EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用

目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白EGFP及荧光素酶luciferase的真核表达载体p CMVLuciferase-IRES2-EGFP,对肝癌细胞系Hepa1-6转染后进行稳定筛选,并将表达该载体的细胞系应用于小鼠原位肝癌模型构建,以对小鼠肝癌细胞进行稳定标记与活体示踪。方法:对p GL3-Basic质粒进行Xba I酶切、Klenow片段补平黏端、Xho I酶切获得luciferase小片段,与Xho I/Sma I酶切p IRES2-EGFP质粒获得的载体大片段连接,获得重组质粒p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鉴定、测序比对确认序列完全正确后,以重组载体转染Hepa1-6细胞进行稳定筛选,以荧光显微镜观察EGFP表达,报告基因实验与LuminaⅡ成像系统检测荧光素酶活性。确认该细胞系中的质粒得到表达后,以该细胞系进行C57BL/6小鼠肝脏原位接种构建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系统连续活体监测肝癌的生长,取离体的肝癌组织制备石蜡切片(HE染色)和冰冻切片(免疫荧光染色)分别观察离体肿瘤组织病理学特征及其中肝癌细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建表达p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP载体的Hepa1-6细胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以该细胞系成功构建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,实现小鼠肝癌细胞的活体示踪与体外标记。结论:成功构建EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系,且以此细胞系构建的小鼠原位肝癌模型可以同时实现小鼠肝癌生长的连续活体监测与离体组织检测。     

小胶质细胞的培养及鉴定

目的:获得高纯度培养原代小胶质细胞的方法并检测Notch信号通路相关分子在小胶质细胞的表达情况。方法:取胎鼠利用反复机械振摇纯化分离小胶质细胞;利用流式细胞仪,根据CD11b及MHCII的表达水平对分离的小胶质细胞纯度进行鉴定;利用qPCR及琼脂糖凝胶电泳检测小胶质细胞中Notch通路相关分子的表达情况。结果:利用5只胎鼠采取反复机械振摇的方法可较稳定的获得1.1×106个的小胶质细胞,流式细胞术结果显示细胞纯度高达97.77%,并在小胶质细胞中检测到Notch相关分子的表达。结论:利用胎鼠反复机械振摇法可以获得较高纯度及产量的小胶质细胞,小胶质细胞表达Notch信号通路。     

利用文献精读教学新模式优化遗传学教学

《遗传学》是生命科学相关专业本科阶段最重要的课程之一。近年来,随着生命科学领域研究的不断深入,新知识与新技术也在不断更新。但遗传学的教学模式目前仍以理论讲授为主,这使得抽象的原理难以被学生理解接受,直接影响了教学效果。因此探索新的教学模式尤为必要。2010年以来我校在生物技术专业《微生物遗传学》教学中开展了新教学模式——文献精读,文章从文献精读的前期课程基础,如何选择专业文献,怎样组织教学过程,开展文献精读对学生和教师的意义等方面全面分析了实施情况和应用价值,指出该教学模式体现了“前沿”和“经典”的结合,使书本的知识在实践中具体化,既提高学生的学习效果,激发学习兴趣,又开拓了学生的思路,锻炼其能力。这种教学模式为《遗传学》教学授课不断探索新的模式、在“精准医疗”时代下如何培养兼具临床与科研能力的医疗人才提供新思路。     

秦巴山区儿童FRAXE脆性位点CGG重复多态性分布及与智力的相关性分析

采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术, 并结合测序, 对秦巴山区随机抽样儿童及不同智力水平儿童的FRAXE脆性位点CGG重复序列进行检测。并把所得的CGG重复数与智测成绩(用韦氏儿童智力量表(C-WISC)进行智力测量)做关联分析。结果表明, FRAXE脆性位点CGG重复的等位基因分布范围在不同地域人群中有所差异, 同一地域人群中等位基因频率分布基本一致; 随机抽样儿童的CGG重复多态性与智力没有相关性(r=0.083, P>0.05), 男性和女性的CGG重复多态性分别与儿童智力也无相关性(r男＝0.225, r女＝-0.041, P>0.05); 在智力低下(MR)、边缘和正常儿童中, CGG重复数值之间也没有显著性差异(F=0.195, P>0.05)。因而认为, 秦巴山区儿童FRAXE脆性位点CGG的正常重复多态性(重复数为8-30)与其智力成绩亦无相关性。     

