小鼠骨髓来源肥大细胞的培养及鉴定

目的:探讨小鼠骨髓来源肥大细胞体外大量培养及鉴定方法。方法:采用IL-3(10 ng/mL)和不同浓度的SCF联合刺激小鼠骨髓细胞,培养四周,采用普通光学显微镜观察细胞形态,牛鲍氏血细胞计数板进行细胞计数,甲苯胺蓝染色观察其胞浆颗粒物质,流式细胞仪检测细胞表面CD117和FcεRI的表达情况,β-己糖苷酶释放试验评估肥大细胞活化能力。结果:培养条件为10ng/mL IL-3和20 ng/mL SCF时,悬浮细胞数目能达到1×10~8细胞,其中CD117和FcεRI双阳性细胞比例达90%以上;甲苯胺蓝染色可见细胞胞浆含有大量紫红色颗粒;细胞经IgE-DNP致敏及DNP-HSA激发后,β-己糖苷酶释放率明显增加,且SCF能促进肥大细胞释放β-己糖苷酶。结论:采用10 ng/mL IL-3和20 ng/mL SCF诱导骨髓细胞能够获得大量高纯度的小鼠骨髓来源肥大细胞,为肥大细胞特性及功能学研究提供了基础。