螺旋藻富集和转化硒研究进展

无机硒的生物有机化是开发有机硒的合理途径。硒有机化生物载体有酵母、大蒜、螺旋藻、蜜蜂等。螺旋藻富集和转化硒具有良好的产业化前景,就藻种的选择、培养条件的优化、硒添加浓度和方法等方面的研究进展进行了综述。     

三种提取RNA的方法对汉滩病毒检测敏感性影响的研究

分别采用标准法、ＧＰ法和ＭＢＰ法抽提汉滩病毒ＲＮＡ,结合套式ＰＣＲ比较这三种方法的敏感性。结果表明,所用引物对这两株病毒具有相同的特异性。这三种提取ＲＮＡ的敏感性差异不大,敏感性从高到低依次为：ＧＰ、ＭＢＰ和标准法,检测汉滩病毒的效价分别为０．０１、０．０１和０．１ＴＣＩＤ５０／２００μｌ;提取ＲＮＡ的时间长短分别为：标准法为２．５ｈ,ＧＰ为１ｈ,ＭＢＰ为０．５ｈ,可见ＭＢＰ用时最少。使用ＧＰ和ＭＢＰ提取ＲＮＡ时,可以在室温下进行,不需要低温离心。所以,ＭＢＰ最适合于实验室和临床病原体的快速检测,特别是对采集的环境样品的快速检测     

利用慢病毒介导的shRNA在GT1-7细胞中敲低Srsf1及其对GnRH、Kiss1的影响

目的:探讨慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)敲低丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(Srsf1)基因对小鼠GT1-7细胞中性发育相关基因促性腺激素释放激素(GnRH)、Kiss1的影响。方法:实验分为3组,即空白对照组、阴性对照组及shRNA干扰组。用Srsf1 shRNA慢病毒稳转GT1-7细胞,Real-time PCR和Western blot检测GT1-7细胞中Srsf1在mRNA和蛋白水平的变化,并检测稳转株中GnRH、Kiss1基因的表达情况。结果:慢病毒介导的shRNA成功感染了GT1-7细胞,与空白对照组及阴性对照组相比,shRNA干扰组中Srsf1在mRNA水平降低了45%(P0.001),在蛋白水平敲低了42%(P0.05)。在稳定低表达Srsf1的GT1-7细胞中,GnRH、Kiss1基因在mRNA水平也显著降低(P0.05)。结论:成功的构建了Srsf1基因敲低的细胞株。在GT1-7细胞中敲低Srsf1基因会抑制GnRH、Kiss1基因的表达。     

Enrich_analysis.pl,差异表达基因富集分析的perl脚本

如何从庞大的基因表达数据库里挖掘出有价值的信息,并做出科学的生物学诠释,是基因表达分析领域的重要挑战。富集分析为解决这一问题提出了合理的方案。用Perl语言写了一个脚本——Enrich_analysis.pl,可根据基因注释信息进行基因富集分析,并利用Fisher's Exact Test做检验。富集分析先根据生物学知识将基因归类,然后进行基因差异表达分析,提高数据的可解释性。并利用3篇SCI文章的差异基因数据,对本perl脚本进行了对比测试,证明本perl脚本算法正确可靠。     

SELEX法筛选宫颈癌前病变核酸适配子

构建随机ssDNA文库,通过SELEX技术,以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞,以上皮内低级别病变(CIN1)、上皮内高级别病变(CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞,经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库,经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物,为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础,提供新思路。利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化,分析确定50μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为:最佳退火温度为49.5℃,最佳循环数为15个循环;间接不对称PCR的最佳反应条件为:50μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为80∶1,最佳循环数为35个循环。实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库,在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA,并具有良好的重复性,为顺利筛选适配子提供保证。     

小鼠SFA DNA片段的克隆

本工作将富集小鼠着丝粒ＤＮＡ克隆于载体ＥＭＢＬ３,得到约２０００个克隆,建立了着丝粒基因文库。从中随机挑取２０个克隆,鉴定其克隆片段平均分子量大小约为１４ｋｂ。     

广西英罗湾红树植物幼苗矿质元素含量初步研究

木榄、秋茄、红海榄、白骨壤和桐花树幼苗是广西英罗湾红树林幼苗库中的主要成分。对这５种幼苗的Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｎａ和Ｃｌ进行了测定,结果表明：（１）Ｃｌ和Ｎａ的含量较高;（２）Ｃｌ和Ｎａ、Ｃｌ和Ｋ以及Ｎ和Ｐ含量之间存在着显著的相关性;（３）Ｎ的富集系数较高。     

