PCR构建融合基因方法的建立

以聚合酶链式反应为基础的片段拼接技术——融合PCR技术是一种新的基因片段融合技术。以含有马铃薯块茎两种淀粉合成关键酶ssⅡ和ssⅢ基因为模板,利用融合PCR对其进行融合拼接,初步建立以PCR产物(不回收)及一步PCR法融合基因的构建方法,并对融合基因构建时PCR产物(不回收)的使用量及一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度等条件进行优化。结果表明,以不回收的PCR产物为模板构建融合基因时PCR产物(不回收)的使用量在10-20 ng范围内为佳;一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度在25-1 000 nmol/L为宜。     

龙眼新品种(系)引种南宁的生长与开花结果特性比较

‘宝石1号''‘晚香''和‘福晚8号''是2017年从福建省农业科学院果树研究所引进到广西南宁市的龙眼新品种(系)。为研究其在本地的生长发育和开花结果规律,该文以广西主栽品种‘石硖''和‘桂明1号''为对照材料,研究其树体生长发育情况、产量、物候期、开花和落花落果规律及雌花开放数与温湿度的关系。结果表明:引进的3个龙眼新品种(系)高接后的植株长势和产量与‘石硖''相近,‘宝石1号''的单穗重最重,其次是‘福晚8号'',‘晚香''与2个主栽品种相近; ‘福晚8号''的果实成熟期最晚,生育期最长,达196 d,比‘桂明1号''长15 d。‘宝石1号''的花期最长,‘晚香''的最短,3个新品种(系)的雌雄花开放顺序均为“雄-雌-雄-雌-雄”,‘宝石1号''和‘福晚8号''的雌雄花相遇时间较长,为18～19 d; 3个龙眼新品种(系)在南宁均有3次落果高峰期,落果主要集中在6月份的第二次生理落果期。3个龙眼新品种(系)的雌花开放数与花前温湿度的关系密切,花期前后一定的温湿度范围内,较高的温度和较低的空气湿度有利于‘宝石1号''和‘福晚8号''的雌花开放,而较低的温度和较高的空气湿度有利于‘晚香''的雌花开放。综上结果表明,3个引进的福建龙眼新品种(系)在广西均能正常开花结果且表现较好,‘宝石1号''较早熟,‘福晚8号''成熟期最晚、雌雄花相遇时间长且落果率较低。     

EV-A71病毒3D聚合酶突变体的可溶性高效表达纯化及热稳定性分析

RNA依赖的RNA聚合酶是EV-A71病毒进行药物设计的药物靶点蛋白之一,本研究通过已知小核糖核酸病毒科聚合酶同源结构的序列比对,设计了三个针对EV-A71 3D聚合酶,有助于提高核苷酸类似物药物结合效率的突变体,以实验室原有野生型EV-A71 3D聚合酶质粒为模板,通过PCR扩增、野生型质粒的消化分解及转化的方式,构建突变体质粒的阳性克隆,并转化入大肠杆菌3016感受态细胞,通过低温过夜诱导,超声破碎富集的菌泥,将上清经过Ni柱亲和纯化、High trap Q离子交换层析纯化及Superdex 200 10/300凝胶过滤层析三个步骤的梯度纯化,获得了高纯度高产量的EV-A71 3D聚合酶突变体重组蛋白,并通过荧光定量的方法,采用荧光定量PCR仪对最终获得的稳定表达突变体重组蛋白,进行不同溶液条件的荧光热稳定性分析,得到了该重组蛋白最佳的蛋白溶解条件。为深入研究设计以EV-A71 3D作为药物靶点进行核苷酸类似物药物设计提供了技术基础。     

皱纹盘鲍稚鲍剥离后大量死亡的原因和防治方法初探

本文报告了对大连地区皱纹盘鲍（Ｈ．ｄｉｓｃｕｓ）人工育苗过程中,稚鲍剥离后大量死亡现象的初步研究工作。实验表明,稚鲍赖以生存的波纹板上饵料残渣的积累和腐败,微生物的大量繁殖,粘液状物质的形成与稚鲍的死亡密切相关。实验中从病鲍个体及粘液状中分离出了十株优势菌,筛选出了四种有效的杀菌药物,并测出了每种药物的ＭＩＣ值,实验结果在生产实际中应用取得了良好的效果。     

八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及其生化性质

通过盐溶液抽提、硫酸铵分级沉淀、CM 5 2纤维素阳离子交换层析、反相毛细管液相色谱 (re verse phasecapillaryliquidchromatography ,RP CLC)等步骤 ,从八棱丝瓜籽中分离到 2种单链核糖体失活蛋白luffaculin 1和luffaculin 2 .在SDS PAGE和IEF上均显示为单一条带 ,表观分子量均为 2 8kD ,其等电点分别为 8 86 (luffaculin 1)和 9 0 5 (luffaculin 2 ) .实验表明 ,它们具有RNAN 糖苷酶活性 .蛋白质合成抑制活性测试表明 ,它们对蛋白质合成具较强的抑制作用 .体外抑制肿瘤细胞生长活性检测表明 ,luffaculin 1和luffaculin 2对人白血病细胞株K5 6 2有较强的毒性 ,IC50 分别为 1 1×10 -6mol L和 2 0× 10 -7mol L .八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白具有可以用于或构成免疫毒素治疗癌症的应用前景     

