酶免被TNBS失活。计算G6P和酶的解离常数K_d=2.39×10~(-3)M。酶的其他反应组分HCO_3~-和MgCl_2单独存在时均不影响TNBS对酶的失活作用。在被TNBS修饰过程中还导致酶对G6P迅速脱敏,同时却保持酶对甘氨酸的敏感性。     

光／暗对玉米叶片果糖—6—磷酸激酶—2和果糖—2,6—二磷酸酯酶活…

比较了照光和黑暗条件下玉米叶片果糖－６－磷酶激酶－２和果糖－２,６－二磷酸酯酶的活力变化。当玉米植株从暗中转入光下后,其叶片ＰＦＫ－２的活力随光照时间的延长而逐渐降低,而ＦＢＰａｓｅ－２活力变化不明显;从光下转入暗后叶片ＰＦＫ－２活力明显上升,ＦＢＰａｓｅ－２活力仍无明显变化;其ＰＦＫ－２／ＦＢＰａｓｅ－２比值在光处理时下降,暗处理时上升。同时叶片中果糖－２,６－二磷酸的含量与ＰＦＫ－２／ＦＢＰａ