虹鳟胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中的融合表达及促有丝分裂活性

The preparation of recombinant rainbow trout insulin like growth factorsⅠ(IGF Ⅰ) andⅡ(IGF Ⅱ) using the His6 fusion polypeptide technique and the mitogen ic activities of these compounds were investigated. Rainbow trout IGF Ⅰand IGF ⅡB C A D domain cDNA were subcloned into expression vector pET 15b (Nova gen, USA) and expressed in host E. coli BL21 (DE3) as fusion polypeptides co ntai ning a stretch of 6 histidines at the N terminus (referred as His6 fusion polyp e ptide). The addition of IPTG (0 4 mmol/L) induced the expression of polypeptide s with a molecular weight of about 10 0 kDa. The expressed proteins were ammoniu m sulfate fractionally precipitated and further purified using a Ni 2+ His ·Bind R esin (Novagen, USA) affinity column. The reduced SDS PAGE showed that IGF Ⅰ w as of 80% purity and IGF Ⅱ was of 90% purity. The rainbow trout IGF Ⅰ His6 fusi on polypeptide showed dose dependent mitogenic effects on BALB/NIH3T3 cells in th e serum free medium culture, and rainbow trout IGF Ⅱ His6 fusion polypeptide al s o showed this kind of activity, but with lower potency. Taken together,these re sults indicated that the rainbow trout IGF Ⅰ and ⅡHis6 fusion polypeptides pr o duced in E. coli were biologically active, with IGF Ⅰ His6 fusion polypept ide of higher potency.     

雄烯二酮和甲基睾酮诱导雄性日本鳗鲡性腺发育的作用

多次埋植雄激素雄烯二酮（ADSD）或甲基睾酮（MT）均可促进雄性日本鳗鲡（Anguilla japonica)性腺发育成熟,明显提高脑和垂体mGnRH,垂体GtH含量,埋植3次后,MT处理组的GSI及垂体GtH含量显著高于ADSD处理组,MT处理组血清GtH含量在第1次埋植后显著升高,而ADSD处理组在第4次埋植后才显贰高于对照组。这些结果表明：埋植ADSD和MT可反馈作用于雄性日本鳗鲡脑和垂体,促进GnRH和TtH的合成和分泌,进一步诱导精巢发育。而且MT的作用效果较ADSD快。     

生长激素受体的研究进展

生长激素（GH）在促进动物生长、发育等代谢过程中起着重要作用,GH发挥生理作用的第一步是与靶细胞膜表面的生长激素受体（CHR）结合。现已基本阐明了CHR的结构及由CHR介导的信号转导途径,对GHR基因表达调节的机制也有了一定的了解。GHR是由约620个氨基酸组成的单链跨膜糖蛋白,其胞外区、跨膜区及胞区内分别由约245、25及350个氨基酸组成。由GHR介导的信号转导途径主要有：①酪氨酸激酶系统;②蛋白激酶C途径;③胰岛素受体底物途径。营养状况及GH等内分泌因子对GHR的表达也有调节作用。     

黑鲷生长激素放射受体分析法的建立及其受体组织的分布

利用黑棘鲷 (Acanthopagrusbutcheri)生长激素 (brGH )作为配体 ,建立了黑鲷 (Sparusmacrocephalus)生长激素受体放射受体分析法 (RadioreceptorAssay ,RRA)并分析其组织分布特征。在 2 5℃下 ,12 5I brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的特异性结合具有如下特点 :(1)时间依赖性　特异性结合达最大结合量一半的时间 (Ta1/ 2 )为 10 4h ,结合达到平衡状态需 2 0h ;激素 受体复合物的解离在 3h之内最快 ,2 4h后仅解离约40 % ,表明激素 -受体复合物的结合仅具部分可逆转性 ;(2 )可饱和性　12 5I brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的特异性结合随着膜蛋白浓度或12 5I brGH加入量的上升而呈逐渐上升并达到饱和状态的趋势 ;(3)可取代性　12 5I brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的特异性结合可被非标记brGH竞争性地取代 ,将特异性结合取代 5 0 % (ED50 )所需非标记brGH约为 3 8ng ,非标记重组金鱼生长激素 (rgfGH)及人生长激素 (hGH)对12 5IbrGH的竞争性取代能力明显较brGH低 ,而重组金鱼催乳素 (rgfPRL)、羊催乳素 (oPRL)在该系统中几乎无交叉反应。Scachard作图分析表明黑鲷肝细胞膜蛋白存在brGH单一的高亲和结合位点 ,Ka为 (3 49± 0 2 4)× 10 10 (mol/L) -1,Bmax为 146 8± 10 6fmol/mgprotein。结果表明 ,brGH与黑鲷肝细胞膜蛋白的     