一些细菌和真菌的解磷能力及其机理初探

4株细菌和8株真菌培养6天后,发现培养液中有机酸含量大幅度增加,PH大幅度地下降,磷的含量大幅度增加,真菌比细菌表现出更强的溶解磷矿粉的能力,不同的微生物分泌有机酸的数量和种类差别很大,菌分泌的有机酸种类比细菌要多。但是,培养液中有机酸总量与解磷量之间并不存在显的相关性。     

髓周动静脉瘘（PMAVF）一例及文献复习

目的:探讨髓周动静脉瘘(perimedullary arteriovenous fistulas,PMAVF)的临床、影像学特征以及治疗方案的选择,以提高对该病的诊断水平。方法:报道1例PMAVF患者的临床诊治经过,并结合相关文献对PMAVF的临床、影像学特征和治疗方法进行总结。结果:1例表现为进行性下肢麻木伴无力的患者,并逐渐出现大小便失禁,胸腰段MRI示第9胸椎水平附近椎管内髓周血管明显迂曲扩张。行脊髓血管造影检查示右侧胸9肋间动脉发出的脊髓前动脉在胸12椎体水平通过分支供应的异常引流静脉走形于脊柱右侧。予Onyx胶栓塞引流静脉及瘘口,术后一年肌力恢复至4级左右。结论:PMAVF早期临床表现多不具有特异性,后逐渐出现进展性脊髓病变表现。脊髓MRI对提示PMAVF诊断具有重要作用,脊髓血管CTA和ceMRA有助术前判断供血动脉和瘘口位置。脊髓血管造影仍是诊断该病的金标准。手术切除和血管内治疗是治疗该病的主要方法。     

固沙植被区土壤呼吸对反复干湿交替的响应

由降水的不连续性引起的土壤干湿交替是荒漠生态系统土壤呼吸的重要影响因子。在恒温培养条件下,研究了固沙植被区土壤呼吸对不同降雨量(5、10、20 mm)条件下以10 d为降水周期的多重干湿交替过程的响应,结果表明:3个降雨量条件下的多重干湿交替过程中,土壤呼吸速率均在降雨后迅速增大,并在降雨0.5 h后达到最大值,尔后,随着土壤含水量的下降而逐渐减小并恢复到降雨前水平。随着干湿交替过程的依次进行,最大和平均土壤呼吸速率及累积碳释放量均呈现出逐渐减小的趋势。3个干湿循环周期平均呼吸速率和土壤碳释放量均随着降雨量的增加逐渐增大,土壤呼吸速率峰值表现为第1个干湿循环周期土壤呼吸速率峰值随着降雨量的增加而增大,而第2、3个周期各降雨处理下的土壤呼吸速率峰值显示出随着降雨前期土壤含水量的增加而减小的趋势。说明干湿交替过程对土壤呼吸具有显著的激发作用,且干湿交替程度(即降雨前后土壤含水量的变化)以及土壤前期所经历的干湿交替过程是影响荒漠生态系统土壤呼吸对干湿交替响应的重要因素。     

重组葡激酶的高效表达及分离纯化

利用基因重组技术,将葡激酶基因克隆到枯草芽孢杆菌（B.subtilis)中,经过发酵培养,葡激酶被高效表达,并以可溶性活性状态分泌到胞外,本文报道利用SP Sepherose和S－200 Sephacryl二步柱层析来纯化葡激酶,最终纯度在98％以上,得率为50％－60％。     

延迟5分钟剖宫产造全脑缺氧缺血新生大鼠模型

目的建立围产期全脑缺氧缺血性损伤的新生大鼠模型。方法 SD雌性大鼠妊娠21 d时,颈椎脱臼法处死,用止血钳夹闭双侧子宫角血管5 min后,剖宫产取出新生大鼠,交由代乳鼠喂养。结果造模组雌性大鼠9只,共娩出新生大鼠91只,出生3 d内死亡7只,死亡率7.7%。新生大鼠出生第2天进行翻身实验,第14天进行悬吊实验和斜坡实验,造模组和其余各组均有显著性差异。新生大鼠出生后21 d,取脑组织切片行HE染色,显示大脑皮层典型的缺氧缺血性损伤,与正常组相比,可见神经细胞明显的病理形态学改变。结论采用延迟5min剖宫产和代乳鼠喂养的方法,操作简便,并结合行为学测试筛选行为异常者,可建立稳定可靠、可供长期实验使用的围产期全脑缺氧缺血性损伤的新生大鼠模型。