日本结缕草总RNA提取和mRNA分离方法的优化

介绍了分别以日本结缕草根部、叶部、匍匐茎等为材料的总RNA提取的改良步骤,质量和浓度检测及其注意事项,并采用Promega公司的Poly ATract Systems Ⅲ(Z5300)试剂盒进行mRNA分离,尽管这一方法成熟可行,但仍存在洗脱体积较大,常需先沉淀浓缩后才能进行后续试验(如cDNA合成),在制备少量mRNA时回收率较低等问题。据此,对mRNA分离方法作了改良,介绍了mRNA分离的优化步骤,通过增加体系形成了一种更适合于日本结缕草mRNA分离的方法,从而为日本结缕草的分子生物学研究提供基础资料。结果证明所提取的总RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到日本结缕草cD-NA文库的构建。     

结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定

以结缕草基因组DNA为模板,根据已报道Rd29A启动子序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Rd29A启动子的基因片段,通过序列分析与文献报道的基因序列有41.65％的同源性.在GenBank上的登录号为EU346948.利用GFP基因作为报告基因,构建了用于比较鉴定所克隆启动子活性的pBIG (35S-GFP)和pBIRG (Rd29A-GFP)两个植物表达载体,进而采用基因枪法对洋葱表皮细胞进行遗传转化,检测Rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性.结果表明,克隆到的Rd29A启动子活性强于组成型的35S启动子,利用GFP瞬时表达的分析方法有效的筛选到用于进行草坪草抗逆育种的启动子.     

分子标记及其在植物空间诱变育种研究中的应用

简述了分子标记RFLP、RAPD、SSR和AFLP的原理和特点以及空间飞行对植物材料变异的影响因素,并就分子标记技术在植物空间诱变育种研究中的应用进展及前景进行了阐述。     

草地早熟禾悬浮体系的建立及悬浮过程中细胞形态观察

对早熟禾(Mardona)成熟种子灭菌后,接种于MS2 BA0.1诱导培养基,26℃,全黑暗培养诱导胚性愈伤,挑选其中松散的颗粒状胚性愈伤悬浮于MS2 BA0.1液体培养基中,在90~110r/min,26℃黑暗培养下,悬浮培养2个月,建立悬浮体系。在悬浮培养过程中,对细胞形态进行显微观察,发现悬浮培养前期,细胞多为条状、棒状,且大小不一。培养20天后,悬浮培养物开始增殖,2个月后,悬浮体系建立,细胞大小均匀,颜色嫩白。     

高羊茅转基因研究进展

高羊茅为很重要的多年生冷季型草坪草,生物技术在其品种改良中具有很大的应用潜力。本文对高羊茅植株再生体系的建立及遗传转化方面的研究进展进行了综述。同时,对高羊茅转基因研究中存在的问题和前景作了讨论。     

基因枪转化法获得草地早熟禾（Poa pratensis L.）转基因植株

将与植物抗旱耐盐有关的BADH-CMO双基因、CMO单基因、DREB1A单基因三种外源基因通过基因枪法分别轰击草地早熟禾的胚性愈伤组织,经过一系列筛选与再生培养,得到了抗性植株。经过PCR、Southern杂交分析检测,证明BADH-CMO双基因、CMO基因、DREB1A基因已经成功整合到草地早熟禾的植物基因组中。     

不同坡位胡枝子光合特性及其影响因子研究

采用Li-6400光合分析仪,在自然条件下对不同坡位胡枝子叶片净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)及其相关环境因子的日进程进行了观测。结果表明:在5月份晴天条件下,不同坡位胡枝子叶片Pn、Tr日变化均呈单峰曲线,而水分利用效率(WUE)表现出早晚高、中午低的变化趋势。它们的叶片Pn峰值不同坡位均出现在11:00,而且上坡位峰值和日平均值略高于下坡位和平地(P>0.05);Tr峰值上坡位出现在11:00,下坡位和平地均出现在13:00,且上坡位峰值和日平均值显著低于下坡位和平地(P<0.01);上坡和平地WUE均在15:00达到最大值,但下坡位推迟到17:00,而且上坡位峰值和日平均值略高于下坡和平地(P>0.05)。胡枝子叶片Pn与PAR、Ca、RH等生态因子间的拟合方程分别为:Y上pn=-26.148 0.002 3xPAR 0.11xCa-0.84xRH,Y平pn=-19.148 0.001 9xPAR 0.106xCa 0.86xRH,Y下pn=-27.148 0.002xPAR-1.16xRH,其主要生态影响因子及其大小顺序为XPAR>XRH>XCa。研究发现,不同坡位胡枝子叶片主要光合指标日变化趋势相似,但其峰值出现时间和高低有别,其主要生态影响因子为光合有效辐射、大气相对湿度和大气二氧化碳浓度。     

草坪草总RNA几种提取方法的比较

分别采用DEPC水法、TRIzol法、CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法以及异硫氰酸胍法等6种方法提取草坪草总RNA,通过检测对各种方法的提取效果进行比较分析。结果表明,DEPC水法是最经济、操作最简单的一种方法,并且提取的RNA质量较好、可靠性高、易于大量制备,是提取草坪草RNA比较理想的方法之一,建议使用该方法。利用TRIzol法提取到的28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,效果较好,操作简单,符合分子生物学实验要求。CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法也获得较高质量的RNA,但存在不同程度的DNA污染。异硫氰酸胍法提取RNA有明显的蛋白质污染,且RNA部分降解,此种方法不予采用。     

不同人工灌木与草混播群落中4种灌木根系分布的研究

通过对3种人工群落中4种优良水土保持灌木荆条、柠条、胡枝子、紫穗槐的根系分布的研究,分析和探讨这4种灌木在不同群落中根系生物量分布,地上、地下生物量相关性及有效根密度的差异.结果表明:(1)紫穗槐在不同人工群落中的地下生物量相对稳定;(2)群落Ⅰ(胡枝子80/柠条80 紫穗槐30/荆条20 苇状羊茅150/百脉根100)的植物配置灌木根系生物量最大;(3)4种灌木地上、地下生物量有较强的相关性,地上生物量均随地下生物量的增加而提高;群落Ⅰ有效根密度总和远大于群落Ⅱ、Ⅲ.可见,紫穗槐具有良好的混播性能,群落Ⅰ的植物配置模式相对合理.     

植物细胞悬浮培养影响因子研究

植物细胞悬浮培养已广泛应用于育种和生产次生代谢产物,在生物工程中发挥着重要作用。本文综述了愈伤组织继代改良的措施,影响胚性悬浮细胞系建立的几个因素,存在问题及前景展望。