转基因枸杞中蛋白酶体糜蛋白酶样活性的研究

利用提取的转基因枸杞和正常枸杞蛋白与蛋白酶体的特异性荧光底物Suc-LLVY-AMC室温孵育,于360nm（激发光）/460nm（发射光）波长下测定荧光值的方法,研究了转基因枸杞和正常枸杞中蛋白酶体糜蛋白酶活性的差异及其特异性抑制剂MG115对枸杞中蛋白酶体活性的影响。结果表明表达H IV壳体蛋白的转基因枸杞蛋白酶体活性是空载体对照转基因枸杞蛋白酶体活性的3.6倍,是正常枸杞的4.2倍。10μM的MG115对表达H IV壳体蛋白的转基因枸杞蛋白酶体活性抑制率为87%,携带空载体对照的转基因枸杞抑制率为74%,而对正常枸杞抑制率仅为8.6%;50μM的MG115抑制作用与10μM的相比没有明显变化。这一结果将为利用蛋白酶体抑制剂提高转基因枸杞悬浮细胞H IV-1CA含量的研究提供理论依据。     

转基因枸杞表达HIV-1壳体蛋白病毒样颗粒疫苗表达载体的构建

利用PCR技术扩增出人免疫缺陷病毒HIV-1MA₄-CA融合基因,将其克隆到pGEM-T载体中,测定其核苷酸序列,并推导其氨基酸序列。该基因全长为450bp,与已发表的HIV-1的全序列基因(AF324493)完全同源,编码一个含150个氨基酸残基的蛋白质。将该基因与分泌型表达载体pCAMBIA1305.2连接,同时将水稻中富含甘氨酸蛋白的信号肽序列(GRP)引入MA₄-CA融合基因,构建了含MA₄-CA基因的植物分泌表达载体pCAMBIA1305.2-MA₄-CA。     

转基因植物与食用疫苗

转基因植物与食用疫苗宋长征,韩金祥,王美玲（山东省医学科学院生物技术中心,济南）转基因植物技术是随着ＤＮＡＩ组、基因的遗传转化、植物的组织培养、目的基因的整合与表达的检测等技术手段的建立而发展起来的生物技术。利用转基因植物作为生物反应器,把外源基因引...     

重组HIV-1壳体蛋白在转基因枸杞根系中的分泌表达

P24壳体蛋白（capsid, CA）是HIV¬-1早期感染的一个重要标志.用含有植物表达载体pCAMBIA 1305.2- MA4-CA（包含GRP信号肽和MA4-CA融合基因）的农杆菌菌株侵染枸杞,将转有MA4-CA融合基因的转化株诱导生根，并进行毛状根的培养; western blot证实根系及培养液中的MA4-CA融合蛋白以二聚体的形式存在，分子量为50 kDa；免疫组织化学显示，CA定位在细胞浆、细胞壁和细胞间隙中，充分证实了利用GRP信号肽可以引导重组蛋白分泌表达。建立枸杞中HIV-1壳体蛋白的根分泌表达系统，为研究植物HIV-1 CA-病毒样颗粒（VLPs）疫苗奠定基础。     

用壳聚糖/海藻酸钠制备干扰素-τ缓释微囊

目的:用壳聚糖和海藻酸钠为原料,制备干扰素-τ微囊,希望发展一种口服干扰素制剂。方法:使用注射器手工滴制的方法,在滴加过程中,速度和距离是影响囊形的主要因素。结果:壳聚糖/海藻酸钠微囊法应用于干扰素-τ药物的包封,其制备简单快速,干扰素-τ包封率很高,并且具有肠溶缓释作用。结论:壳聚糖/海藻酸钠微囊有望用于制备干扰素-τ或其他肽类药物的口服制剂。     

重组干扰素-τ在大肠杆菌中的表达与纯化

目的:探讨干扰素(IFN)-τ在大肠杆菌中的表达及纯化。方法:含有IFN-τ基因的pBV220表达质粒转化大肠杆菌BL21,于42℃温控诱导重组菌表达IFN-τ。经过包涵体溶解、DEAE离子交换层析、硫酸铵沉淀及梯度透析,使重组IFN-τ获得纯化和复性。结果:诱导后的表达产物经SDS-PAGE分析,有相对分子质量约21000的条带。纯化复性后目的蛋白纯度可达90%。结论:工程菌可稳定高效地表达IFN-τ。硫酸铵沉淀结合阴离子交换是一种简便高效的纯化方法,可获得较高纯度的IFN-τ。     

HIV-1衣壳蛋白在转基因枸杞中表达的免疫组织化学定位

目的:研究转基因植物中重组蛋白的细胞定位,有助于进一步了解转基因枸杞中HIV-1衣壳(CA)蛋白融合蛋白的分泌表达途径。方法:利用含有MA4-CA融合基因的农杆菌转化枸杞,转化植株获得再生。采用免疫组织化学方法对转基因枸杞表达的CA融合蛋白进行初步定位。结果:免疫组织化学定位表明,在转基因枸杞愈伤组织中,HIV-1CA主要在细胞浆、细胞壁和细胞间隙中表达。结论:免疫组织化学结果初步证明了CA融合蛋白在转基因枸杞中的表达分布。     

植物表达分泌蛋白的运输及定位

分泌途径主要由内膜系统构成,内质网和高尔基体对于分泌蛋白的运输及定位具有重要作用。分泌蛋白的运输包括顺行途径和逆行途径。蛋白质通过质流和受体介导的途径运输到小泡中。在植物中,分泌蛋白的运输主要通过小泡和相连的小管来完成。分子伴侣和质量控制不仅能优化新合成蛋白的折叠和组装,而且去除了有折叠缺陷的蛋白。分泌蛋白的定位需要特定的信号肽,而高尔基体固有蛋白以依赖跨膜长度的方式,沿着分泌途径的细胞器分布。本文对植物表达分泌蛋白的分泌途径及定位、相关的分子伴侣和质量控制进行了综述。     

离子交换色谱法对大肠杆菌表达的人重组骨形态发生蛋白-7的纯化

带有BMP 7基因的大肠杆菌可以用来高量表达重组的人骨形态发生蛋白 7。升温诱导表达后 ,每升培养液大约可得到菌体湿重 3g ,其中目的蛋白约占菌体总蛋白量的 40 %。裂解离心 ,用低浓度变性剂洗涤初步纯化包涵体 ,上清中无目的蛋白损失 ,目的蛋白纯度提高到 60 %,将包涵体溶解于高浓度变性剂溶液中 ,然后在不同条件下用离子交换色谱法对变性状态下的蛋白质进行纯化 ,绝大部分杂蛋白被除去 ,目的蛋白纯度达 95 %以上 ,改变条件 ,可以减少rhBMP 7损失。并做Westernblot对目的蛋白进行特异性鉴定。