人视黄醇结合蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其活性测定

视黄醇结合蛋白 (retinol- binding protein,RBP)是体内结合、转运维生素 A的重要载体蛋白 ,对生长、繁殖、视觉及维持上皮细胞分化状态至关重要 ,不但是临床营养支持蛋白质营养评价的最灵敏指标 ,而且可作为慢性肾病、严重肝病、甲亢等相关疾病的辅助诊断指标 .同时 ,RBP可作为疏水小分子结合蛋白家族构效关系研究的模型 ,具有重要的理论与应用研究价值 .我们已克隆出了它的 c D-NA[1 ] ,本文报道了人 RBP在大肠杆菌中的高效表达及其产物的初步纯化和活性测定 .1　材料与方法1 .1　材料含目的片段的克隆质粒 p GEM- RBP为本室构建 …     

qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达

奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg?的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA) 两个稀有密码子紧密相连（R区）,另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3 kJ/mol降低到最小-80.5 kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。     

qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达

奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA)两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3kJ/mol降低到最小-80.5kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。     

粉丝尾水蛋白营养评价

<正> 粉丝是我国的传统食品,主要原料多采用淀粉含量较高的薯类、高粱及豆类如绿豆、豌豆、蚕豆等,其蛋白质含量平均为20%左右。全国每年生产粉丝的数量十分可观,其中有大量蛋白质从粉丝尾水中流失,这不仅是一种浪费,而且污染环境,形成公害。粉丝尾水蛋白就是从生产粉丝的大量尾水中回收而得到的一种粗蛋白,其蛋白质含量为60%以上,是一项不可忽视的饲料蛋白资源。为合理开发利用粉丝尾水蛋白,本文对其进行了蛋白质营养效用的评价。     

谷氨酰胺对创伤后大鼠恢复的效果

本研究观察了谷氨酰胺（ＧＬＮ）对创伤大鼠恢复的影响,１７只ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成ＧＬＮ组（９只）和对照组（８只）,大鼠行创伤手术后,分别饲喂含或不含１．２％ＧＬＮ的合成饲料。实验中观察了动物体重恢复、血浆蛋白变化,实验第１４天,处死动物,测定伤口皮肤抗张力强度和胶原蛋白含量、淋巴细胞转化率、小肠粘膜核酸及蛋白质含量。用Ｓｔｕｄｅｎｔ＇ｓＴ检验分析结果差异的显著性。实验结果显示：两组动物的饲料摄入量、体重增长、血浆蛋白水平、氮平衡均无明显差别,但在实验结束时,ＧＬＮ组大鼠的小肠粘膜ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质含量显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）,同时其伤口皮肤抗张力强度、伤口胶原蛋白合成以及反映机体免疫功能的淋巴细胞转化率,亦有高于对照组的趋势,但无统计学差别（Ｐ＞０．０５）,揭示了ＧＬＮ具有保护肠道粘膜的作用,有益于大鼠创伤后的恢复。     

大肠杆菌莽草酸途径限速酶多基因盒的构建及基因替换

优化大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成代谢途径 ,构建莽草酸代谢途径限速酶的多基因盒PtacaroAaroCaroBkan .利用Red重组系统 ,在破坏整体调控基因csrA时 ,替换多基因盒 .Southern印迹证实 ,基因破坏和基因替换是成功的 .摇瓶发酵表明 ,构建的基因工程菌株比原始菌株基础产酸率提高了 4 5 3倍     

色氨酸操纵子研究进展

色氨酸只能由微生物和植物合成。催化色氨酸分支途径的酶由色氨酸操纵子编码。生物体内色氨酸合成受到严格调控,色氨酸操纵子发挥重要作用。本文综述色氨酸代谢途径及其调节,并对途径工程在色氨酸操纵子改造中的应用进行回顾。     

发酵液中 L-色氨酸的提取

L-色氨酸为必需氨基酸之一,在人体代谢有着重要的功用,是配制复合结晶氨基酸注射液的基本原料,其价格昂贵,国内尚供不应求。至今,除用化学合成生产色氨酸外,利用微生物发酵法生产 L-色氨酸已越来越受到人们的重视,国内外均有不少研究报告。根据中国科学院微生物研究所的研究报告,我们于1976年采用邻氨基苯甲酸为前体物发酵法,协作进行了 L-色氨酸的试制工作。当时,由于受到强烈地震的影响,试制工作未能园满结束,但在克服重重困难之后,仍然摸索了一     

代谢工程及其在产苯丙氨酸基因工程菌构建中的应用

本文对代谢工程的发展状况从研究方法,在医药、农业及环保中应用等几方面做了概括地介绍;从宿主的选择,加速限速反应,改变代谢流和生产程序的优化几方面较为详细地评述了代谢工程在苯丙氨酸基因工程菌构建方面的应用,并对代谢工程的未来发展进行了展望。