新的β—二氢沉香叶喃倍半萜多酯的HRFABMS和EIMS研究

利用高分辨快原子轰击质谱（HRFABMS）分析了八个新的β－二氢沉香叶喃倍半萜多酯的FABMS。结果表明,所有该类化合物均可以精确地获得[M＋Na]^ 准分子离子的分子组成,从而方便地获得原有化合物分子量和分子式,所测化合物的FABMS谱中均存在[M H-H2O]^ 特征离子,为化合物分子式的确定提供了进一步的佐证;在该类化合物的EIMS谱中,观测不到分子离子的存在,但一般可以获得[MCH3]^ ,[M-Ac]^ ,[M-HOAc]^ 等特征离子以及高强度的酰基离子。将EIMS和FABMS结合起来可以快速准确地获得化合物的分子量、分子式以及相关的取代酰基等结构信息。     

天然产物梣酮对粘虫围食膜的影响

【目的】梣酮是从芸香科植物白鲜Diatamnus dasycarpus根皮中分离出的一种化合物, 对试虫表现出胃毒活性。本研究旨在检测梣酮对粘虫Mythimna separata 6龄幼虫中肠围食膜的影响, 从而进一步阐明梣酮的杀虫作用机理。【方法】经活体及离体处理, 通过生化分析和扫描电镜观察等方法, 研究了梣酮处理对粘虫幼虫中肠围食膜糖含量, 蛋白质含量和组分以及围食膜表面结构的影响。【结果】梣酮(20 mg/mL)活体处理降低了粘虫6龄幼虫围食膜的蛋白质含量, 却使糖含量升高。活体(20 mg/mL梣酮)及离体(8 mg/mL梣酮)处理条件下, 围食膜糖含量分别为对照组的1.75倍及2.17倍。SDS-PAGE结果显示, 离体及活体条件下经梣酮处理, 围食膜部分蛋白质降解。围食膜解剖扫描电镜观察表明, 梣酮处理可造成围食膜微纤丝排列紊乱。【结论】天然产物梣酮处理对粘虫中肠围食膜的糖含量及蛋白质含量和组分有影响,且改变了围食膜表面结构。本研究为深入地研究梣酮杀虫作用机理奠定了基础。     

杠柳杀虫组分F3-28对东方粘虫和小地老虎幼虫中肠消化酶活性的影响

F3-28是从杀虫植物杠柳Periploca sepium Bunge根皮中分离的一个具有杀虫活性的馏分,其主要成分为杠柳苷A、杠柳苷E和杠柳苷X。为了探索F3-28的初始作用部位, 为深入研究其作用机理奠定基础, 本研究采用经典的昆虫消化酶活性测定方法, 比较了F3-28对小地老虎Agrotis ypsilon和东方粘虫Mythimna separata 5龄幼虫消化酶系活性的影响。结果表明：对F3-28不敏感的小地老虎幼虫摄食F3-28后,其中肠蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的活性无显著变化。对F3-28敏感的东方粘虫幼虫摄食F3-28后2,4,8,10,12,24,48 h, 其中肠总蛋白酶活性分别为对照组的0.76,2.53,1.45,1.88,1.54,1.46,1.70倍,且和药物浓度呈依赖关系; 类胰蛋白酶的活性分别为对照组的1.60, 1.75,1.60,1.12,1.39,1.16,1.15倍（以BAPNA为底物）或1.68,1.95,1.53,1.26,1.15,1.13,1.14倍（以TAME为底物）,且和药物浓度呈依赖关系; 类胰凝乳蛋白酶活性分别为对照组的0.50,1.66,1.44,1.18,1.54,1.08和1.03 倍,但和药物浓度无依赖关系; 淀粉酶的活性分别为对照组的1.60,1.35,1.27,1.31,1.23和1.20 倍,但和药物浓度无依赖关系;对脂肪酶活性无明显影响。这些结果说明,杠柳杀虫活性组分F3-28的作用机理可能涉及对试虫中肠蛋白酶的激活,特别是对类胰蛋白酶的激活。     

苦皮藤素V对东方粘虫中肠细胞及其消化酶活性的影响

苦皮藤素V是从杀虫植物苦皮藤Celastrus angulatus Max.根皮中分离的一种对昆虫具有毒杀活性的新化合物。该文通过电镜观察和生化分析研究了其对东方粘虫Mythimnaseparata(walker)幼虫中肠组织及中肠主要消化酶活性的影响。电镜观察发现,中毒试虫的中肠细胞及其细胞器发生明显病变：柱状细胞顶膜微绒毛零乱、减少;线粒体肿胀,出现空白亮区,双层膜不完整;细胞质密度降低,细胞器排列紊乱;内质网池扩张,囊泡化,粗面内质网减少;杯状细胞杯腔变大,微绒毛减少。消化酶活性测定结果表明,中毒试虫中肠的蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶的活性和正常虫相比,无显著变化。因此认为,苦皮藤素V主要作用于中肠细胞的质膜及其内膜系统。     

印楝提取物的杀虫活性及其中四降三萜研究

从印楝（Azadirachta indica）种仁的提取物中分离得到10仆四降三萜化合物,能过波谱方法鉴定,它们分别是nimbin(1),deacetylnimbin(2),salannolide(3),azadirachtin(4),vepaol(5),isovepaol(6),3-tigloyl-azadirachtol(7),1-tigloyl-3-acetyl-azadirachtinin(8),3-tigloy-azadirachtinin(9),1-tigloy1-3-acetyl-11-hydrox-ymeliacarpinin(10)。此外,还得到β－谷甾醇、豆甾醇、胡萝卜甙和硬脂酸。含印楝素（azadirachtion)为0.5%的印楝提取物在稀释150－800倍时对小菜蛾和菜粉蝶的人较强的防治作用。     

