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邻近标记作为近些年发展起来的一项检测活细胞内蛋白互作关系和亚细胞结构蛋白组的新型技术, 已成功应用于多种动植物体系的研究。该技术通过给诱饵蛋白融合一个具有特定催化连接活性的酶, 在酶的催化作用下将小分子底物(如生物素)共价连接到酶邻近的内源蛋白, 通过富集和分析被标记的蛋白可获得与诱饵互作的蛋白组。经定向进化产生的生物素连接酶TurboID具有无蛋白毒性及催化效率高的优势。利用TurboID介导的邻近标记技术分析感兴趣蛋白的邻近蛋白组, 可研究细胞内瞬时发生或微弱的蛋白互作网络, 进而解析复杂的生物学过程。该文详细描述了在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中基于TurboID的邻近标记实验方法及注意事项, 旨在为利用这一新技术研究植物蛋白互作关系提供参考。 相似文献
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本文研究了影响农杆菌介导的木薯基因转化的因素。结果表明,供试的4个菌种中,LBA4404(pBin9GusInt)及LBA4404(pTOK)瞬时表达效果较好。对农杆菌的诱导处理能增强瞬时表达效果,外植体的预处理对瞬时表达无影响,而外植体的预培养显著降低瞬时表达。所有供试的木薯品种都能被农杆菌侵染,但外植体的类型及生理状况对农杆菌的侵染力影响很大,成熟胚状体的子叶(萌发15d)及试管苗完全展开的叶片对农杆菌亲和性最高。四种筛选剂(kanamycin、hygromycin、phosphinothricin及geneticin)均表现出剂量效应且能同步抑制芽器官发生、愈伤生长及芽切段生根。 相似文献
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