Tn4560在圈卷产色链霉菌中的转座及其在尼可霉素生物合成相关基因克隆中的应用

采用常规转化方法用来自天蓝色链霉菌J1 5 0 1的质粒pUC1 1 6 9(pMT6 6 0∷Tn45 5 6∷vph)多次转化尼可霉素产生菌圈卷产色链霉菌野生型 71 0 0的原生质体 ,均未得到转化子。采用限制性热衰减法于 5 0℃ ,3 0min溶菌制备 71 0 0的原生质体 ,获得了转化子 ,但转化频率极低 ,只有 0 4个转化子 μgDNA。用来自 71 0 0的pUC1 1 6 9再转化不含pUC1 1 6 9的 71 0 0原生质体 ,转化频率提高 1 0 3 ～ 1 0 4 倍。于 3 9℃ ,MM Vio条件下培养携带有pUC1 1 6 9的 71 0 0孢子 ,Tn45 6 0发生转座 ,筛选到 40 6 8个转座菌落 ,并从中得到 8株尼可霉素阻断突变株 ;对这 8株突变株的总DNA进行Southern杂交分析表明 ,Tn45 6 0至少在 4个不同的位点插入到 71 0 0的染色体上。用实验室已获得的与尼可霉素生物合成有关的 3 0kbDNA片段为探针和经不同酶切的 8株突变株的总DNA进行Southern杂交 ,结果表明 ,除阻断突变株Nik5有杂交信号且杂交信号大小均同野生型…     

诱导蜂房哈夫尼菌产L-赖氨酸脱羧酶条件的研究

用响应面法对蜂房哈夫尼菌（Hafnia alvei）L-赖氨酸脱羧酶产酶诱导条件进行优化。首先通过单因素实验对产酶体系的pH、震荡培养时间、静置培养时间、诱导物添加量和Ⅷ添加量进行优化。在此基础上,用部分因子重复试验筛选出对酶活影响显著的3个因素（静置培养时间,诱导物添加量,VB6添加量）,再通过Box-behnken实验对这三个因素进行优化,得出最优值。最终得到产酶最佳诱导条件为：震荡培养阶段培养基pH6．5,静置培养阶段pH5．5;摇床震荡培养11h后静置培养7．5h,诱导物L一赖氨酸加入量为5．18dL,维生素B6加入量为1．38g／L时酶活最高,达到71．2U／mL,为优化前（1．74u／mL）的41．8倍,在单因素的基础上提高了19％。     

丙泊酚联合舒芬太尼/芬太尼对无痛人流患者麻醉效果分析

目的:研究丙泊酚联合舒芬太尼或芬太尼对无痛人流患者麻醉情况及术后疼痛的影响差异。方法:选取我院自愿申请无痛人流孕妇208例,通过随机数表法分为实验组(n=104)和对照组(n=104),对照组给予丙泊酚联合芬太尼用药,实验组给予丙泊酚联合舒芬太尼用药。观察并记录患者麻醉前(T0)、麻醉后手术前(T1)、扩宫时(T2)、术后(T3)的MAP、SpO_2、RR、HR;记录患者丙泊酚用量、苏醒时间、患者醒后宫缩VAS疼痛评分;记录两组患者不良反应的发生率。结果:与T0时比较,两组在T1和T2时的MAP、SpO_2、RR、HR均有所降低,且差异有统计学意义(P0.05),两组间比较无明显差异(p0.05);实验组丙泊酚用量低于对照组(P0.05);实验组的平均苏醒时间、醒后宫缩VAS疼痛评分及丙泊酚注射痛均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。实验组的恶心呕吐、呼吸抑制等不良反应发生率均较对照组有所降低,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:丙泊酚联合舒芬太尼较丙泊酚联合芬太尼镇痛作用更佳,术后恢复更快,值得在无痛人流手术推广使用。     

