I型内含子核酶的研究进展

核酶具有特异识别和切割靶RNA的特点,从而可以抑制一些特异基因产物的表达,而I型内含子核酶,不但具有剪切功能,而且可以进行顺式剪接及反式剪接。随着人们对I型内含子核酶的功能结构也有了进一步认识,相继用I型内含子核酶对p53突变mRNA及镰形红细胞贫血等遗传性疾病致病基因mRNA的修复做了大量的研究,并取得了一定的成果。     

乙肝病毒MHBst/HBx蛋白对Galβ1,3GalNAcα2,3-唾液酸转移酶的反式激活作用

PCR方法扩增乙肝病毒MHBs^t,HBx基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-MHBs^t和pcDNA3.1-HBx。PCR方法从肝细胞基因组中扩增出Galβ1,3GalNAcα2,3-唾液酸转移酶（ST3Gall)启动子Psil,用Psial取代pEGFPN1的启动子pCMV构建pEGFP-N1-Psial。利用磷酸钙－DNA共沉淀的方法,将pcDNA3.1-MHBs^t,pcDNA3.1-HBx分别与pEGFP-N1-Psial瞬时共转染至正常肝细胞QGY－7701。流式细胞仪分析细胞平均荧光密度值发现MHBs^t,HBx分别将ST3Gall启动子的活性上调了35．2％和43．8％。研究了乙肝病毒MHBs^t,HBx对ST43Gall的转录调控作用,对于揭示乙肝病毒感染与唾液酸转移酶之间的关系做了非常有益的探索。     

蛋白质芯片的制备及其在检测乙肝病毒中的应用

目的：建立一种用蛋白质芯片检测乙肝病毒抗原,抗体的新方法。方法：采用PVDF膜制备不同的蛋白质芯片,以辣根过氧化物酶标记抗全,结合酶联免疫反应,检测乙肝病毒素面抗原（HBsAg)。表面抗体（HBsAb),乙肝病毒e抗原（HBeAg),e抗体（HBeAb)。结果：所制备的蛋白质芯片可检没到微量乙肝病毒抗原,抗体的存在,其中HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb的最低可检测浓度分别为11μg/ml。4.8μg/ml,2.1μg/ml,18μg/ml,而且两种抗原或两种体间并城镇交叉反应,此法制备芯片需3.5h,而检测过程仅需20min,且结果直接可用肉眼观察。结论：将蛋白质芯片技术应用于乙肝病毒抗原,抗体的检测中,具有微量化,特异性强,快速灵敏,操作简便等优点,可望应用于临床乙肝“两对半”的检测中。     

分泌型乙型肝炎病毒包膜M蛋白在毕赤酵母中的表达

将乙肝病毒包膜中蛋白M基因插入酵母整合型表达质粒pAO818的醇氧化酶 (AOX1)启动子下游 ,构建携带 8拷贝M表达盒的重组载体 ,经电穿孔转化SMD116 8菌株和G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达M蛋白的毕赤酵母菌株 ,表达量超过 5 0mg L .经初步纯化 ,对表达产物的性质鉴定表明 ,重组蛋白具有preS2和S抗原性 ,可以形成颗粒 ,并具有一定程度的糖基化 .所构建的稳定重组菌株和所得到的重组蛋白颗粒 ,为进一步研究新一代的疫苗提供了必要的材料 .     

CART算法在原发性肝癌放疗后HBV再激活的应用

为了建立乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)再激活的预测模型,提出CART(classification and regression tree)特征选择方法应用在原发性肝癌患者精确放疗后HBV再激活的危险因素分析中,进而建立基于CART和Bayes算法的HBV再激活预测模型。实验结果显示:CART算法划分了多组具有优秀分类能力的特征节点集(危险因素),尤其当特征节点集为HBV DNA水平、外放边界、放疗总剂量、V20和KPS评分时,在CART和Bayes预测模型中的分类正确性分别为88.51%和86.69%,得到HBV再激活正确性贡献度的排序为KPS评分全肝平均剂量V20放疗总剂量V10;当甲胎蛋白AFP出现时,增加了HBV再激活的预测正确性。     

马铃薯X病毒载体介导的乙肝病毒表面抗原在烟草中的表达

目的:利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体,在本生烟草中表达乙肝病毒表面抗原(HBsAg),为生产植物疫苗提供一条快速高效的新途径.方法:将HBsAg基因克隆进PVX表达载体,电转化农杆菌,侵染本生烟的叶片、茎和根.结果与结论:采用ELISA检测重组HBsAg的表达水平,SDS-PAGE确认其大小,Western印迹分析表明重组蛋白可与鼠抗HBsAg单克隆抗体发生特异性反应.HBsAg蛋白表达量在幼小叶片中远高于已伸展的叶片,在叶片中的表达量远高于茎根;表达量会随侵染后时间发生一定的变化,但因植株而异;重组蛋白在可溶性蛋白中的含量最高可达796.81 ng/mg.     

