蛋白酶的研究和应用

蛋白酶是水解蛋白质的一群酶类。它是生命活动中不可缺少的水解酶之一,在工、农、医等方面有着重要的应用。远在三千年前人们对酶的本质还没有了解时,我们的祖先就已经把它用于制酱等的技术中。1908年德国人Rhm(雷姆)开始利用胰酶制剂进行鞣制皮革等。1930年Northrop制     

康氏木霉纤维素酶系中C_x酶多分子型的分离纯化及某些性质

从康氐木霉(Trichoderma k(?)ningii)白色变异株As 3.4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组C_x酶(C_(x1) C_(x2) C_(x3) C_(x4))。分离步骤包括Sephadex G-75凝胶过滤,DEAESephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharose亲合层析,SE-Sephadex C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。C_(x1)与C_(x2)的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。C_(x2)—C_(x4)的分子量相同而所带电荷不同。纯化的C_(x1)—C_(x4)经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上C_(x2)>C_(x3)>C_(x1)>C_(x4)。     

产β-葡聚糖酶菌种T199的选育及发酵条件

A mutant strain T199 producing about 8 times as much β-glucanase as its parent strain trichoderma kningii T3 was obtained by treatment with ultraviolet light and N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine.Fermentation was conducted in 250mL flask,each containing 30mL of medium consisted of 5% corn cob powder,3% wheat bran and 1.4% nitrogen source No.10 ((NH 4) 2SO 4 10%,Peptone 20%,Yeast extract 15%).The optima culture conditions were as below:initial pH5.0,30℃,shaking speed 280r/min,and cultivation time 5d.En…     

巨大芽孢杆菌BP931胞外青霉素G酰化酶的产生条件

研究了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP 931胞外青霉素G酰化酶的产生条件。菌在由葡萄糖0.7％,氮源1号0.5％,酵母膏1.0％和苯乙酸0.8％组成的液体培养基(灭菌前pH9.0,灭菌后pH8.0)中,28℃振荡培养44h。以6-硝基-3-苯乙酰胺基苯甲酸为底物,培养滤液酶活力为9.0IU/ml。诱导物苯乙酸于培养6h后加入,酶活力可以提高到11.0IU/ml。Ca²⁺、Al³⁺、Sn³⁺、Mn²⁺和Fe²⁺离子降低酶的形成;Cu⁺和C0²⁺离子显著抑制菌生长,降低酶的形成;Zn²⁺,Cd²⁺和Hg²⁺离子完全抑制菌生长和酶形成。     

尖镰孢青霉素V酰化酶的纯化及性质

通过硫酸铵沉淀、硅藻土吸附、DEAD-纤维素离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤,由尖镰孢(Fusarium oxysporum)FP941培养滤液中得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的青霉素V酰化酶。酶作用最适pH为7.0,最适温度为50℃。酶在pH6.0—8.0和42℃以下稳定。酶作用青霉素V的米氏常数Km为4.65×10~(-3)mol/L;苯氧乙酸是酶的竞争性抑制剂,抑制常数Ki为23.87×10~(-3)mol/L;6-氨基青霉烷酸是酶的非竞争性抑制剂,抑制常数Ki为30.01×10~(-3)mol/L。某些金属离子对酶有抑制作用,Fe~(2+)最强,其次是Hg~(2+)和Cu~(2+)。用SDS凝胶电泳测定酶亚基分子量为77600;用分子筛测定自然酶分子量为148000。     

药用中性蛋白酶的研究

枯草杆菌(Baceillus subtilis) AS 1.398中性蛋白酶的粗酶(5万u／g),用自来水(1：10)抽提12小时,在这抽提液中加入20％(v／v)CaCl2溶液(在100ml水中加60g无水CaCl2)：再加25％固体硫酸铵使酶沉淀,过滤后得酶饼,用0．005MpH7．2磷酸缓冲液溶解,经Sephadex G-25柱脱盐,冷冻干燥得片状粉末,含酶活60一100万u/g,纯度提高4倍,本制剂具有较强的抗炎消肿及溶解纤维蛋白的作用。     

特异腐质霉中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因的克隆及表达*

利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicolainsolens)H31-3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的cDNA,将其插入到表达载体pGAPZαA中,重组质粒经线性化,电击转化毕赤酵母(Pichiapastoris)菌株GS115,筛选到分泌表达重组EGⅡ的毕赤酵母工程菌株。SDS-PAGE检测结果表明,重组EGⅡ在酵母中得到了特异性表达,表达产物的表观分子量约为55kD,同时对工程菌株的发酵条件和重组EGⅡ的性质进行了初步研究。     

特异腐质霉中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因的克隆及表达

利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉（Humicola insolerts）H31-3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因egl2的cDNA,将其插入到表达载体pGAPZαA中,重组质粒经线性化,电击转化毕赤酵母（Pichia pastoris）菌株GS115,筛选到分泌表达重组EGⅡ的毕赤酵母工程菌株。SDS-PAGE检测结果表明,重组EGⅡ在酵母中得到了特异性表达,表达产物的表观分子量约为55kD,同时对工程菌株的发酵条件和重组EGⅡ的性质进行了初步研究。     

食品用果胶酶的制备

以黑曲霉cP-85211菌株液体深层发酵滤液为材料,采用超滤-乙醇沉淀方法,制备出高酶活力的粉剂果胶酶。试验了乙醇添加量、温度、pH等对酶沉淀的影响,进行了果汁澄清等试验。     

特异腐质霉纤维素酶的研究

由腐植土中分离到一株嗜热真菌,经鉴定为特异腐质霉(Humicola insolens Cooney etEmerson)。研究了这株菌纤维素酶的产生条件和一般性质。菌在含麦麸5％、NaNO0.3％的液体培养基(灭菌前pH7.5,灭菌后pH7.2)中,于45℃培养4天,以羧甲基纤维素钠为底物,每ml滤液酶活力为20个单位。酶作用的最适条件为:pH6.0,温度为65—70℃。该纤维素酶是一种耐热酶,热稳定性较强,70℃保温5分钟后,酶活力剩余88％。底物对该酶的热钝化有较强的保护作用,无底物存在条件下,70℃保温6小时后,酶活力仅剩余1％,而在同样的处理温度和时间,在有底物存在条件下,酶活力可剩余30％。该酶在45℃保温15小时的条件下,pH稳定范围为6.0—9.0。