葡萄糖酸钙对L-组氨酸发酵的影响及条件优化

目的：提高L-组氨酸的产量并且得出最佳发酵条件。方法：在L-组氨酸的摇瓶发酵实验中,加入20g/L的葡萄糖酸钙,对发酵条件进行优化。结果：L-组氨酸的产量大幅度提高,产酸量由3.00g/L提高到7.50g/L。条件优化后L-组氨酸的产量提高到9.30g/L。结论：发酵培养基中20g/L的葡萄糖酸钙的加入能够诱导葡萄糖酸激酶生成,大幅度提高其比活,增大磷酸戊糖（HMP）途径的通量。有利于L-组氨酸的合成、菌体的生长。     

利用Design-Expert软件优化丝氨酸羟甲基转移酶产酶培养基

利用Design-Expert软件中水平设计和响应面分析法对产酶基本培养基主要成分进行了优化,经过逐步回归分析建立了丝氨酸羟叫基转移酶（SHMT）活力对培养基主要成分的二次回归模型,其回归方程的决定系数达到了0．9984。得到的最佳培养琏主要组成为：葡萄糖29．5g／L、硫酸铵18．1g/L、玉米浆3．79g／L。SHMT活力最高达到113．7U／ml,比优化前（77U／mL）提高了47．7%。优化后的酶液经酶促反应50h,能催化产生10g／L的L-丝氨酸,比优化前（6g／L）提高66．7％。     

L-肌肽的合成研究

阐述了以β-丙氨酸及L-组氨酸为起始原料合成L-肌肽的合成工艺,并提出改进的工艺路线。该路线总收率在90%以上,质量分数高达99.5%以上,是低成本,高收率的合成方法,满足人们医疗保健要求。     

不同碳源生物转化合成L-亮氨酸的代谢计量分析

目的:建立黄色短杆菌利用不同碳源生物合成L-亮氨酸的代谢网络模型,并进行代谢网络计量分析.方法:通过对所构建的L-亮氨酸代谢网络模型进行途径分析,确定以果糖、葡萄糖、蔗糖或木糖为碳源时L-亮氨酸生物合成的基元模型、最大理论产率和不同模型的呼吸熵.结果:通过途径分析得到了L-亮氨酸生物合成的基元模型.以果糖、葡萄糖、蔗糖和木糖为碳源时L-亮氨酸的最大理论产率均为66.7%,其对应的最大呼吸熵分别为18、16、19、18.结论:L-亮氨酸理论得率与碳源种类无关;呼吸熵增加,能够有效提高L-亮氨酸合成代谢流,限制菌体量的过量生成.与其他碳源相比,蔗糖能够避免碳架溢流出现,合成L-亮氨酸能量代谢需求低;而葡萄糖能够较好地满足菌体生长和产酸的需求.     

磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的表达

应用 PCR技术从 Escherichia coli K12 Sgal- (ExPASy P23830) 中扩增到大小为 1350bp编码磷脂酰丝氨酸合成酶的 DNA片段,将其插入枯草芽孢杆菌诱导型表达载体 pBES,获得重组质粒 pBES-pss后转化 Bacillus subtilis DB104。经蔗糖诱导后,该磷脂酰丝氨酸合成酶在 Bacillus subtilis DB104 (pBES-pss)中获得胞外分泌表达,SDS-PAGE分析发现目的蛋白分子量约为 52kDa,酶联比色法检测酶活力为 1.50U/mL,提高了磷脂酰丝氨酸合成酶的表达产量,为工业化发酵生产磷脂酰丝氨酸合成酶奠定了良好的基础。     

从发酵液中萃取L-乳酸的工艺

以L-乳酸发酵液为对象,以正丁醇为萃取剂,在pH为2、温度为25℃、n（乳酸）：n（正丁醇）=1：1、乳酸在发酵液中的质量分数为30％时,经3次萃取后,最终的萃取率可达到75．7％。萃取完成后,不需要将乳酸进行反萃,可将所得到的正丁醇-乳酸的混合体系作为底物进行酯化反应,生成乳酸丁酯,从而避开提取纯乳酸的高操作要求。     

