| EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用 |
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| 引用本文： | 叶雨辰,赵俊龙,王琳,段娟丽,高春辰,秦鸿雁,窦科峰.EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用[J].中国生物工程杂志,2015,35(5):1-7. |
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| 作者姓名： | 叶雨辰 赵俊龙 王琳 段娟丽 高春辰 秦鸿雁 窦科峰 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学西京医院 西安 710032;
2. 第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室 肿瘤生物学国家重点实验室 西安 710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重大研究计划培育项目(91029731),国家自然科学基金青年科学基金(81100307),国家自然科学基金青年科学基金(81401940),肿瘤生物学国家重点实验室(第四军医大学)开放基金(Cbskl201408)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白EGFP及荧光素酶luciferase的真核表达载体p CMVLuciferase-IRES2-EGFP,对肝癌细胞系Hepa1-6转染后进行稳定筛选,并将表达该载体的细胞系应用于小鼠原位肝癌模型构建,以对小鼠肝癌细胞进行稳定标记与活体示踪。方法:对p GL3-Basic质粒进行Xba I酶切、Klenow片段补平黏端、Xho I酶切获得luciferase小片段,与Xho I/Sma I酶切p IRES2-EGFP质粒获得的载体大片段连接,获得重组质粒p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鉴定、测序比对确认序列完全正确后,以重组载体转染Hepa1-6细胞进行稳定筛选,以荧光显微镜观察EGFP表达,报告基因实验与LuminaⅡ成像系统检测荧光素酶活性。确认该细胞系中的质粒得到表达后,以该细胞系进行C57BL/6小鼠肝脏原位接种构建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系统连续活体监测肝癌的生长,取离体的肝癌组织制备石蜡切片(HE染色)和冰冻切片(免疫荧光染色)分别观察离体肿瘤组织病理学特征及其中肝癌细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建表达p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP载体的Hepa1-6细胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以该细胞系成功构建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,实现小鼠肝癌细胞的活体示踪与体外标记。结论:成功构建EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系,且以此细胞系构建的小鼠原位肝癌模型可以同时实现小鼠肝癌生长的连续活体监测与离体组织检测。
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| 关 键 词： | 肝癌 Hepa1-6 EGFP Luciferase 小鼠 载体 |
| 收稿时间： | 2015-02-13 |
Construction of A Cell Line EGFP-Luc-Hepa1-6 and Its Application in the Mouse Model of the Hepatoma |
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| YE Yu-chen,ZHAO Jun-long,WANG Lin,DUAN Juan-li,GAO Chun-chen,QIN Hong-yan,DOU Ke-feng.Construction of A Cell Line EGFP-Luc-Hepa1-6 and Its Application in the Mouse Model of the Hepatoma[J].China Biotechnology,2015,35(5):1-7. |
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| Authors: | YE Yu-chen ZHAO Jun-long WANG Lin DUAN Juan-li GAO Chun-chen QIN Hong-yan DOU Ke-feng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatoma Hepa1-6 EGFP Luciferase Mouse Vector |
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