新古尼异虫草内菌核的多菌定殖现象

基于高通量测序技术,对采自中国江西省宜丰县杨柳镇、贵州省石阡县白沙镇、贵州省湄潭县、贵州省凤岗县和贵州省施秉县5个不同地区的新古尼异虫草Metacordyceps neogunnii的真菌生态位进行研究。结果显示,新古尼异虫草生境土壤、菌表及其内菌核的真菌类群共涉及子囊菌门Ascomycota、担子菌门Basidiomycota、接合菌门Zygomycota、类原生动物门Rozellomycota 4个门及一些未定门的真菌;共17纲、43目、77科、129个属的177种真菌。在属的水平上,新古尼异虫草生境土壤（Cg1）的优势属为被孢霉Mortierella,相对丰度为84.86%,其次是分类地位未定的真菌（4.58%）,毛壳菌科Chaetomiaceae 1属（1.22%）;虫草菌表（Cg2）的优势属或种为新古尼异虫草M. neogunnii（83.66%）,其次是粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea（9.48%）,帚枝霉属Sarocladium（2.07%）和被孢霉属（1.12%）。而来自江西（JX）、石阡（SX）、凤岗（FG）、施秉（Cg3）4个不同地区的新古尼异虫草样本的内菌核优势属真菌均为新古尼异虫草,其相对丰度分别为：99.74%、99.50%、99.73%和98.82%,其余属相对丰度均小于1%。来自湄潭的干标本内菌核优势属为麦角菌科Clavicipitaceae的一个未定属,相对丰度则高达99.97%。综上结果表明,来自5个不同地区的新古尼异虫草种群的内菌核中不仅是新古尼异虫草M. neogunnii,同时有其他真菌存在。施秉样本周围的土壤真菌群落较虫草样本内菌核具明显的多样性。但有趣的是,采集虫草的土壤中不含新古尼异虫草,而具有相对丰度较大的被孢霉Mortierella spp.和木霉Trichoderma spp.。来自湄潭的干标本,不含新古尼异虫草而是相对丰度较高的麦角菌科Clavicipitaceae一未知成员,其分类地位值得进一步研究。     

子宫下段剖宫产术后舒芬太尼-布比卡因和芬太尼-布比卡因自控硬膜外镇痛的比较

目的 观察舒芬太尼-布比卡因用于子宫下段剖宫产术后镇痛,与等效价的芬太尼-布比卡因比较,在镇痛效果、临床副作用方面有无优越性.方法 选择择期硬膜外阻滞麻醉下行子宫下段剖宫产术31例,随机分为两组:A组(芬太尼-布比卡因组)16例;B组(舒芬太尼-布比卡因组)15例.A组给予负荷量芬太尼20μg和0.125%布比卡因4ml;B组给予负荷量舒芬太尼2 μg和0.125%布比卡因4 ml.两组均采用珠海福尼亚电子微量泵CPE-101-200型行自控硬膜外镇痛.观察术后4、8、16、24 h的疼痛、镇静、呕吐的评分,记录心率、血氧饱和度、镇痛液消耗量.疼痛情况用水平视觉模拟评分法(VAS)评估,镇静程度按四点评估表法分类.结果 与A组比较,B组各时点VAS评分普遍低于A组,但仅术后8 h和24 h差异有显著统计学意义(.P<0.05).两组病人镇静评分均无达到3分者,手术后4、8、24 h B组镇静评分达2分者明显多于A组(P<0.05).两组术后呕吐发生率都低,组问无显著统计学意义(P>O.05).结论 子宫下段剖宫产术后舒芬太尼-布比卡因组的硬膜外镇痛效果略优于芬太尼-布比卡因组.镇静作用明显高于芬太尼-布比卡因组,而且不会增加呕吐、呼吸抑饲等副作用的发生率.     

外来植物坚尼草生态学研究

坚尼草(Panicum maximum Jacq.)是一种外来草本植物,已逸为野生,扩展迅速,对本地草本植物构成一定的影响。其扩展能力与其生长和繁殖特点有很大关系。研究表明,坚尼草对环境的适应能力较强;植株较高大,生长迅速,有较强的竞争能力;花期长,单丛坚尼草从始穗到终穗,花期可长达6～7个月;同一穗的果实熟期不同,而且边熟边脱落,从抽穗的5～7d起开始有果实脱落,脱落时间可持续1个月左右,以抽穗2～3周为脱落高峰;不同时间成熟的果实,种子萌发率也不同,7月份成熟的果实比9月份成熟的果实萌发率高。同一穗中,以抽穗后2～3周（果实脱落的高峰期）成熟的果实萌发率较高。果实成熟后,不能立即萌发,储存1～6个月,种子萌发率较高。     

阴离子及其通道阻断剂对大鼠主动脉张力的影响

目的：研究阴离子及其通道阻断剂在去甲肾上腺素(norepinephdne,NE)引起的血管收缩中的作用。方法：常规离体血管灌流法。结果：阴离子通道阻断剂尼氟灭酸(niflurnic acid,NFA)和5-硝基-2-(3-苯丙氨基)-苯甲酸[5-nito-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid,NPPB]可以抑制去甲肾上腺素NE引起的血管收缩;用胆碱替代灌流液中的Na^ 后血管张力无明显变化,而谷氨酸钠替代灌流液中的NaCl后血管张力下降,用同族元素Br^-替代Cl^-后血管张力增加,并能被NFA和NPPB所抑制。结论：阴离子在维持血管张力中的作用比Na^ 更为重要,提示阴离子通道可能在高血压发病中起一定作用。     