苦皮藤素Ⅴ对东方粘虫肌细胞的影响

苦皮藤素Ⅴ是从杀虫植物苦皮藤 Celustrus angulatus Max.根皮中分离的一种对昆虫具毒杀活性的新化合物.采用电子显微镜技术研究了苦皮藤素Ⅴ对东方粘虫 Mythimna separata (Walker)肌肉系统的作用.电镜观察发现,苦皮藤素Ⅴ对东方粘虫成虫飞行肌和幼虫体壁肌均具致毒作用,中毒试虫肌细胞特别是肌细胞的质膜及内膜系统发生明显病变:肌膜破坏,脱落;线粒体肿胀,空泡化,崩解;肌原纤维与线粒体间间隙增大;肌质网扩张,产生髓鞘样结构;细胞核肿胀,核质浓缩,核膜破坏;微气管与肌细胞之间间隙增大;肌小节弥散、排列紊乱.这些结果表明,肌细胞质膜及内膜系统可能是苦皮藤素Ⅴ的一个作用部位.     

氨基甲酸酯类杀虫剂的作用机制及其毒理特点

<正> 关于氨基甲酸酯类杀虫剂的作用机制,一般都认为是由于它抑制了虫体内的乙酰胆碱酯酶(简写成AChE),但对这种抑制作用,长期以来就有两种不同的看法。一种看法认为,氨基甲酸酯分子与AChE的酯动部位和结合部位形成一种比较稳定的复合物,从而使AChE失去活性。但在适当条件下,这种复合物又可分解,使酶复活。因此这种抑制属于可逆的竞争性抑制。抑制过程中,氨基甲酸酯和AChE没有发生真正的化学反应,以速灭威为例,图解见图1。     

肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞的快速分离与体外培养

循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)是从肿瘤病灶脱落并进入外周血液循环的处于游离状态的肿瘤细胞,代表了肿瘤病灶的分子特征,可用于对肿瘤的“液体活检”。但外周血中CTCs数目极为稀少,使得后续针对CTCs的分子与功能分析面临巨大挑战。鉴于此,本文建立了一种基于微流控芯片和免疫磁珠的能够快速从肺癌患者的外周血中分离CTCs的方法。该方法直接针对全血进行一步分离,可避免血液样本预处理及富集等过程对细胞造成的损伤,从而有效地保护CTCs的活性(>90%)。分离得到的CTCs可富集在小体积中(80 μL),实现高密度的细胞培养,完成体外扩增,扩增后的CTCs可以被进一步冻存、复苏及再次增殖培养,表明已经对患者血液中的CTCs成功建系。本文进一步对CTCs进行了基因突变(EGFR、KRAS、PIK3CA、TP53和BRAF)检测及荧光标记葡萄糖类似物(2-NBDG)摄取的功能分析,证明CTCs存在较大异质性。本研究成功实现了对外周血中稀少的CTCs进行体外培养,并对CTCs进行了基因、蛋白、功能等各个层面的分析,这对于肿瘤精准医疗具有重要的临床意义。     

昆虫围食膜的研究进展

围食膜是大多数昆虫中肠内的半透性薄膜 ,主要由几丁质、蛋白质构成。依据其形成的方式分 :Ⅰ型围食膜 ,由整个中肠细胞分泌形成多层管状膜 ;Ⅱ型围食膜由中肠前端特殊的细胞分泌成连续的套筒管状膜。由于位于食物与中肠上皮细胞间而在中肠生理中起重要作用 ,围食膜保护中肠上皮免于机械损伤以及病原菌、毒素的入侵 ;作为半透膜以及将中肠分为不同的区室而在营养物质的消化和吸收中具有重要作用。该文综述了有关围食膜结构、组分、功能、通透性以及与害虫防治的关系等方面的研究进展。     

杠柳新苷P和E对东方粘虫和小地老虎幼虫中肠蛋白酶活性的影响

从杀虫植物杠柳Periploca sepium Bunge根皮中分离得到的杠柳新苷P具有很高的杀虫活性, 为了探索其杀虫机理, 采用经典的昆虫蛋白酶活性测定方法, 比较研究了杠柳新苷P和无杀虫活性的杠柳新苷E对东方粘虫Mythimna separata与小地老虎Agrotis ypsilon 6龄幼虫中肠类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的影响。结果表明： 对东方粘虫弱碱性类胰蛋白酶, 杠柳新苷P表现出强激活作用（酶活性为对照的3.43倍）, 激活时间可长达8 h, 而杠柳新苷E则无明显激活作用。杠柳新苷P和E对东方粘虫弱碱性类胰蛋白酶活性的影响二者差异显著（P=0.01）, 杠柳新苷P药后2, 4和8 h, 东方粘虫中肠弱碱性类胰蛋白酶的活性分别是杠柳新苷E药后的15.4, 106.8和242.7倍。酶活性测定结果还表明, 与东方粘虫相比, 小地老虎中肠类胰蛋白酶活性相对较低, 且杠柳新苷P的激活作用也较弱, 这可能是杠柳新苷P对东方粘虫具杀虫活性, 而小地老虎对其不敏感的原因之一; 另外, 杠柳新苷P和E对试虫中肠类凝乳胰蛋白酶活性均无明显影响。据此推测, 杠柳活性成分新苷P对东方粘虫中肠弱碱性类胰蛋白酶的激活作用可能是造成试虫中毒的机理之一。