Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的生物学功能研究

Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白（phosphatidylethanolamine-binding protein,PEBP）家族,广泛存在于各种生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路的调节作用。RKIP可以与Raf-1结合,从而抑制MAPK信号转导通路,并参与了对G蛋白偶联受体信号通路和NF-κB信号通路的调控。RKIP在膜的生物合成、精子发生、神经发育和细胞凋亡等生理过程中发挥重要作用,并参与了老年痴呆症及糖尿病等的病理过程。此外,近年来的研究表明RKIP是一个新的转移抑制因子,可以抑制前列腺癌、人乳腺癌和黑色素瘤细胞的转移,并已成为一个新的前列腺癌诊断标志物。     

前纤维蛋白影响花粉肌动蛋白体外聚合分析

利用超速离心沉淀及紫外分光光度测定等技术 ,研究了不同比例的玉米 (ZeamaysL .)花粉内源前纤维蛋白对玉米 (ZeamaysL .)花粉肌动蛋白 (前纤维蛋白与肌动蛋白摩尔数比分别为 2∶1,1.5∶1,1∶1,0 .5∶1,0 .1∶1)聚合与解聚的影响。初步实验结果显示 ,前纤维蛋白在各种比例下均可与Mg_ATP_肌动蛋白结合并抑制肌动蛋白的聚合作用。这种抑制作用随着前纤维蛋白比例的增加而增大。其解离常数值 (Kd)为 (1.30± 0 .33) μmol/L。在本实验条件下尚未见到有前纤维蛋白促进植物肌动蛋白聚合的作用 ,表明玉米花粉前纤维蛋白具有螯合G_肌动蛋白的作用。     

Autotaxin-LPA轴在肥胖及其相关疾病中的作用

溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)是一种结构简单的生物活性脂质分子,可通过与细胞膜上的LPA受体(lysophosphatidic acid receptors,LPARs)结合参与调控细胞生命活动,在多种生理和病理过程中发挥作用.分泌型糖蛋白Autotaxin (ATX)具溶血磷脂酶D (lysophosphalipase D, lysoPLD)活性,能够催化溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)水解生成LPA,这是循环系统中LPA的主要来源.近几年的研究表明,ATX在成熟脂肪细胞中高表达,ATX-LPA轴与肥胖及肥胖个体的糖脂代谢紊乱有密切的关系,被认为是肥胖相关疾病治疗的新靶点.本文综述了ATX-LPA轴在肥胖、胰岛素抵抗和非酒精性脂肪肝病中的作用及作用机制,为相关领域的基础研究和疾病防治提供新的思路和策略.     

新基因 P15RS 表达产物在人胃癌细胞细胞周期中定位的研究

P15RS是在p15INK4b高表达的人黑色素瘤细胞MLIK6 G1期中发现和克隆的新基因.研究表明,该基因可能在G1期作为增殖负调因子起作用.为了观察P15RS基因产物在细胞中的定位,构建了表达P15RS-EGFP融合蛋白的真核表达质粒pEGFP-P15RS.用绿色荧光蛋白GFP作为报告基因,以人胃癌细胞BGC-823为实验模型,将pEGFP-P15RS转染BGC-823细胞.实验表明,P15RS基因表达产物在G1期、S期和G2期均定位于细胞核内,未见在核仁中分布,M期凝缩的染色体上未见.因此,P15RS可能定位在核质中.     

三氟拉嗪通过诱导p16INK4a抑制BGC-823细胞增殖

为探索三氟拉嗪（trifluoperazine, TFP）抗肿瘤作用机制,对胃癌BGC-823细胞进 行TFP（5、10 μmol/L）处理后,利用计数法、BrdU脉冲标记法、Western印迹等方法从细胞形态、细胞增殖、S期细胞百分比以及相关因子表达水平等方面进行分析. 结果显示,TFP处理后,细胞形态发生明显改变,细胞增殖受到明显抑制且呈时间计量 效应关系;S期细胞比例下降;p16INK4a表达水平升高.为进一步研究TFP诱导 p16INK4a表达的分子机制,本实验采用插入p16INK4a启动子片段及荧光素酶报告系统 的载体pGL3-Basic-p16INK4a（-967~-165 bp）,研究了TFP在转录水平对p16INK4a启 动子活性的影响.结果表明, TFP能够提高p16INK4a的启动子活性.上述结果提示,TFP 通过诱导p16INK4a表达抑制BGC-823细胞增殖.     

原核生物类泛素蛋白Pup-蛋白酶体系统的研究进展

真核泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的重要机制,参与细胞生理功能调控,因此泛素-蛋白酶体通路的机制和功能研究备受关注.20世纪80年代,人们就发现放线菌中存在原核蛋白酶体,但是对于原核蛋白酶体的功能和作用机理长期以来了解甚少.2008年,Pearce等在结核分枝杆菌中发现了原核类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup).在Dop、PafA、Mpa等辅助因子的作用下,Pup可以共价标记多种功能蛋白,并介导被标记蛋白质通过蛋白酶体降解,Pup-蛋白酶体系统的发现揭示了原核生物中一个崭新的蛋白质降解机制.Pup-蛋白酶体系统的靶蛋白涉及物质中间代谢、信号通路、毒性和抗毒性因子、细胞壁和细胞膜组分等多个方面,并且与结核分枝杆菌的致病性相关,被认为是新的结核病治疗药物靶点.本文就原核Pup-蛋白酶体系统的作用机理及其功能的研究进展作一综述.     

活细胞内亚细胞结构蛋白质组学研究新技术——几种邻近标记策略的应用及比较

真核细胞内多种无膜及有膜细胞器为各种生物学过程的发生提供场所.被膜细胞器通过它们之间的膜接触位点所进行的信息交流和物质交换是维持生命活动所必需的.绘制活细胞中细胞器或膜接触位点等处的蛋白质组图谱,将有助于解析这些部位的生物学功能及作用机制,并为研究细胞器相互作用提供基础.但由于无膜细胞器或膜接触位点很难分离纯化,传统的生化方法难以系统解析其中的蛋白质组.最近报道的几种基于酶类的蛋白质邻近标记技术,则为系统分析上述空间受限的蛋白质组这一难题提供了有效的解决方案.通过将能催化产生活性自由基(最常见的是生物素及其衍生物的自由基)的酶连接到目标蛋白上,可对其邻近的蛋白质组进行共价标记,从而使后者的分离和鉴定成为可能,并可以运用于活细胞中的动态标记.我们在此综述了几种最新的邻近标记策略的原理及应用,并对它们的优势与局限性进行了比较,以期为细胞器互作的蛋白质组学研究提供参考.