瑞芬太尼联合七氟烷吸入对腹腔镜子宫切除术患者炎症应激反应、疼痛介质和血清NSE、S100β蛋白水平的影响

摘要 目的：探讨瑞芬太尼联合七氟烷吸入对腹腔镜子宫切除术患者炎症应激反应、疼痛介质和血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、S100?茁蛋白水平的影响。方法：经随机数字表法,将2020年3月~2021年8月期间来我院接受腹腔镜子宫切除术的105例患者分为对照组（n=52）和研究组（n=53）,对照组患者接受瑞芬太尼诱导,研究组在瑞芬太尼诱导基础上联合七氟烷吸入。对比两组血流动力学、炎症应激反应、疼痛介质和血清NSE、S100β蛋白,对比视觉模拟评分法（VAS）、简易精神状态量表（MMSE）评分变化,记录两组围术期间不良反应发生情况。结果：两组麻醉诱导前5 min（T1）、插管后5 min（T2）、手术完成时（T3）时点心率（HR）、平均动脉压（MAP）升高后降低,但T2、T3时点研究组低于对照组（P<0.05）。两组T1、T2、T3时点血氧饱和度（SpO₂）无明显变化（P>0.05）。术后1 d,两组血清皮质醇（Cor）、去甲肾上腺素（NE）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。术后1 d,两组血清P物质（SP）、前列腺素E2（PGE2）水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。术后1 d,两组血清NSE、S100β蛋白水平升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。研究组术后1 d VAS评分低于对照组,术后3 d MMSE评分高于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率对比无差异（P>0.05）。结论：瑞芬太尼联合七氟烷吸入应用于腹腔镜子宫切除术患者,可稳定血流动力学,减轻炎症及应激反应,同时还可减轻术后疼痛,减轻认知功能损害。     

右美托咪定联合舒芬太尼术后镇痛对老年肺癌患者T细胞亚群、血清炎性因子和疼痛介质指标的影响

摘要 目的：观察右美托咪定联合舒芬太尼术后镇痛对老年肺癌患者T细胞亚群、血清炎性因子和疼痛介质指标的影响。方法：选取2017年7月~2020年12月期间200例我院收治的行肺癌根治术的老年患者,按随机数字表法分为研究组（n=100）、对照组（n=100）。对照组术后镇痛选用舒芬太尼,研究组术后镇痛选用右美托咪定联合舒芬太尼,观察两组患者视觉模拟评分法（VAS）评分和Ramsay镇静评分、外周血T细胞亚群、血清炎性因子和疼痛介质指标、不良反应。结果：两组术后6 h、12 h、24 h、48 h的Ramsay镇静评分、VAS评分均较术后1 h下降（P<0.05）,且研究组以上时间点Ramsay镇静评分高于对照组,而VAS评分低于对照组（P<0.05）。两组术后24 h血清干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）升高,但研究组术后24 h血清IFN-γ、IL-6低于对照组（P<0.05）。两组术后24 h外周血CD8⁺升高,CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺降低（P<0.05）,但术后24 h研究组CD8⁺低于对照组,CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺高于对照组（P<0.05）。术后24 h两组血清β-内啡肽（β-EP）、P物质（SP）以及一氧化氮（NO）水平均升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比无统计学差异（P>0.05）。结论：右美托咪定联合舒芬太尼用于老年肺癌患者术后镇痛,镇痛、镇静效果确切,同时可减轻免疫抑制及炎性反应,且安全性高。     

圈卷产色链霉菌san7324和san7324L基因阻断对形态分化和尼可霉素产生的影响

【目的】圈卷产色链霉菌全局性调控基因wblA阻断突变后,尼可霉素不再产生。RNA-seq和转录分析表明san7324基因在野生型菌株中可以正常转录,而在wblA阻断突变株(ΔwblA)中不能转录,为此本文旨在揭示san7324与尼可霉素产生的关系。【方法】利用同源双交换策略对san7324进行基因阻断,而后通过基因遗传回补及对尼可霉素生物合成相关基因的转录分析等方法研究san7324的功能。【结果】在相同培养条件下,阻断突变株Δsan7324与野生型菌株相比失去了合成尼可霉素的能力。我们通过同源比对发现圈卷产色链霉菌中还存在一个与san7324同源的基因san7324L,该基因的阻断导致尼可霉素产量降低。当san7324和san7324L两个基因同时被阻断后,得到的突变株Δsan7324-san7324L生长稀疏而且不能正常发育分化形成灰色表型的孢子或孢子链,只能形成白色表型的气生菌丝,同时也丧失了合成尼可霉素的能力。当这两个基因(san7324-san7324L)回补双突变株后,则恢复了野生型的表型(能形成孢子链并恢复尼可霉素的产生)。进一步的研究初步表明san7324和san7324L的阻断主要影响了尼可霉素生物合成基因簇中途径特异性调控基因sanG的转录水平,从而影响圈卷产色链霉菌的发育分化和尼可霉素的产生。【结论】该结果为链霉菌形态分化与生理代谢关系的研究提供了更多的证据,同时为多效调控基因wblA作用机制的阐明奠定了基础。