木耳菜在4种土壤中对Cs的吸收与转运研究

土壤类型是Cs污染植物修复技术的重要影响因素。采用盆栽试验,将木耳菜分别移栽在紫色土、水稻土、红壤和黄壤土中,待3叶期,分别施加不同浓度的Cs[0、20、40、80、120mg·kg~(-1) CsCl]处理10、20、30d后取样,分析木耳菜在4种土壤中对Cs的吸收与转运差异,探讨不同土壤类型、土壤pH值以及速效钾含量对木耳菜富集Cs的影响机制。结果显示:(1)不同土壤类型中木耳菜的Cs含量均与Cs施加浓度和处理时间呈显著正相关关系,植物各器官间Cs积累量大小依次为根叶茎,表明木耳菜的根、茎、叶在不同类型土壤中均能积累Cs,随着处理时间的延长,其吸收量随Cs施加浓度的增大而增加,但以根部的富集能力最强、积累量最大。(2)在不同土壤类型中和不同处理时间段,木耳菜对Cs的富集系数和转运系数均存在显著差异,其富集与转运能力随着Cs施加浓度的增大以及处理时间的延长表现为先增后减,其地下部分富集系数显著高于地上部分,且黄壤土中木耳菜对Cs的富集能力明显高于其它3种土壤。(3)土壤中的钾含量和pH值影响木耳菜对Cs的吸收和富集,与紫色土、水稻土和红壤相比,黄壤土中的速效钾含量较低,pH适中,在不同处理时间段,木耳菜在黄壤土中对Cs的富集效率都最高,表明土壤中低含量的速效钾以及适中的pH值更利于木耳菜对Cs的吸收。     

东北森林两种典型阔叶树种子和幼苗对15N同位素的富集响应

以东北森林两种典型的阔叶树种风力传播种子——花曲柳和色木槭种子为研究对象,通过室内¹⁵N尿素浸泡试验和温室盆栽试验,设置4个浓度(0、0.05、0.1和0.2 g·L^-1)、3个浸泡时间(4、8和12 d)与4个叶期(2、4、6和8叶)处理,研究种子浸泡浓度、浸泡时间和幼苗叶期对种子和幼苗¹⁵N富集的影响.结果表明: 浸泡浓度和浸泡时间对两树种种子δ¹⁵N值均有显著的正反馈作用,高浓度和长时间(0.2 g·L^-1+12 d)更有利于种子¹⁵N总量的富集,花曲柳和色木槭种子¹⁵N同位素最大富集倍数的浸泡浓度和浸泡时间组合分别为0.1 g·L^-1+(4、8 d)和0.05 g·L^-1+(4、8 d);δ¹⁵N值稀释率随幼苗株高的增加先急剧减少(2~6叶)后趋于稳定,幼苗从8叶开始叶片¹⁵N总量降低,表明6叶幼苗更适合追踪幼苗的来源;幼苗叶片δ¹⁵N值与种子浸泡浓度、浸泡时间和种子的δ¹⁵N值呈显著正相关.花曲柳和色木槭种子及幼苗均能成功富集到¹⁵N信号,采用0.1 g·L^-1+8 d+6叶组合最适合追踪花曲柳和色木槭种子和幼苗.     

卤虫(AC)_n和(AG)_n微卫星文库构建

卤虫Artemia作为重要的基础实验材料和经济动物资源,其微卫星位点具有重要的研究和应用价值。本研究使用磁珠富集法,成功构建了卤虫的(AC)_n和(AG)_n微卫星富集文库。通过对文库进行PCR方法鉴定和测序确认,所构建的(AC)_n和(AG)_n文库阳性克隆率分别为55.8%和34.5%。依据得到的微卫星序列,设计并合成了63对微卫星引物,随机以2个地理单元(青海、西藏)共18个卤虫基因组DNA为扩增模板,筛选出6对具有多态性的卤虫微卫星引物。本研究筛选出的微卫星多态位点可用于卤虫种群的遗传多样性评估、遗传图谱的构建和数量性状定位等后续工作。