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151.
丙型肝炎病毒核壳蛋白抗原的化学合成及其在血清学诊断中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
选取丙型肝炎病毒(HCV)核壳蛋白区两个可能含有优势抗原表位的19和16氨基酸的肽殴(C-19肽和C-16肽),利用固相多肽合成技术进行了化学合成。经用反相高压液相层析(HPLC)及脉冲液相多肽测序技术检定合成肽产品的纯度及序列后,以C-19和C-16肽作为包被抗原组装成检测HCV血清抗体的ELISA诊断试剂。用所组装的合成肽试剂检测中国药品生物制品检定所提供的HCV标准参比血清,并比较利用该试剂和美国Abbott实验室生产的HCV第二代EIA诊断试剂平行检测109份献血员血清的结果,表明C-19肽能够特异、重复、灵敏地检出HCV血清抗体,可以作为我国第一代HCV诊断试剂的合成肽抗原。 相似文献
152.
在大肠杆菌中提高人α1b型基因工程干扰素的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将人α1b型干扰素(IFN-α1b)基因插入带有原核增强子样序列的新型载体Pbv322,使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体,达到1.6×108u/L培养液。重组质粒的特点是:含增强子序列X,trp启动子控制。利用DEAE-Sepharose、CM-Sepharose离子交换层析及单克隆抗体亲和层析纯化IFN-α1b,获得了电泳纯产品,其比活性为2×107u/mg,分子量为19kDa。此外,用Pat153代替Pbv322,构建了带有和不带有X序列的两种表达载体,平行对比表明增强子X序列可以将IFN-α1b表达提高4倍 相似文献
153.
从临床肝病患者中选择两例HCV和HBV重叠感染者HSQ和SZH,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶(ALT)持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ALT异常期,血清学检测结果为HBsAg、HBeAg阳性,抗HCVIgG(包括C22、C33c)阴性,但套式PCR检测HCVRNA阳性,核心区cDNA序列分析发现该区有1个密码子(GGCnt385—387)缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸(GLY),从血清学检测和序列分析结果推测,在HCV和HBV重叠感染中,HBV和HCV均可处于持续复制状态,抗HCVIgG抗体阴性可能是HCV的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到HBV干扰的结果。 相似文献
154.
155.
应用基因工程的方法,将含有巨细胞病毒(CMV)启动子的基因片段和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的cDNA,克隆进逆转录病毒载体N2A,得到重组质粒N2A/CMV/hGM-CSF.经脂质体包装并转染包装细胞,通过G418药物筛选,得到抗性克隆。经PCR和Southemblot检测证实,GM-CSF基因已整合到该克隆细胞的染色体上,获得的逆转录病毒滴度达10 ̄4CFU/ml,克隆细胞培养上清用TF-1细胞可检测到GM-CSF活性。 相似文献
156.
157.
本文比较了硫氰化钾盐析法、硫酸铵分级盐析法、混合盐析法、直接超速离心法以及离子交换层析法等五种提纯人脐血干扰素方法的优缺点。从操作简便、纯度高、活性强等方面综合考虑,以硫氰化钾盐析法和硫酸铵分级盐析法较为理想。经我们改进后的硫氰化钾盐析法和硫酸铵分级盐析法,可使人脐血干扰素比活性分别提高到2~6×10单位/毫克蛋白和1一1.4×10单位/毫克蛋白。经鉴定人脐血干扰紊是一种糖蛋白,其分子量为28,000。 相似文献
158.
以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
将总长度为152kb的单纯疱疹病毒1型(HSV-1)(17株)基因组分成5个相互间有部分重叠的大片段(约35-40kb),分别克隆到粘粒SuperCosMW中,依次称为cos48、cos28、cos6、cos14和cos56(DavisonAJetal,1993)。此5个粘粒用PacⅠ切去粘粒骨架后共转染细胞,可发生同源重组而产生野生型HSV-1。以此为基础,利用粘粒cos56的HSV-1UL44基因中含有一个XbaⅠ单一酶切位点的特点,将一个两端加有XbaⅠ位点的CMV-lacZ-polyA片段插入其中,构建成cos56-lacZ。将cos56-lacZ与其它4个粘粒经PacⅠ酶切后,用lipofectamine转染试剂共转染BHK-21细胞,37℃培养2-3天,开始出现细胞病变及噬斑。5天后将病变细胞连同培养液一起冻融3次,取上清0.1ml感染新鲜的BHK-21细胞,37℃培养24小时,用X-gal染色30-60分钟,镜下观察可见大量蓝色噬斑。蓝色噬斑数占噬斑总数的50%以上。经空斑纯化的蓝斑病毒可稳定传代。这种方法同将外源基因表达盒插入HSVtk基因中构建成重组质粒,再与HSV-1基因组DNA共转染细 相似文献
159.
将缺失两端ITR的AAV -2基因组克隆于HSV -1扩增子载体获得了质粒pHSV AAV .以HSV- 1tsK株为辅助病毒感染转染了该质粒的Vero细胞 ,可获得一种具有包装重组AAV质粒能力的混合毒种 .连续传代可使其包装能力迅速升高 ,至 5~ 6代达到最高并趋于平稳 .此混合毒种中 ,含有包装了多拷贝AAV -2基因组的复制缺陷性假型HSV- 1病毒 ,它可表达AAV -2编码的复制与包装所需的各种反式蛋白 ;同时也含有HSV -1tsK病毒 ,它提供AAV -2复制与包装所需的全部辅助病毒功能 .实验结果也表明 ,HSV -1tsK病毒的复制为混合毒种辅助重组AAV载体的包装所必需 .这项研究首次报道了一种全新的重组AAV载体包装系统 ,与传统的双质粒共转染、腺病毒辅助包装方案相比 ,本系统简便易行 ,并明显提高了重组AAV的包装效率 . 相似文献
160.
粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
基因工程重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症.在正确克隆人G-CSFcDNA的基础上,重点对G-CSFcDNA的5′端进行了较为彻底的修饰,修饰后的基因插入pBV220载体组建成功pBV220/G-CSF/2-174高效表达载体.表达后SDS-PAGE分析其表达最高达50%以上.根据G-CSF表达形成包涵体这一特性,建立了一条简便、稳定,适用于大规模生产的分离纯化工艺流程.首先分离纯化包涵体,8mol/L尿素裂解包涵体,稀释复性蛋白,之后一步SP-SepharoseFF柱层析至均质.纯化的G-CSF比活性达3.4×108U/mg蛋白,每升表达菌液回收的G-CSF总活性达1.06×1011U.纯化产物的N-端氨基酸序列分析表明,对甲硫氨酸的去除彻底,用于人体时可能具有较小的免疫原性和毒性 相似文献