自然环境中T-2毒素降解菌的筛选与鉴定

[目的]在自然环境中筛选和鉴定能够降解T-2毒素的菌株.[方法]取对虾养殖池水样、养殖池沉泥样品和对虾混合饲料中分离到的镰孢菌,于GYM产毒培养基中培养14 d后引入自然条件下气载细菌,继续培养至28 d,采用LC-MS/MS检测其中T-2毒素含量.然后结合稀释涂布、平板划线、革兰氏染色、镜检,从镰孢菌产毒培养液中毒素含量明显降低的菌悬液中筛选出T-2毒素降解菌,用16S rRNA分析方法对其进行系统发育分析及菌种鉴定,并验证两菌株的降毒能力与不同基质中二者的联合降毒能力.[结果]以从对虾养殖环境中分离到的5株镰孢菌作为试验菌种,在其产毒培养过程中分离到2株T-2毒素降解菌,16S rRNA鉴定结果分别为弯曲假单胞菌和尼泊尔葡萄球菌,对T-2毒素的降解率分别为90.9％和85.5％,但两者降毒能力并无显著差异(P＞0.05);其联合作用也有较好降毒效果,与两菌株单独作用无显著差异(P＞0.05),不同基质对其联合降毒作用影响不大(P＞0.05).[结论]新的T-2毒素降解菌的发现为进一步探明T-2毒素降解基因和开发T-2毒素生物降解酶提供了研究基础.     

Notch通路与基质金属蛋白酶在软骨肉瘤中的表达及意义

目的 研究软骨肉瘤组织中Notch通路、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及基质金属蛋白酶(MMPs)的表达情况,探讨它们在软骨肉瘤间质浸润中的作用机制.方法 收集正常软骨组织标本10例、内生性软骨瘤标本23例和软骨肉瘤标本32例,分别用免疫组化、Western blot和real-time PCR检测Notch1、Jagged1、MMP-1、MMP-13、p38 MAPK及p-p38 MAPK的表达情况.结果 与正常软骨组织相比,Notch1、Jagged1、MMP-1、MMP-13及p-p38 MAPK在内生性软骨瘤表达部分升高,在软骨肉瘤表达均明显增加(P＜0.01).p38 MAPK在正常软骨组织、内生性软骨瘤及软骨肉瘤组织中表达无明显差异(P＞0.05).结论 Notch通路和p38 MAPK通过调节基质金属蛋白酶在软骨肉瘤中的表达,来增加软骨肉瘤的浸润转移能力.     

融合蛋白M-IL-2(~(88)Arg,~(125)Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究

构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究。经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符。经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性。BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L。CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖。该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础。     

黄芩素抑制人巨细胞病毒感染星形胶质细胞的实验研究

目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirous,HCMV)感染尚无特异有效的治疗和预防手段,研究通过观察黄芩素(baicalein,BAI)抑制HCMV体外感染人星形胶质细胞引起的IE、pp65 mRNA及蛋白表达的变化,探讨黄芩素抗HCMV感染的机制。运用MTT法检测BAI组、HCMV组、HCMV+BAI组和对照组细胞的细胞活性,观察BAI对HCMV感染致人星形胶质细胞增殖异常的抑制作用;Real-time PCR检测不同组之间IE、pp65 mRNA表达的变化;免疫荧光、Western blot技术检测IE、pp65蛋白表达的变化。MTT结果显示,20μmol/L BAI+HCMV组的吸光值在24、48、72 h均高于HCMV组(P0.05);形态学观察病毒感染48 h时,HCMV组细胞出现明显的细胞病变效应(CPE),而20μmol/L BAI+HCMV组细胞状态较好,CPE不明显;Real-time PCR结果显示在感染48和72 h时20μmol/L BAI+HCMV组IE、pp65的mRNA表达明显低于HCMV组(P0.05);免疫荧光、Western blot结果显示20μmol/L BAI+HCMV组细胞的IE、pp65蛋白表达明显低于HCMV组(P0.05)。以上结果显示,适当浓度的黄芩素能抑制HCMV感染所致的细胞增殖异常,同时降低IE及pp65的mRNA和蛋白表达量。     