饥饿和再投喂对草鱼鱼种生物化学组成的影响

分析了饥饿１５天和再投喂２１天的草鱼鱼种肝脏和肌肉生物化学组成的变化，结果表明：（１）饥饿降低白肌ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，蛋白质含量和肝脏ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，使肝脏蛋白质含量升高，再投喂后，肝脏ＲＮＡ／ＤＮＡ比值，蛋白质含量和白蛋白质含量均恢复至正常投喂组水平，白肌ＲＮＡ／ＤＮＡ比值升高并显著高于正常投喂组水平；（２）饥饿状态下，肝脏和肌肉的脂类含量降低，水含量升高，再投喂后，肝脏和肌肉的脂类含量升高     

EGFR靶向药物与化疗联合治疗恶性肿瘤进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor EGFR)可以在多种恶性肿瘤细胞中表达,针对此靶点的靶向药物主要有单克隆抗体及酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors TKIs)。本文通过广泛查阅国内外相关文献,对EGFR靶向药物机制及其与传统化疗药物联合应用从基础研究到临床研究进行综述,讨论二者联合应用的前景及研究方向。     

肺炎克雷伯菌耐药性与I类整合子关系的研究

目的检测I类整合子在肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法采用K—B纸片扩散法对127株肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;并用WHONET5．6软件分析菌株药敏情况;采用聚合酶链反应（PCR）分析127株肺炎克雷伯菌株的I类整合子。并对I类整合子阳性株与阴性株的耐药性进行对比分析。结果127株菌中有53株（41．70％）含有I类整合子,I类整合子阳性菌株对氨基糖苷类、喹诺酮类及大多数B一内酰胺类的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论I类整合子在肺炎克雷伯菌临床分离株存在较广,含有I类整合子的肺炎克雷伯菌更易获得耐药性。     

均匀设计优化太行菊SRAP-PCR反应体系

为探索适宜太行菊的SRAP-PCR反应体系,采用两轮均匀设计试验,对SRAP-PCR反应体系中模板DNA、引物和2×Taq MasterMix的用量进行优化。结果表明:在10μL SRAP-PCR反应体系中,含模板DNA 1.3μL,正反引物0.35μL,2×Taq MasterMix 5.3μL。在此最佳条件下,利用Me1/em4引物对11株太行菊扩增的条带清晰、多态性好,表明此反应条件适合于太行菊的SRAP-PCR反应体系。     

定量测定黑鲷生长激素受体mRNA的液相杂交/RNase保护法

目的　建立液相杂交 核糖核酸酶保护测定 (RibonucleaseProtectionAssay,RPA)技术定量检测黑鲷(Sparusmacrocephalus)生长激素受体mRNA水平。方法　将黑鲷生长激素受体cDNA片断亚克隆至pGEM T载体 ,制备特异性的放射性反义RNA探针及正义RNA ,将反义RNA探针与正义RNA及样品总RNA进行液相杂交 ,用RNaseA和RNaseT1 降解杂交产物的单链RNA ,双链杂交体得到保护 ,然后检测杂交体的分子大小及放射强度。结果　检测出了黑鲷生长激素受体反义RNA探针与正义RNA及样品总RNA的特异性杂交片断 ,由此建立了定量测定黑鲷生长激素受体mRNA的液相杂交 RNase保护法 ,并采用该方法在黑鲷的多种组织中检测出了生长激素受体基因的表达 ,表达水平在肝脏中最高。该结果与我们曾采用生长激素放射受体分析法对黑鲷生长激素受体所研究的结果相吻合。结论　为进一步深入研究鱼类生长激素受体分子内分泌的调控理论提供了有力手段。