双歧杆菌在家兔实验性肝坏死模型中的靶向增殖研究

目的 探讨双歧杆菌在海扶超声聚焦刀（HIFU）制作的肝凝固性坏死模型中的靶向性增殖的可能性。方法 用HIFU制作成家兔肝凝固性坏死模型,经耳缘静脉注射两歧双歧杆菌活菌,通过检测注射前后家兔体温、红细胞、白细胞和血小板等生理指标的变化和注射后主要器官的组织切片来评价双歧杆菌作为基因治疗载体系统的安全性,同时对肝坏死模型等组织切片还做了革兰染色检测,证明了双歧杆菌在坏死组织中的增殖。结果 双歧杆菌能够在HIFU制作的肝凝固性坏死模型中增殖、而这一增殖过程并不影响家兔的生命安全。结论 双歧杆菌作为肿瘤基因治疗的靶向载体系统是安全和可行的,HIFU制作的肝坏死模型可以用于双歧杆菌基因治疗的靶向载体系统的辅助研究。     

人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定

目的鉴定人FAM33A基因的启动子,为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法采用5’RACE技术（5’端cDNA快速扩增）鉴定FAM33A的转录起始位点。采用PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略,构建FAM33A启动子荧光素酶报告基因。采用Lipofeetamine^TM2000转染H1299细胞,并通过Dual-Lu-ciferase@ Reporter Assay System进行荧光素酶报告基因活性检测。结果确定了FAM33A的转录起始位点,构建了覆盖FAM33A 5’端ATG附近约2kb区域的一系列FAM33A启动子荧光素酶报告基因。启动子活性分析表明,这些重组体均具有较高的启动子活性,同时含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点。结论FAM33A启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590bp的区域内。     

双歧杆菌表达ETEC CFA／I的免疫电镜定位分析

目的研究双歧杆菌表达的CFA／I在细胞中的分布。方法将培养8～10h的重组双歧杆菌固定后制作电镜切片，镜检合格后用镍网捞取3-5个切片与金标抗体作用，镜检CFA／I在双歧杆菌中的表达分布。结果自制的胶体金颗粒均匀，与抗体结合后能够示踪CFA／I在双歧杆菌中的表达分布。结论双歧杆菌表达的CFA／I主要集中在靠近细胞膜的周质腔一侧，利于向外分泌和释放。