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神经营养因子对p75NTR诱导哺乳动物神经细胞凋亡的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究R2L1细胞的凋亡以及神经营养因子对凋亡的影响,方法:形态学观察,细胞活性测定和流式细胞仪分析。结果:R2L1细胞去和因清培养12小时即发生凋亡。24小时后大部分细胞凋亡。48小时后细胞基本上都死亡。结论:NGF、NT-3和抗p75NTR抗体能抑制R2L1细胞在去血清培养后发生的凋亡,而BDNF却无此报制功能。 相似文献
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为确知懒猴高重复顺序与灵长类类α顺序间的相互关系,我们将懒猴DNA经EcoRI酶切所得到的高重复顺序DNA的最小片段重组到质粒pUC~(12)上,经转化、筛选、鉴定得到含有懒猴高重复顺序片段的克隆,命名为pLS(EcoR Ⅰ)-1,测定其全部核苷酸顺序为641bp,发现该顺序有与类α顺序的相似性,但变异性较大,我们对此进行了讨论。 相似文献
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利用逆转录—聚合酶链反应扩增人粒细胞—巨噬细胞集落… 总被引:1,自引:0,他引:1
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利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胚胎组织中提取总RNA,经Oligo(dT)纤维柱分离纯化出mRNA。用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人类胰岛素生长因子Ⅱ(IGFⅡ)的cDNA片段,在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆进PUC12的Sma Ⅰ位点处。经限制性内切酶EcoR Ⅰ、Sal Ⅰ、Eco47Ⅲ酶切鉴定其方向。以重组质粒的双链DNA为模板,用末端终止法测定其全部核苷酸顺序,证实其核苷酸编码的IGFⅡ在氨基酸顺序上与文献报道的相同。 相似文献
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利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总RNA,用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人神经生长因子低亲和力受体p~(75)NGFR基因cDNA,在限制性内切酶SmaⅠ存在下的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆入pUC12的SmaⅠ位或,经限制性内切酶EcoRⅠ和PstⅠ酶切鉴定是否插入以及HindⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的p~(75)NGFR的cDNA再次亚克隆至pUC12载体中后,以其双链DNA为模板,用末端终止法测出其全部核苷酸顺序,证实其核苷酸编码的p~(75)NGFR除两个碱基突变外,其余与文献完全一致。完整的p~(75)NGFR的cDNA分两步克隆到逆转录病毒表达载体pXT-1,经PA317包装细胞株体外包装后、收集病毒上清转染条件不死性大鼠小脑神经细胞系R2.初步结果表明转染了p~(75)NGFR的R2细胞株去除NGF培养时出现程序化死亡的典型特征梯型DNA带。 相似文献
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表皮生长因子治疗兔角膜碱烧伤研究 总被引:4,自引:3,他引:1
本试验制成兔角膜碱烧伤模型,应用重组表皮生长因子(rhEGF)滴眼剂对碱烧伤后的兔角膜溃疡创面进行治疗。63只纯种新西兰白兔分为7组,每组9只,其中5组为治疗组,另2组为对照组,治疗组分别用每毫升0.5,5,20,50和100μg表皮生长因子滴眼剂滴眼,对照组分别用纤维结合蛋白和氯霉素滴眼。伤后24,48,72,96及120h裂隙灯荧光素染色,照像观察溃疡面积,经计算机图像处理,计算。结果显示5组治疗组创面愈合时间明显短于对照组,(P<0.05)。提示EGF对角膜碱烧伤后的溃疡面愈合有促进作用。 相似文献
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在哺乳动物中,位于Y染色体上的指导雄性性别分化的基因被命名为睾丸决定因子(Testis-determining factor,TDF).1990年6月分离获得的SRY基因(Sex-deter-mining region of the Y)被认为是TDF基因最好的侯选者「1-4」,SRY基因为单拷贝,位于Y染色体短臂末端1A1A区,靠近假常染色体配对区(PAPR)的交界处,其部分顺序编码80个保守性 相似文献
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人工合成表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中的高效表达 总被引:5,自引:0,他引:5
选用酵母菌偏爱密码子人工合成了编码51个氨基酸的人表皮生长因子(hEGF)基因.将合成基因与编码酵母α因子前导肽85个氨基酸的DNA片段融合后克隆到醇氧化酶基因启动子下游,并构建出多拷贝表达载体.此载体转化甲基营养型酵母株GS115后筛选出整合型MutSHis+基因型菌株.高密度培养及诱导表达后该株可分泌具完好生物活性和正确物理化学性质的人表皮生长因子,产量达100mg/L,经3次柱层析纯度达95%以上,为观察其生物学作用打下了良好基础 相似文献
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转染了P75NGFR的R2神经细胞系R2L1在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生.此凋亡可以被RNA合成抑制剂放线菌素D和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制.利用DDRT-PCR技术比较了去血清培养的发生凋亡的R2L1细胞与有血清培养的不发生凋亡的R2L1细胞以及去血清培养的不发生凋亡的R2P细胞基因表达的差异.克隆了数个特异或差异表达的短cDNA片段,经Northern杂交证实其中两个片段LIAREST-1和LIAREST-2表达量在凋亡细胞中显著高于不发生凋亡的细胞中,GenBank检索表明此二片段为新的cDNA序列并给予登录号U47315和U47316.另有一个cDNA片段LIARCD-3在凋亡细胞中受到了明显的抑制,经检索为一已知的与前强啡肽原上游调控区结合的DNA结合蛋白cDNA编码区的一部分,首次被证实它与P75NGFR诱导的神经细胞凋亡调控关联 相似文献