The biochemical basis of antimicrobial responses in Manduca sexta

Innate immunity is essential for the wellbeing of vertebrates and invertebrates. Key components of this defense system include pattern recognition receptors that bind to infectious agents, extra-and intra-cellular proteins that relay signals, as well as molecules and cells that eliminate pathogens. We have been studying the defense mechanisms in a biochemical model insect, Manduca sexta. In this insect, hemolin, peptidoglycan recognition proteins, β-1,3-glucan recognition proteins and C-type lectins detect microbial surface molecules and induce immune responses such as phagocytosis, nodulation, encapsulation, melanization and production of antimicrobial peptides. Some of these responses are mediated by extracellular serine proteinase pathways. The proteolytic activation of prophenoloxidase （proPO） yields active phenoloxidase （PO） which catalyzes the formation of quinones and melanin for wound healing and microbe killing. M. sexta hemolymph proteinase 14 （HP 14） precursor interacts with peptidoglycan or β-1,3-glucan, autoactivates, and leads to the activation of other HPs including HP21 and proPO-activating proteinases （PAPs）. PAP-1, -2 and -3 cut proPO to generate active PO in the presence of two serine proteinase homologs. Inhibition of the proteinases by serpins and association of the proteinase homologs with bacteria ensure a localized defense reaction. M. sexta HP1, HP6, HP8, HP17 and other proteinases may also participate in proPO activation or processing of spatzle and plasmatocyte spreading peptide.     

山豆根化学成分研究

利用多种柱层析方法,从山豆根中分得5个化合物。经过理化及波谱分析,分别鉴定为L-广高丽槐素(1)、红车轴草苷(2)、槲皮素(3)、芦丁(4)和异鼠李素-3-芸香糖甙(5)。其中化合物3,5为首次从该植物中分离得到。关键词：山豆根;L-高丽槐素;红车轴草苷;槲皮素;芦丁;异鼠李素-3-芸香糖甙     

乳杆菌Lactobacillus sp.lxp发酵高产L-乳酸研究

筛选得到一株乳杆菌Laetobaeillus sp．,进行发酵生产高浓度L-乳酸的研究。考察了种龄、接种量、温度和不同pH调节剂对乳酸发酵的影响。结果表明：最佳种子培养时间为15h;最佳接种量为15％;最适培养温度为42℃;与氨水和氢氧化钠相比,碳酸钙更适于作为发酵过程的pH调节刺;以葡萄糖为碳源,添加豆粕水解液和玉米浆作为辅料,2L罐培养120h,L-乳酸质量浓度可达202 g/L,糖转化率91．3％,L-乳酸占发酵液中总酸含量98％以上。     

L-谷氨酰胺对PC12细胞中grp75的调控作用

条件必需氨基酸谷胺酰胺可上调细胞中热激蛋白(hsp)的表达,为观察谷氨酰胺是否对hsp 家族成员grp75的表达具有调控作用,以PC12细胞为模型用免疫组化、蛋白质印迹法和RT-PCR 等方法检测谷胺酰胺对grp75基因的表达的影响;并以MTT法观察谷氨酰胺对PC12的细胞和grp75低表达的PC12细胞缺糖损伤的保护作用。结果表明谷氨酰胺可以上调grp75的表达,特别是对缺糖细胞的上调作用更显著;但这种上调作用与谷氨酰胺的作用浓度和作用时间并未显示出有明显的关系。MTT检测显示,谷氨酰胺使细胞在缺糖条件下的存活率明显上升;grp75低表达细胞与未转染的细胞相比这种保护效应明显降低,说明谷氨酰胺通过调节grp75的表达对缺糖损伤起到保护作用