Ets-1在姜黄素抑制心脏纤维化的表达研究

目的:研究姜黄素的抗增殖作用是否依赖于其对Ets-1表达的下调。方法:使用Ets-1 siRNA对CFs细胞Ets-1基因进行沉默;Real-time PCR和western-blot法测定各组细胞Ets-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果:在mRNA和蛋白水平上,AngⅡ明显增加CFs细胞内Ets-1的表达;使用siRNA技术对Ets-1进行沉默后,随着Ets-1表达的降低及转录调节能力的下降,由AngⅡ诱导的CFs细胞的增殖能力及增殖相关细胞因子分泌减少;姜黄素可以显著降低AngⅡ诱导的Ets-1表达升高,并具有浓度依赖性(P0.05)。说明姜黄素对AngⅡ诱导的CFs增殖的抑制作用可能依赖于其对Ets-1表达的抑制作用。结论:Ets-1 siRNA对Ets-1进行基因沉默后,显示出抗增殖效用;姜黄素能够有效地抑制AngⅡ诱导的CFs细胞Ets-1 mRNA和蛋白的过表达;姜黄素的抗增殖作用可能依赖于其对Ets-1基因的表达下调而得以实现的。     

昆虫的微孢子虫病

介绍了昆虫微孢子虫病的病理学、传播途径、寄主特异性、病害管理以及利用昆虫微孢子虫作为生物杀虫剂的应用等方面的研究进展 ,以期为益虫微孢子虫病害的防治和昆虫微孢子虫杀虫剂的研制提参考。     

PNA的合成及其在基础医学中的应用

PNA是一类以多肽为骨架的核苷酸类似物,它不带电荷,杂交特异性强,能抵抗核酸酶及蛋白酶的降解,因此可作为杂交探针用于疾病诊断,或作为反义试剂进行基因治疗的探索。以下对PNA的合成及其在分子杂交诊断,基因治疗等基础医学领域的广泛用途做一综述。     

HLA分型方法进展

传统的HLA分型方法主要是血清学和细胞学方法,分型准确性较差,且不能进行亚型分析。随着PCR技术及基因芯片技术等分子生物学技术的出现、发展,HLA基因分型得到了迅速的发展,各具特点的HLA分型技术不断出现,使HLA的分型更加准确、精细、简便、实用,为临床推广应用打下了基础。     

感染HCMV的U251干细胞裸鼠大脑移植瘤模型的建立

研究人巨细胞病毒(HCMV)感染的U251干细胞(GSC_S)裸鼠颅内成瘤情况。用单克隆培养法从U251细胞系中分离出GSC_S,采用流式细胞仪检测分离出的GSC_S中CD133的表达,感染HCMV病毒,制备细胞密度为1×10~7个/mL的GSC_S悬液。取20只SPF级BALB/c裸鼠腹部麻醉,固定在立体定位仪上,在裸鼠颅脑钻一小孔,将3μL干细胞悬液缓慢接种于裸鼠颅内,随机分为HCMV感染组和未感染HCMV组。观察HCMV对肿瘤生长及裸鼠存活情况,处死濒死裸鼠取脑组织做免疫组化检测HCMV感染组胶质瘤内IE蛋白是否持续表达及HCMV感染对胶质瘤干细胞分化为血管的影响。结果显示,经单克隆法分选出的GSC_S在无血清培养基中成球生长;经流式细胞仪检测,分离出的GSC_S中CD133比例为98.00%;裸鼠脑内出现膨胀性生长的肿瘤;HCMV感染组肿瘤组织中检测到IE高表达,HCMV感染可促进CD133阳性胶质瘤干细胞分化为CD34阳性血管内皮细胞。以上结果表明,HCMV的IE蛋白能在通过此方法建立的HCMV阳性移植瘤中持续表达,且HCMV能促进GSC_S分化为血管内皮细胞。     

胃癌患者肠道菌群的分布特点分析

目的应用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)基因指纹图谱技术,检测胃癌患者肠道菌群的变化情况,探讨肠道菌群与胃癌发生发展的关系。方法选取7例符合临床诊断标准的胃癌患者和相同年龄段的3例健康者的粪便标本,提取粪便总DNA。通过PCR-DGGE技术获得菌群指纹图谱,进行相似性、多样性分析。结果胃癌患者肠道菌群与健康对照组相比,其肠道菌群构成发生显著性变化。其中,条件致病菌唾液乳杆菌、唾液链球菌、大肠埃希菌数量均增加。益生菌直肠真杆菌、Dorea longicatena、柔嫩梭菌群数量均较少。结论胃癌患者肠道菌群的多样性和构成与健康对照相比发生了显著变化,该特点对于胃癌的预测提供了实验依据。