茶树硝酸盐转运蛋白基因的克隆和表达分析

硝酸盐转运蛋白（NRT）是植物吸收和利用硝态氮的一种关键蛋白。运用RACE技术从茶树中扩增出NRT基因的cDNA,并利用实时荧光定量PCR检测了CsNRT基因在不同茶树器官与品种之间的差异表达。结果表明：CsNRT基因的cDNA全长2 061 bp,开放阅读框为1 818 bp,编码含由605个氨基酸组成的蛋白质,GenBank登录号为KJ160503,属于NRT2基因家族。CsNRT为组成型基因,对不同处理的水培茶苗进行定量表达分析显示,该基因在根、茎、叶中都有表达,其中在根部的表达水平最高,1.0 mmol·L-1的NO3-可诱导其表达量上升7.53倍。不同茶树品种中CsNRT基因的表达也有较大差异,‘龙井长叶’和‘凫早2号’的表达量较高,前者强烈响应0.5和1.0 mmol·L-1 NO3-的诱导,后者的响应浓度为1.0和2.0mmol·L-1,而‘舒茶早’在各浓度下的表达差异不明显。     

5’端非翻译区对LT—B基因表达的影响

RNA 5’端非翻译区的不同结构可影响基因表达,为了改善编码人毒素源性大肠杆菌热敏感肠毒素B亚单位的LT—B基因的表达水平,我们把该基因置于pBV220载体的PRPL串联启动子下游,构建了带有不同核苷酸组成的5’端非翻译区的重组体。这些重组体分别在大肠杆菌Hblol和DH5a中表达。结果表明,起始密码前有两个连续串联SD序列的LT—B基因的表达水平低于只有单个SD序列下的表达水平,而翻译偶联可使表达改善;用不同的SD序列LT—B基因的表达水平也有所不同,用基因本身sD序列可能要比用pBV220 PL启动于下游的SD序列好;在只含单个LT－B基因SD序列的重组体中,5’端非翻译区序列的长短对LT—B基因表达没有什么影响;重组体在HB101中的表达水平高于在DH5α中的表达水平。     

鹅圆环病毒浙江永康株全基因组的克隆及序列分析

为研究水禽流感大规模爆发的机理,进行了水禽流感病例中并发病原,特别是免疫抑制性病原的检测研究。根据已发表的鹅圆环病毒(Goosecircovirus,GoCV)序列,设计了一对检测引物,对浙江永康禽流感病死鹅样品进行PCR扩增,获得与预期552bp大小相符的DNA片段,经测序确认为GoCV特异序列,推测样品中存在GoCV。根据测定的序列进一步设计反向扩增引物,经扩增、测序、拼接后获得GoCV全长基因组序列。基因组序列分析表明,浙江永康株GoCV_yk01全长1821bp,具有圆环病毒共同的与病毒复制相关的茎环结构和Rep蛋白保守基序等特征,它与德国、中国台湾发表的序列在全基因组水平有91%～93%的同源性,在Rep和外壳蛋白的氨基酸水平有94%～97%的同源性。应用ClustalW方法作进化树分析显示,GoCV_yk01序列与德国株及中国台湾株均不在同一分支。圆环病毒可以感染淋巴细胞等增殖快的细胞,引起免疫抑制,从而造成其他病原的并发和继发感染,怀疑GoCV可能在2004年初永康爆发的鹅流感中起到了一定的协同作用。该GoCV_yk01是中国内地首次检测确认并测定全基因组序列的鹅圆环病毒。     

紫外线对甲型肝炎病毒灭活机理的研究

自1979年Provost体外培养甲型肝炎病毒（HAV）首获成功以来［1］,有关HAV对多种理化因子抗力的研究不少【’1,但对其具体作用机制,迄今尚未见诸报道。为此,本研究通过观察UV照射对HAVRNA链与衣壳蛋白完整性等的影响,探讨UV对HAV的灭活机理,为灭活HAV的实际应用提供理论基础。材料与方法1病毒与细胞受试毒株为HAVHM－175株,其培养细胞为非洲绿猴肾细胞MEK株,生长液为Engle”s液。生长与维持培养温度分别为37℃和35℃,2病毒灭活试验将纯化HAV悬液均匀涂布于细胞培养板孔内,室温干燥,置照射强度为300pw八mZ紫外灯下6…     