慢乙肝ALT变化与HBeAg、HBV DNA阴转的相关性

本文报告乙肝患者的丙氨酸转氨酶（ALT）与HBeAg、HBV DNA转阴的相关性。采用ELISA法将患者血清稀释成10^0－10^5检测HBeAg,同时采用定量PCR检测HBV DNA及赖氏法检测ALT。ALT正常组HBeAg转阴率28％;HBV DNA转阴率26．9％;ALT异常组分为0．3－0．4ukat/L,1.1-2.0ukat/L,二组HBeAg转阴率各为40．7％、66．7％,HBV DNA转阴率各为40．9％、71．4％。研究发现,在同一条件下,同一患者不同的时间HBeAg、HBV DNA滴度及数值有升高、降低变化,说明乙型肝类患者为持续性感染,病毒在周期性复制,ALT的变化与HBeAg、HBV DNA阴转有正相关性,提示慢乙肝患者治疗中应重视提高免疫。     

肝癌组织中HBV核心基因启动子突变的研究

为深入了解乙肝病毒(HBV)致癌机理,用套式PCR对广西14例血清HBV DNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析,发现肝癌组织10例PCR阳性,阳性率71.4%,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列(nt 1 762 A→T, 1 764 G→A),并且在其周围各序列都有不同部位的点突变,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个.乙肝患者6例PCR阳性,其中3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变.无症状携带者中4例PCR阳性,其中仅1例发生双突变.结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见,肝炎患者次之,无症状携带者居最后.     

乙肝病毒携带者外周血单核细胞miR-122表达与病毒增殖的关系研究

乙肝病毒携带者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中微小RNA(microRNA,miR)-122的表达情况及其与病毒增殖的关系,目前鲜有报道。本研究通过检测乙肝病毒携带者PBMC中miR-122的表达情况,探讨其与病毒增殖的关系。选取2017年1月～2018年8月石嘴山中心医院内科门诊的58例乙肝病毒携带者为观察组研究对象,按HBeAg的状态将其分为:HBeAg阳性(+)组31例,HBeAg阴性(-)组27例,同期选择健康体检者32例作为对照组,采用时间分辨荧光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)定量检测乙肝两对半,采用实时定量PCR法检测血清中HBV DNA拷贝数,采用qRT-PCR法检测PBMC中miR-122表达水平,采用Pearson相关性分析分析乙肝病毒携带者PBMC中miR-122水平与血清HBV DNA拷贝数的关系。结果显示,HBeAg(+)组HBV DNA拷贝数显著高于HBeAg(-)组(P0.05);观察组PBMC中miR-122表达水平显著高于对照组(P0.001);HBeAg(+)组外周血单个核细胞miR-122表达水平显著高于HBeAg(-)组(P0.001);乙肝病毒携带者PBMC中miR-122水平与HBV DNA拷贝数呈正相关(r=0.501,P0.001)。本研究中,与HBeAg(-)乙肝病毒携带者相比,HBeAg(+)乙肝病毒携带者病毒复制活跃,HBV DNA拷贝数升高,miR-122表达上调,提示乙肝病毒携带者PBMC中miR-122表达异常可能与病毒增殖有关。     

以串联式乙肝病毒核心颗粒呈递的基于多重保守抗原的甲型流感病毒病毒样粒子候选疫苗

现有的甲型流感病毒(IAV)疫苗是靶向病毒的不同部分,不同季节可能是不一样的。疫苗的设计依赖于预测的优势流感毒株,而当疫苗和流行毒株之间不匹配时功效欠佳。此外,目前方法制得的疫苗对有可能引起大流行病的新兴流感毒株只提供有限的保护。有一种解决方案是设计靶向流感病毒保守的蛋白结构区域的疫苗,这些结构域随着时间的推移基本保持不变,并可能存于在新兴变体中。