几种细胞因子对小鼠核糖体蛋白L6表达的调控

小鼠的核糖体蛋白RpL6启动子除了具有看家基因启动子的特点外,还含有多种转录因子的识别位点.如GATA序列1,γ干扰素核心序列,α干扰素应答序列2等,提示RpL6的表达可为细胞外因子所诱导.为了证实这一点,分别用促红细胞生成素、γ干扰素和α干扰素处理K562和Jurkat细胞,并用RNA印迹和荧光素酶报告试验检测了RpL6的mRNA水平和启动子活性.RNA印迹结果显示,在上述细胞因子作用下,RpL6的mRNA水平均有所提高.利用荧光素酶报告系统,用含有不同细胞因子识别位点启动子序列的报告质粒转染Jurkat和K562细胞,比较了启动子在细胞因子诱导前后的转录激活活性.结果显示,细胞因子诱导后启动子活性明显升高,且与应答序列的存在与否有直接关系.这些结果表明,细胞因子对RpL6转录的提高,是通过作用于启动子上相应的识别位点提高启动子活性而实现的.     

信号肽捕获系统

细胞外蛋白质和细胞膜表面受体在生物体个体发育、生理功能的发挥及各种病理过程的演进中起着重要作用。信号肽捕获系统是基于信号肽学说建立起来的一种功能性基因克隆方法,该方法可以专一性地克隆编码分泌型蛋白质以及Ⅰ型、Ⅱ型跨膜蛋白质分子的编码基因。本文对已发表的信号肽捕获系统及其工作原理、设计思路作一介绍。     

LIM蛋白KyoT在小鼠胚胎发育中的表达

LIM结构域蛋白KyoT可与转录因子RBP-J相互作用而修饰Notch信号途径.以往发现KyoT在成年小鼠肺脏、肾脏和睾丸中有特异性表达,为进一步明确KyoT在小鼠胚胎阶段的表达,故分析了KyoT在小鼠不同胚胎阶段的表达水平变化和胚胎17天时各组织的表达分布.采用RNA印迹发现KyoT在小鼠胚胎的各阶段均表达,而且胚胎17天时表达水平最高.进一步RNA印迹和免疫组织化学检测发现,KyoT mRNA和蛋白质在胚胎17天小鼠的肺、肾以及肌肉中均有高水平的表达.上述结果提示,KyoT在小鼠胚胎发育过程中有特异性表达,且在胚胎17天时KyoT表达器官分布与成年小鼠相似,特异性定位于肺、肾和肌肉等脏器.     

小胶质细胞在帕金森病病理进展中的作用

帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病,研究表明小胶质细胞的活化及其介导的神经炎症在帕金森病的病程进展中发挥重要作用,适度干预小胶质细胞的活化有望延缓帕金森病的进程。小胶质细胞是中枢神经系统固有的巨噬细胞,Notch信号途径可以调控小鼠外周巨噬细胞的分化及功能。Notch通路也参与调控小胶质细胞的激活、细胞因子的表达、吞噬活性的变化等,而这与活化的小胶质细胞介导的帕金森病等神经退行性疾病的病情进展相关。因此,本文将综述Notch信号途径与小胶质细胞介导的相关疾病的研究进展。     

PAQR 膜蛋白家族研究进展

孕激素和脂联素分子受体家族(PAQRs)是一类不同于G蛋白耦联受体家族的7次跨膜蛋白家族,目前发现该家族在人类具有11个成员。这类蛋白的结构类似于细菌的溶血素蛋白III,跨膜区域完全由一个高度保守的PFAM-UPF0073结构域构成。对该家族成员的生理功能研究发现,PAQR1,PAQR2具有维持代谢稳态和参与炎症反应的作用。PAQR5,PAQR7,PAQR8对于精子顶体反应,卵细胞的成熟和细胞凋亡有着重要的调节作用。随着对该家族成员分子的深入研究,一方面将更新对其现有生理病理过程的认识,另一方面将更加明确该类蛋白介导的信号转导通路,为相关疾病的治疗提供新的靶点和新的策略。     

细胞内分布克隆--一种新的功能性基因克隆方法

明确蛋白质的细胞内定位对了解蛋白质的功能有很强的提示作用。近年来随着对蛋白质细胞内定位信号和转运机理的深入了解,建立了根据蛋白质分子在细胞内的特殊定位进行快速功能性基因克隆的方法,即细胞内分布克隆,其筛选基因可以是形态学的,也可以是功能上的,利用这些方法克隆了许多定位于特定细胞器但功能未知的蛋白基因,本文对这些方法及其进展进行综述。