利用水稻启动子捕获系筛选水稻胚发育相关基因的初步研究

通过对2227个启动子捕获系中报道基因β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,gus)表达活性检测,筛选到7个水稻胚中表达GUS活性的启动子捕获系,对其中编号为W9154的捕获系作了进一步分析。Southern杂交分析表明W9154是一个单拷贝T-DNA插入系,其T-DNA插入在水稻基因组第3号染色体上一个未知蛋白基因的第2个内含子中。对该未知蛋白基因上游调控序列生物信息学分析显示,其调控序列除含有TATA-box和CAAT-box等常见启动子元件外,还含有RY基序、E盒、G盒及AACA等种子特异性启动子的特征性元件。表达特征分析发现,编码上述未知蛋白的基因在野生型水稻的胚和茎中表达,这与捕获系W9154中GUS表达活性完全一致。这些表明启动子捕获系w9154捕获的候选基因可能是一个水稻胚发育相关基因。     

肉穗草的组织培养与快速繁殖

1植物名称肉穗草(Sar-copyramis nepalensis Wall),又名风柜斗草、褚头红. 2材料类别顶芽和带节的嫩茎段. 3培养条件培养基:(1)MS 6-BA 0.5 mg·L-1(单位下同) NAA0.1;(2)MS 6-BA 2.0 NAA 0.2;(3)MS 6-BA 0.5 NAA 1.0;(4)MS NAA 0.1 IBA 0.1 KT 0.1 GA 0.1 活性碳1%.以上培养基均加入3.0%～2.5%的白糖和7.0%的琼脂,在pH 5.8下固体培养.培养温度为(25±2)℃,光照时间12 h·d-1,光照度1 500 lx左右.     

几条水稻MAR序列的克隆及其功能分析

利用水稻基因组数据库和MAR预测技术,快速筛选和克隆到10条水稻MAR序列。将其分别构建到转基因结构的两侧并整合到水稻中,分析所克隆的序列对转基因表达的功能效应。结果表明:其中的3条序列具有MAR序列的功能,能明显地提高外源转基因的表达水平和表达稳定性,转基因的表达水平平均提高约2~19倍,最高可达28.9倍。     

太子参细胞悬浮培养及其皂苷含量分析

以太子参的幼叶为外植体,诱导培养获得太子参愈伤组织,并通过细胞悬浮培养获取皂苷.结果表明：用MS＋BA 0.2 mg L^-1＋2,4-D 1.0 mg L^-1＋KT 1.0 mgL^-1液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞.由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同,但纯度较好.细胞悬浮培养约30 d时,每克干重细胞的培养液内可提取总皂苷量为2.13-2.92 mg,略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量（3.6-4.3 mg）,与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近.     

利用RNA干扰抑制细丝蛋白A基因的表达

目的：构建细丝蛋白A（FLNa）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体,并观察其对FLNa基因表达的抑制作用。方法：利用RNA干扰（RNAi）技术设计并合成1条针对FLNa的siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer4．1-CMV-hygro中;将重组质粒pSilencer-FLNa、pSilencer-negative（阴性对照）转染293T人胚肾细胞,通过Western印迹检测FLNa的表达;通过潮霉素筛选建立干扰FLNa表达的前列腺癌细胞。结果：PCR鉴定证明构建了FLNa基因RNAi载体;Western印迹表明构建的FLNa基因干扰载体能够有效地抑制FLNa基因的表达;建立了稳定干扰FLNa表达的前列腺癌C4-2细胞。结论：构建了FLNa基因RNAi载体,该载体能够有效地抑制FLNa基因的表达。     

CP4- EPSPS转基因蛋白的适体筛选与亲和性分析

目的:通过筛选获得CP4 - EPSPS转基因蛋白的最优适体,为应用于检测作准备.方法:体外合成长度为78个碱基的随机ssDNA文库,应用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以CP4 - EPSPS转基因蛋白为靶目标进行15轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,用DNAMAN软件对每个适体的保守序列和二级结构进行分析并应用生物素-抗地高辛碱性磷酸酶显色系统进行亲和性分析.结果:成功获得靶目标的最优适体,即D04号适体,结合率最高(2.2745)为最低的5.9倍.结论:筛选流程合理、可行,实验结果较理想.     

前列腺癌鼠模型

前列腺癌鼠模型是研究前列腺癌的重要工具,目前常见以下4类：自发和诱发鼠模型,异种移植鼠模型,转基因鼠模型和基因敲除鼠模型。简要综述了前列腺癌鼠模型的研究进展。     

Gibberella fujikuroi侵染果蔗叶片病程相关蛋白编码基因的表达分析

利用实时荧光定量RT-PCR,用梢腐病病原菌(Gibberella fujikuroi)侵染不同果蔗品种叶片,对病程相关蛋白编码基因SoSOD、SoCHIT、SoPOD与SoTPS6P的转录水平进行了分析。结果表明,果蔗的SoSOD、SoCHIT、SoPOD与SoTPS6P受到梢腐病病原菌的诱导表达,丰城紫皮、白鳝、福安与拔地拉果蔗叶片中它们的表达量较高,而在温岭、宁德与歪干担叶片中的表达量较低。这说明这些病程相关蛋白编码基因表达水平与不同果蔗品种的梢腐病抗病性存在一定的关联。     

三浅裂野牵牛NBS类抗病基因同源序列的克隆与分析

NBS类植物抗病基因保守结构域的克隆为利用简并引物扩增抗病基因同源序列提供了可能.根据抗病基因Gro1-4、Gpa2、N等的P-loop和GLPL保守结构域设计简并引物,分离甘薯近缘野生种三浅裂野牵牛NBS类型抗病基因同源序列,共获得6条相关序列,核苷酸序列的相似性为48%~97%,推测氨基酸序列的相似性在25.2%~95.1%之间.系统进化分析表明,6条三浅裂野牵牛RGA序列可分为2个不同的类群:TIR-NBS和non-TIR-NBS.三浅裂野牵牛RGA序列与源自甘薯的RGA序列有很高的相似性,这在一定程度上反映了三浅裂野牵牛与甘薯之间的亲缘关系.分离的6条RGA序列分别命名为ItRGA1~ItRGA6,GenBank登录号分别为DQ849027~DQ849032.     

高光效基因植物表达载体的构建

通过一系列中间载体的构建 ,将来自C4作物 (甘蔗 )光合作用中的关键酶基因 (高光效基因 )RbcS和PEPCase基因插入到植物表达质粒中 ,获得了具有卡那霉素抗性的RbcS植物表达载体 pC2 0SNR和具有PPT除草剂抗性的PEPCase基因的正义 (pC30SNP)和反义 (pC30SNPr)植物表达载体。再将这 3个载体分别转入农杆菌LBA4 4 0 4和A2 81或EHA10 5中 ,获得了适于C3 植物转化的农杆菌重组工程菌株。为进一步利用C4植物高光效基因转化C3 植物 ,以期提高光合效率提供基础。