香港苔藓植物新纪录——绒苔科和拟平藓

研究了部分中国科学院华南植物研究所和香港嘉道理农场暨植物园于１９９５年两次联合采集的标本,本文报道了绒苔科和拟平藓属为香港苔藓植物新纪录,分别基于绒苔（广义）和钝叶拟平藓。     

钩吻看家基因筛选及生物碱合成相关酶基因的表达分析

钩吻是我国的一种传统中草药,具有重要的药用价值,萜类吲哚生物碱为其主要的活性组分。为了研究钩吻不同部位最适看家基因,以钩吻4个不同部位根皮、茎段、叶片和花序为材料,通过实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR, qRT-PCR),以及GeNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCT和RefFinder软件对10个候选看家基因(18S、GAPDH、Actin、TUA、TUB、SAND、EF-1α、UBC、UBQ和cdc25)进行表达稳定性评估。结果显示,EF-1α在钩吻的4个部位中均稳定表达,为最适的看家基因。同时,为了研究与生物碱合成相关基因的表达情况,基于“基因组+全长转录组+代谢组”共表达模式筛选出钩吻生物碱合成通路上18个相关基因(AS、AnPRT、PRAI、IGPS、TSA、TSB、TDC、GES、G8H、8-HGO、IS、7-DLS、7-DLGT、7-DLH、LAMT、SLS、STR和SGD),以看家基因EF-1α为参照,利用qRT-PCR技术对这18个候选基因表达情况进行分析,结果发现这些基因的表达量与钩吻素己含量变化呈相...     

辣椒红色素的提取纯化及稳定性研究

以干辣椒为原料,丙酮为提取剂,用索氏提取器回流提取2h,回收溶剂后得到辣椒树脂;用碱溶液洗脱辣椒树脂中辣椒素后,得到含脂肪酸酯的辣椒红色素的粗产品,将其再用碱溶液进行水解后,过氧化铝柱除去水解生成的脂肪酸盐,最后利用硅胶层析柱分离提纯得到色价为605的游离态辣椒红色素;利用红外光谱对提纯得到的辣椒红色素进行分析检测,并对其稳定性进行了研究,发现在相同光照条件下,脱酯后得到的游离态辣椒红色素稳定性比未脱酯的辣椒红色素稳定性差。     

利用钝绥螨为主综合防治柑桔红蜘蛛的研究

在广州地区的柑桔园,柑桔红蜘蛛的天敌有捕食螨、草蛉、食螨瓢虫、塔六点蓟马和蜘蛛类等。其中钝绥螨占60—80%。经过两年的试验证明,以利用钝绥螨为主,少量使用选择性农药和加强田间管理的综合措施,是防治柑桔红蜘蛛行之有效的途径,可长期控制其数量在防治指标以下,化学农药的用量也相应大大减少。 钝绥螨具有发育历期短,嗜食柑桔红蜘蛛,食料范围广,在植株上的分布与猎获物相一致等优良特性,可取得理想的防治效果。钝绥螨对三氯杀螨醇、石硫合剂、西维因、胶体硫、六六六、滴滴涕、巴沙、托布津等化学农药具有不同程度的抗性。 柑桔园的一种杂草——藿香蓟对稳定钝绥螨的种群数量有着重要的作用,它的花粉和在叶上的啮虫的幼虫可作为钝绥螨的食料。     

尿黑酸对拟南芥酪氨酸降解缺陷突变体sscd1的影响

为了了解尿黑酸对拟南芥酪氨酸降解途径的影响,探讨植物中酪氨酸降解途径在长日照下是否被抑制,本研究以拟南芥野生型Col-0和酪氨酸降解途径缺陷突变体sscd1、hgo为实验材料,通过在培养基添加尿黑酸处理,分析长、短日照下尿黑酸对幼苗生长的影响,同时采用q RT-PCR分析尿黑酸对酪氨酸降解途径关键基因HGO、MAAI和SSCD1表达的影响。结果发现:在短日照下,尿黑酸处理能够加速酪氨酸降解途径缺陷突变体sscd1的死亡;在长日照下,尿黑酸也能导致sscd1突变体的死亡;尿黑酸处理上调拟南芥野生型、酪氨酸降解缺陷突变体sscd1中MAAI和HGO的表达,其中MAAI表达在sscd1突变体中的上调幅度更大。以上结果说明,外源尿黑酸处理确实可以激活植物体内酪氨酸降解途径,而且植物中酪氨酸降解途径在长日照下不会被抑制。此外,研究结果进一步证明酪氨酸降解途径中间代谢产物的积累可导致sscd1突变体的死亡。